中国博士后科学基金(201003073)
- 作品数：12 被引量：82H指数：6
- 相关作者：程卫东卫东锋张李峰李雪嫣苏刚更多>>
- 相关机构：兰州大学北京师范大学中国中医科学院更多>>
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- 红芪多糖对S180细胞体内化疗增效作用的差异蛋白质研究被引量：3
- 2012年
- 目的:研究红芪多糖对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质。方法:以环磷酰胺和红芪多糖联合环磷酰胺治疗S180荷瘤小鼠14天后测定小鼠免疫器官指数及抑瘤率,利用双向电泳分离提取的瘤细胞总蛋白,考染显色后应用PDQuest8.0软件分析电泳图谱,找出差异表达的蛋白质。结果:与环磷酰胺(20 mg/kg)组相比,红芪多糖(200 mg/kg)联合环磷酰胺(20 mg/kg)可明显抑制小鼠S180瘤生长(P<0.05),显著减轻环磷酰胺所致免疫器官指数的下降(P<0.01);建立了背景清晰、重复性好、分辨率高的S180瘤细胞双向电泳图谱,环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组蛋白质点数分别为:776±22和721±16;平均匹配率分别为:91.13%和89.37%。比较分析环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组双向电泳图谱,筛选出差异明显的蛋白质点28个,其中8个表达上调,19个表达下调,1个仅在环磷酰胺组表达。结论:红芪多糖联合环磷酰胺可减轻其对S180荷瘤小鼠的免疫抑制作用,增强环磷酰胺对S180瘤细胞的化疗效果,其作用可能与筛选出的28个差异蛋白质点有关,对这些差异蛋白质点的鉴定将为揭示红芪多糖的化疗协同增效作用提供实验依据。
- 卫东锋赵春燕韦艳霞程卫东张李峰苏刚
- 关键词：红芪多糖环磷酰胺双向凝胶电泳差异蛋白质
- 红芪多糖对人肺腺癌A549细胞蛋白表达图谱影响的研究被引量：12
- 2014年
- 目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharide,HRP)对人肺腺癌A549细胞蛋白双向电泳图谱的影响。方法:以300μg/ml红芪多糖体外作用于A549细胞后提取细胞总蛋白,使用丙酮沉淀法和2-DE Cleanup Kit对蛋白进行纯化。采用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,银染显色并扫描凝胶图片,使用PDQuest 8.0图像分析软件对不同处理组双向凝胶电泳图谱进行对比分析,筛选出差异蛋白点,并分析差异蛋白的理论等电点和分子量。结果:应用双向电泳方法建立了A549细胞分辨率较高和重复性较好的蛋白表达图谱。红芪多糖处理可使A549细胞2-DE图谱中35个蛋白点发生明显变化,其中24个表达上调,8个表达下调,3个仅在对照组中表达,并分析得出了35个蛋白点的理论等电点和分子量。结论:红芪多糖可使人肺腺癌蛋白表达图谱发生明显改变,应用蛋白质组学筛选出的35差异蛋白点可能是红芪多糖抑制人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的关键调控蛋白质。
- 李菲卫东锋张俊英程晨程卫东苏刚
- 关键词：红芪多糖A549细胞双向电泳蛋白表达谱差异蛋白质
- 红芪多糖对S_(180)瘤细胞化疗协同增效作用的蛋白质组学分析被引量：5
- 2012年
- 目的:分析红芪多糖(Radix Hedysari polysaccharides,HPS)对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质。方法:以环磷酰胺(Cyclophsphamide,Cy)和HPS联合Cy治疗荷瘤小鼠后提取瘤细胞总蛋白,用双向电泳对蛋白质进行分离,使用PDQuest 8.0软件对双向电泳图谱进行差异分析,通过质谱技术鉴定差异明显的蛋白点,并用蛋白免疫印迹方法对其中1个蛋白质进行验证。结果:HPS联合Cy组中有24个蛋白点发生明显改变,经质谱和Mascot软件分析,成功鉴定了5个蛋白质,分别为热休克蛋白84(HSP90β)、载脂蛋白A、白蛋白、热休克蛋白β1(HSP27)、未命名蛋白,其中1个高表达,4个低表达。蛋白印迹验证与蛋白质组结果一致。结论:通过蛋白质组学技术,发现了HPS对S180小鼠瘤细胞化疗增效作用的靶标蛋白,这些蛋白质涉及能量代谢、氧化应激反应和凋亡信号转导。
- 卫东锋赵春燕程卫东韦艳霞张李峰苏刚
- 关键词：红芪多糖蛋白质组学
- 比较同一复方中用红芪与用黄芪对免疫抑制小鼠体液免疫的作用被引量：5
- 2012年
- 目的:比较红芪替换经典复方中的黄芪后对免疫抑制小鼠体液免疫的调节作用。方法:通过给小鼠注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,以相同剂量的红芪替换补中益气口服液、益气养血口服液、复芪止汗颗粒和玉屏风口服液中的黄芪后灌胃进行体内拮抗实验,测定小鼠脾脏指数、血清HC50、CD19+B淋巴细胞亚群以及血清IL-4含量。结果:环磷酰胺免疫抑制小鼠经各黄芪复方和红芪复方作用后小鼠脾脏指数、血清HC50、CD19+B淋巴细胞亚群及血清IL-4含量均出现不同程度的增加;其中含红芪的玉屏风水提物在提高环磷酰胺免疫抑制小鼠脾脏指数方面优于含黄芪的玉屏风口服液,其余各复方经比较虽然红芪复方作用稍强于黄芪复方,但差异无统计学。结论:红芪替换黄芪配伍其他药物后与原方相比在调节体液免疫方面具有相似作用。
- 卫东锋张李峰程卫东桂曼曼李雪嫣韦艳霞鲍英存
- 关键词：红芪免疫抑制体液免疫
- 红芪多糖3促进小鼠胸腺细胞增殖的差异蛋白质点分析被引量：3
- 2011年
- 目的:寻找红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织差异表达的蛋白质点,探讨HPS-3提高免疫力的分子生物学水平机制。方法:正常小鼠给予不同剂量的HPS-3,测定胸腺、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力,并运用双向凝胶电泳技术对胸腺组织蛋白进行分离,银染显色、Image Scanner获取凝胶图谱后,通过PD Quest软件对其进行分析、寻找差异蛋白质点。结果:HPS-3(50mg/kg)对小鼠胸腺指数、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力无显著影响,而100 mg/kg HPS-3能显著增加小鼠胸腺、脾脏指数,增强T淋巴细胞增殖反应。实验所得2-DE图谱经PD Quest软件分析得出以下结果:空白组分离得到1129个蛋白点,HPS-3组得到1167个蛋白质点,仅在空白组出现的蛋白质点有316个,仅在HPS-3组出现的蛋白点有354个,两组共有的蛋白点中表达量差异两倍以上的有192个。结论:HPS-3能促进胸腺细胞增殖,显著影响小鼠胸腺细胞蛋白质表达。
- 韦艳霞卫东锋赵春燕程卫东张李峰苏刚
- 关键词：红芪多糖胸腺双向电泳差异点
- 比较含红芪与含黄芪的玉屏风散煎剂含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响被引量：5
- 2013年
- 目的:应用中药血清药理学方法,观察含红芪与含黄芪玉屏风散含药血清对老龄小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。方法:用相同剂量的红芪替换玉屏风散中的黄芪后,应用透射电镜、流式细胞仪、Hoechst33258荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和免疫细胞化学法观察两方对老龄小鼠脾淋巴细胞超微结构、周期、DNA ladder、凋亡及Fas、FasL蛋白表达的影响。结果:与青龄组比较,老龄小鼠中凋亡的脾淋巴细胞数量增加,主要表现为核固缩;细胞周期中在非凋亡细胞二倍体峰(G1)之前出现凋亡峰,凋亡率显著增加,出现典型的凋亡特征"DNA ladder",Fas、FasL蛋白表达增强。含红芪与含黄芪玉屏风(6g生药/kg)含药血清均可减少凋亡的脾淋巴细胞及核碎片数量,减小凋亡峰,使凋亡率明显降低,"DNA ladder"明显减少,细胞膜表面Fas、FasL蛋白表达明显减少,但红芪和黄芪组间比较无明显差异。结论:老龄小鼠脾淋巴细胞凋亡的发生率增加,含红芪与含黄芪玉屏风散含药血清均可改善老龄小鼠脾淋巴细胞体外培养下凋亡的发生。
- 张俊英张李峰卫东锋程晨程卫东鲍英存李雪嫣
- 关键词：红芪玉屏风散老龄小鼠脾淋巴细胞
- 红芪替换玉屏风口服液中的黄芪后对免疫抑制小鼠细胞免疫作用的比较研究被引量：8
- 2012年
- 目的:比较研究红芪替换玉屏风口服液中的黄芪后对免疫抑制小鼠细胞免疫调节作用。方法:通过给小鼠腹腔注射免疫抑制剂环磷酰胺致成免疫功能低下模型,以相同剂量的红芪替代玉屏风口服液中的黄芪灌胃进行体内拮抗实验,测定胸腺指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞的增殖能力、杀伤活性、T细胞亚群、血清IL-1β的含量。结果:玉屏风口服液和红芪替换黄芪的玉屏风水提物均可显著提高被环磷酰胺抑制的小鼠胸腺指数和脾脏指数;使巨噬细胞吞噬功能明显增加;并能拮抗环磷酰胺对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖、杀伤活性、T细胞亚群数量和IL-1β产生的免疫抑制作用。且红芪替换黄芪的玉屏风水提物提高被环磷酰胺抑制的小鼠脾脏指数和T淋巴细胞增殖能力优于玉屏风口服液。结论:红芪与防风、白术配伍后与玉屏风口服液相比在细胞免疫调节方面具有相似的作用,且在恢复脾脏质量和T淋巴细胞增殖方面优于玉屏风口服液。
- 张李峰程卫东桂曼曼李雪嫣卫东峰
- 关键词：红芪玉屏风口服液免疫抑制细胞免疫
- 中药多糖治疗老年性痴呆及其机制研究进展被引量：12
- 2014年
- 随着人口老龄化趋势的不断发展,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病率不断升高,对老年人身心健康造成较大危害,并累及其家庭。中药多糖由于具有抗炎、抗氧化、抗衰老、神经保护、免疫调节、改善线粒体能量代谢及抗凋亡等作用,其药理作用与AD的发病机制有所契合,因此在AD防治中已逐渐引起医药科研工作者的广泛关注。本文详细综述了中药多糖近5年来在防治AD中的药理作用及其机制,包括改善学习记忆能力、减缓Aβ(Amyloid beta protein)沉积、抑制细胞凋亡、改善中枢胆碱能系统、清除自由基、抗氧化、保护神经细胞和突触、改善能量代谢、改善tau蛋白过度磷酸化、抗焦虑等方面,以期为中药多糖在防治AD的应用提供理论依据和参考。
- 李菲卫东锋程卫东宋连猛庞大勇
- 关键词：中药多糖老年性痴呆学习记忆
- 红芪多糖对脑微血管内皮细胞氧化损伤保护作用的差异蛋白质研究被引量：19
- 2016年
- 目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharides,HRP)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(Human bain microvascular endothelial cells,HBMEC)氧化损伤模型的保护作用及对其蛋白表达谱的影响。方法:采用50μg/ml ox-LDL建立HBMEC氧化损伤模型,使用红芪多糖对细胞模型进行干预,药物作用24h后,采用MTT检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态。以40μg/ml的红芪多糖干预HBMEC氧化损伤模型24h后,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白并纯化。应用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,考马斯亮蓝染色后扫描细胞总蛋白图谱,使用PD Quest 8.0软件分析药物组与模型组间的差异蛋白点,应用质谱技术鉴定差异明显的蛋白点。结果:与氧化损伤模型组比较,红芪多糖组(40μg/ml)细胞存活率明显升高,细胞数目明显增多,细胞形态较模型组明显改善。红芪多糖组(40μg/ml)HBMEC细胞蛋白表达谱发生明显改变,分析得出11个差异蛋白点,采用质谱方法成功鉴定了7个差异蛋白质,分别为热休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、网腔钙结合蛋白、26S蛋白酶调节亚基、γ-烯醇酶、40S核糖体蛋白和78k Da葡萄糖调节蛋白,其中5个蛋白高表达,2个蛋白低表达。结论:红芪多糖对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤模型具有明显保护作用,其机制与调节内质网应激及能量代谢、清除自由基、抑制细胞凋亡及抗氧化应激密切相关。
- 杨杰卫东锋李晓东张占军吕晓云
- 关键词：红芪多糖脑微血管内皮细胞抗氧化应激差异蛋白质
- 红芪多糖3作用小鼠胸腺组织蛋白双向电泳技术的建立被引量：4
- 2012年
- 目的建立和优化红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法采用标准裂解法提取HPS-3 100 mg/(kg.d)灌胃14 d小鼠的胸腺组织总蛋白,后续进行三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和去脂蛋白纯化法获取胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条进行双向凝胶电泳,并对等电聚焦程序进行改良和优化,同时将去脂蛋白纯化法运用于A549细胞蛋白的纯化并进行双向电泳,银染色后进行凝胶图像比较。结果去脂蛋白纯化法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此去脂蛋白纯化法所得蛋白的双向电泳图谱显示更好的溶解性和重复性,此外在双向凝胶电泳(2-DE)时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化,使横向和纵向拖尾有明显改善,成功建立了背景清晰,蛋白分离良好、分辨率较高的胸腺组织蛋白的双向电泳体系。去脂蛋白纯化法同样适用于A549细胞蛋白提取纯化。结论建立了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白质组提取纯化的方法,采用去脂蛋白纯化法可以更有效地提取胸腺组织蛋白。利用优化后的实验方法,获得了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白2-DE图谱,为后续研究打下基础。
- 韦艳霞卫东锋程卫东赵春燕苏刚
- 关键词：红芪多糖胸腺双向凝胶电泳蛋白纯化
