国家自然科学基金(81001666)
- 作品数：21 被引量：334H指数：9
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- 金复康口服液诱导肺癌细胞A549凋亡的机制被引量：10
- 2018年
- 目的：研究金复康口服液（JFK）诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法：取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549,随机分为空白组和药物组,采用溴化四甲基偶氮（MTT）比色法,考察不同质量浓度JFK（0.3,1.5,3,7.5,15,30 g·L（-1））对A549细胞体外增殖能力的影响。通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响,利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法（Western blot）考察JFK对裂解DNA修复酶（cleaved PARP）,活化型半胱天冬酶-3（actived Caspase-3）,Wnt/β-联蛋白（β-catenin）,细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响,实验中设置空白组和药物组,药物组为A549细胞加入15,30 g·L（-1）JFK,分别干预24 h,30 min。结果：JFK在1.5-30 g·L（-1）呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖（P〈0.01）。JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15-30 g·L（-1）,其中JFK 30 g·L（-1）时抑制A549细胞的平板克隆最显著（P〈0.01）。与空白组比较,JFK 15-30 g·L（-1）可提高AnnexinⅤ和PI双阳细胞率,诱导A549细胞凋亡（P〈0.05）,且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达,并抑制β-catenin和cyclin D1在蛋白水平的表达（P〈0.05,P〈0.01）。JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平（P〈0.05）,同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平（P〈0.05）。结论：金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡,部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路,抑制β-catenin和cyclin D1,同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达。
- 蒋义鑫徐元周之毅章丹丹
- 关键词：金复康口服液
- 防己茯苓汤抗炎组分筛选及其机制分析被引量：10
- 2013年
- 目的研究防己茯苓汤(防己、黄芪、桂枝、茯苓、甘草)的抗炎活性组分及其作用机理。方法利用水煎、乙醇提取和有机溶剂萃取方法获得水/醇提取物和组分,利用脂多糖和IFN-γ刺激造成鼠巨噬细胞炎症模型,采用Griess法考察细胞中一氧化氮产量,FRAP法考察总抗氧化能力;Western Blot法考察诱导型—氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)蛋白的表达。结果和其它组分相比,乙醇-乙酸乙酯提取组分(EAFD)抑制亚硝酸盐的活性最强,其IC50最低,且对静息巨噬细胞的活力无影响。该组分能抑制iNOS(P<0.01)和COX-2(P<0.05)的蛋白表达,同时提高总抗氧化能力(P<0.01)。结论实验结果提示乙醇-乙酸乙酯提取组分是防己茯苓汤主要的抗炎活性组分,部分通过抑制炎症中关键诱导型合酶的蛋白表达,提高总抗氧化能力而发挥抗炎作用。
- 潘一峰杨晓露刘朵章丹丹
- 关键词：防己茯苓汤炎症活性组分诱导型一氧化氮合酶环氧合酶2分子机制
- 芪麝丸体外抗炎的机制被引量：2
- 2012年
- 目的:考察芪麝丸体外对小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型的抗炎机制。方法:干扰素γ(1×104U.mL-1)和脂多糖(100μg.L-1)协同诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞(1×105/mL)24 h造成炎症模型;Griess反应测定细胞上清液中一氧化氮(NO)产量;Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶(COX-2)的蛋白表达及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的活化情况。结果:芪麝丸(250,500,1 000 mg.L-1)呈剂量依赖性抑制细胞上清液中NO含量,且无细胞毒性。较模型组,经芪麝丸500,1 000 mg.L-1剂量处理后,iNOS蛋白表达从(1.00±0.06)下调至(0.61±0.07)和(0.02±0.15),(P<0.01),COX-2蛋白表达从(0.56±0.03)下调至(0.42±0.02),(0.30±0.03),(P<0.01)。胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平从(1.04±0.04)下调至(0.79±0.06),(0.73±0.10),(P<0.01)。p38磷酸化水平从(0.51±0.06)下调至(0.39±0.07),(0.29±0.15),(P<0.05),c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平从(1.05±0.03)下调至(0.65±0.02),(0.66±0.033),(P<0.01)。结论:芪麝丸部分通过抑制MAPK信号转导通路活化过程中关键蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、JNK和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)磷酸化,下调iNOS基因和蛋白的表达从而减少NO的产量,同时下调COX-2蛋白表达,而发挥其抗炎效果。
- 潘一峰杨晓露王建强章丹丹
- 关键词：炎症一氧化氮诱导型一氧化氮合酶分子机制
- miR-200c通过靶向细胞能量代谢和多种信号通路调控三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为被引量：7
- 2020年
- 目的:考察miR-200c对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞MDA-MB-231的增殖、凋亡和迁移的影响及其代谢相关的分子机制。方法:以过表达miR-200c的MDA-MB-231(miR-200c-231)细胞、无过表达miR-200c的阴性对照细胞miR-NC-231及其移植瘤裸鼠模型为研究对象,qPCR检测细胞和移植瘤组织中miR-200c及其他相关基因的表达水平,免疫组化技术分析瘤组织中Ki67阳性细胞数量,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blotting检测细胞及组织中增殖、迁移和代谢相关信号通路多种蛋白的表达,Seahorse能量代谢检测仪检测细胞的基础耗氧率(oxygen comsumpition rate,OCR)、细胞外酸度(extracellular acidification rate,ECAR)和代谢表型变化,液相质谱联用技术检测细胞中代谢产物的变化。结果:miR-200c-231细胞及其移植瘤组织中miR-200c表达较miR-NC-231细胞显著增加(P<0.05或P<0.01),miR-200c-231移植瘤质量和体积均显著下降、瘤组织中Ki67阳性细胞数明显减少(P<0.01),miR-200c-231细胞的迁移能力下降、细胞凋亡率提高(均P<0.01)。同时伴随着ZEB1/2、Vimentin、cyclinD1的表达下调及cleaved PARP表达的提高(P<0.05或P<0.01),STAT1/3和NF-κB的磷酸化水平降低(均P<0.05)而cAMP通路蛋白的磷酸化水平提高(P<0.05)。miR-200c-231细胞的OCR提高和ECAR降低、色氨酸2,3-加二氧酶(tryptophan-2,3-dioxygenase 2,TDO2)表达下降(P<0.05或P<0.01),细胞内10种抗肿瘤代谢物质含量提高(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-200c靶向TDO2调控TNBC细胞MDA-MB-231胞内抗肿瘤代谢产物水平、促使细胞代谢类型由依赖糖酵解为主向有氧呼吸类型转化,并失活STAT3和NF-κB通路而激活c AMP通路,从而影响MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为。
- 杨月陈龙方婷章丹丹
- 关键词：MIR-200C三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞能量代谢STAT3信号通路
- 薏苡仁油抑制三阴性乳腺癌生长的代谢组学研究被引量：16
- 2020年
- 目的基于LC-MS考察薏苡仁油干预三阴性乳腺癌原位荷瘤小鼠肿瘤生长的代谢组学情况。方法建立乳腺癌原位荷瘤小鼠模型,随机分为正常对照组、模型组和薏苡仁油给药组,薏苡仁油给药组灌胃给予薏苡仁油(7.5 mL·kg-1·d-1),连续灌胃给药14 d后,处死小鼠,取瘤组织并保留各组血清。HPLC-LTQ-Orbitrap Elite液质联用技术检测各组小鼠血清中的代谢变化并鉴定差异性代谢物。结果薏苡仁油显著抑制4T1乳腺癌细胞的体内生长(P<0.05),正常对照组、模型组及薏苡仁油给药组小鼠的血清代谢产物呈现不同的分布,通过正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),找到正常对照组和模型组、模型组与薏苡仁油给药组,分别比较组间变量权重(VIP)均>1、P<0.05的差异代谢物。与正常组比较,有16种代谢物在模型组显著变化,包括孕烷三醇、溶血磷脂[18∶3(9Z,12Z,15Z)]、溶血磷脂乙醇[0∶0/22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]、溶血磷脂[22∶5(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]、溶血磷脂[22∶4(7Z,10Z,13Z,16Z)]、丙酮酸、2,6-二氨基-4-羟基-5-N-甲基甲酰胺基嘧啶、N-乙酰基-L-苯丙氨酸、十七烷酸、油酸、硬脂酸、花生四烯酸、二高-γ-亚麻酸、乙酸视黄酯、6-羟基-5-甲氧基吲哚葡糖苷酸、1-硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺,其中代谢物N-乙酰基-L-苯丙氨酸水平提高,其他代谢物水平降低,并在薏苡仁油给药后这些差异代谢物均有显著回调趋势(P<0.05)。结论薏苡仁油可能通过调控三阴性乳腺癌小鼠体内的花生四烯酸代谢、不饱和脂肪酸的生物合成、戊糖和葡萄糖醛酸的相互转化以及丙酮酸代谢等途径发挥抗肿瘤作用。
- 方婷蒋义鑫陈龙柳润辉章丹丹
- 关键词：薏苡仁油三阴性乳腺癌花生四烯酸代谢
- 黑种草子不同组分抑制亚硝酸盐积累、血小板聚集和血管收缩的体外实验研究被引量：8
- 2013年
- 目的研究黑种草子不同组分对巨噬细胞活化后含亚硝酸盐量、血小板诱导后聚集、离体血管经苯肾上腺素引起收缩的影响。方法黑种草子醇提物经萃取分别得到乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物,后经大孔树脂纯化分别得到组分Ⅰ(总黄酮类成分)、Ⅱ(总皂苷类成分)和Ⅲ(总多糖类成分);组分Ⅳ(总生物碱成分)为黑种草子经酸水提取后乙醇洗脱乙酸乙酯萃取。以脂多糖和干扰素γ诱导小鼠巨噬细胞活化引起细胞上清液中亚硝酸盐累积;以二磷酸腺苷、花生四烯酸、胶原诱导大鼠体外血小板聚集;以苯肾上腺素引起大鼠离体血管收缩,而后考查黑种草子不同组分对上述指标的影响。结果组分Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ抑制亚硝酸盐形成,组分Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ具有抗血小板聚集作用,组分Ⅳ具有部分内皮依赖性血管舒张活性。结论黑种草子Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组分可干预血管系统中炎症的多个环节,且各有偏重,这是其活血通经药效的物质基础。
- 章丹丹凌霜张洪平卞卡
- 关键词：黑种草子血小板离体血管
- 诱导型一氧化氮合酶的调控机制及其抑制剂的研究进展被引量：9
- 2011年
- 目的:探究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)中药源抑制剂的抗炎机制。方法:iNOS在辅助因子存在情况下,将L-精氨酸转变为L-瓜氨酸的同时产生一氧化氮(NO),过量的NO将导致细胞损伤、组织坏死,进而促进炎症性疾病的发生和发展。结果:iNOS的表达与信号通路中的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、核因子(NF)-κB通路、蛋白激酶(PK)C通路、环腺苷酸(cAMP)依赖PKA通路、核激素受体过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)通路、磷脂酰肌醇三羟基激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)通路、JAK/信号转导及转录活化因子(STAT)通路、血红素加氧酶(HO)-1/一氧化碳(CO)通路均密切相关。结论:iNOS中药源抑制剂通过各种信号通路而发挥其抗炎作用。
- 杨晓露章丹丹唐宁华晓东卞卡
- 关键词：诱导型一氧化氮合酶抑制剂
- 黑种草子抑制乳腺癌细胞增殖的组分筛选及机制分析被引量：5
- 2013年
- 目的结合体外筛选确定黑种草子抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的有效组分并进行初步的机制分析。方法通过有机溶剂萃取和大孔树脂富集获得黑种草子各提取物,结合体外MTT法筛选黑种草子的各提取物中对4T1细胞具增殖抑制作用的有效组分;集落形成法考察有效组分对细胞集落形成的影响;Western Blot法考察黑种草子有效组分干预前后4T1细胞中p-JAK2的蛋白表达。结果黑种草子总黄酮(相对含量为60.19%)抑制4T1细胞增殖的IC50为最低,同时呈剂量依赖性抑制4T1细胞的集落形成,并下调细胞中p-JAK2的蛋白表达。结论黑种草子总黄酮是黑种草子抑制乳腺癌4T1细胞增殖和集落形成的有效组分,部分是通过抑制JAK/STAT信号转导通路中关键蛋白的磷酸化而发挥抗增殖效果的。
- 王原来杨晓露卞卡章丹丹
- 关键词：黑种草子乳腺癌抑制增殖JAK2STAT3信号通路
- 地黄药理药化及配伍研究被引量：61
- 2012年
- 地黄是我国常用的大宗中药。近年来研究人员对其不同炮制方法的生地黄、鲜地黄、熟地黄的化学成分、药理作用及其在临床配伍研究应用有较多研究。
- 刘朵章丹丹卞卡
- 关键词：地黄化学成分药理作用配伍
- 祖师麻醋酸乙酯提取物体外抗炎作用及其机制被引量：6
- 2011年
- 目的研究祖师麻醋酸乙酯提取物(EAEDGC)的体外抗炎作用及其机制。方法用γ-干扰素(IFN-γ)和脂多糖(LPS)协同制备小鼠RAW264.7细胞炎症模型,Griess反应测定细胞上清液中NO生成量,MTT法测定细胞活力,三价铁还原抗氧化能力测试(FRAP assay)测定细胞总抗氧化能力,RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;Western blotting检测iNOS、COX-2、HO-1、p-ERK蛋白表达水平。结果 EAEDGC以剂量依赖方式抑制细胞上清液中NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及iNOS、p-ERK蛋白的表达,上调HO-1 mRNA和蛋白表达,同时不影响细胞生长;但对COX-2 mRNA和蛋白表达影响不大。结论 EAEDGC部分通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达,从而抑制NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,同时下调IL-1β、IL-6、TNF-α炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达,进而发挥抗炎作用。
- 章丹丹潘一峰凌霜杨晓露许锦文卞卡
- 关键词：抗炎机制诱导型一氧化氮合酶细胞因子总抗氧化能力
