广东省自然科学基金(A2007022)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 反义基因治疗对H9C2心肌细胞β_1受体表达的影响
- 2008年
- 目的观察阳离子脂质体介导的β1受体反义基因对H9C2心肌细胞β1受体mRNA及受体蛋白表达的影响,寻求最佳转染比率。方法H9C-2心肌细胞,用去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)刺激24h后转染β1受体反义寡核苷酸(β1 antisense oligonucleotide,β1-AS-ODN),脂质体与β1-AS-ODN的混合摩尔比为2.0、2.5和3.0,分别转染18h、24h和36h;在倒置荧光显微镜下观察心肌细胞的形态;用免疫印迹技术测定心肌细胞β1受体蛋白的时间表达曲线。实验分为4组:NE组、NE加β1受体反向寡核苷酸(β1 inverse oligonucleotides,β1-IN-ODN)组、NE加β1-AS-ODN组、心肌细胞组,用半定量逆转录多聚酶链反应检测心肌细胞β1受体mRNA的表达。结果β1-AS-ODN分布在心肌细胞的胞浆及细胞核中,转染24h效率达70%,此后平缓降低;NE组的心肌细胞β1受体蛋白显著升高;与NE组相比,脂质体与β1-AS-ODN的混合摩尔比2.0、2.5,和3.0的心肌细胞β1受体蛋白显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.05);与心肌细胞组比较,NE组和β1-IN-ODN组的心肌细胞β1受体mRNA和受体蛋白显著升高(P<0.01);与NE组相比,NE加AS-ODN组的心肌细胞β1受体mRNA和受体蛋白显著降低(P<0.01)。结论阳离子脂质体与β1-AS-ODN比率为2.5转染24h效果最好,其机制可能是通过激活核糖核酸酶H降解靶mRNA,在转录和翻译水平抑制目的基因表达。
- 林纯莹陈泗林梁远红周燕余细勇
- 关键词：Β1受体反义寡核苷酸心肌细胞
