浙江省医药卫生科学研究基金(2007B021)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：陈占红王晓稼邵喜英方永明曹江更多>>
- 相关机构：浙江省肿瘤医院浙江大学医学院附属第二医院浙江大学医学院附属邵逸夫医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人CYP19基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建被引量：1
- 2010年
- [目的]克隆人CYP19基因启动子PⅠ.3(-345～-234bp)、PⅡ(-517～-278bp)和PⅠ.7(-299～+81bp)片段,构建启动子荧光素酶报告基因载体。[方法]采用生物合成PⅠ.3(-345～-234bp)、PⅡ(-517～-278bp)和PⅠ.7(-299～+81bp)区域基因片段,通过HindⅢ和KpnⅠ酶切连接到pGL3-Basic载体上。[结果]测序验证pGL3-Basic-PⅠ.3,pGL3-Basic-PⅡ和pGL3-Basic-PⅠ.7构建成功。[结论]pGL3-Basic-PⅠ.3,pGL3-Basic-PⅡ和pGL3-Basic-PⅠ.7荧光素酶报告基因载体的成功构建,为进一步研究CYP19基因组织特异性表达奠定基础。
- 邵喜英陈占红黄健雷蕾冯建国苏丹王晓稼
- 关键词：CYP19基因启动子荧光素酶
- pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP真核表达质粒构建被引量：5
- 2011年
- 目的:构建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP与pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真核表达质粒,并观察pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒在MCF-7和Bcap-37细胞中的表达。方法:①采用RT-PCR技术扩增CYP19 cDNA,插入pcDNA3.1(+)载体中,构建pcDNA3.1(+)-CYP19表达质粒;酶切pcDNA3.1(+)-CYP19(304bp BamHⅠ)-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19质粒,构建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP表达质粒;②以pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒为模板,采用定点突变技术,构建pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP表达质粒;③pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒通过脂质体介导转染MCF-7和Bcap-37细胞,荧光显微镜观察其在细胞中的表达。结果:①酶切鉴定及测序验证pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP构建成功;②测序验证pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP构建成功;③在经转染的MCF-7和Bcap-37细胞中观察到较强的绿色荧光。结论:pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真核表达质粒已成功构建,并证实pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒能在MCF-7和Bcap-37细胞中表达,为进一步研究CYP19基因单核苷酸多态性的确切功能奠定基础。
- 邵喜英陈占红曹江方永明王晓稼
- 关键词：质粒CYP19基因真核表达质粒GFP
