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国家高技术研究发展计划(2006AA020705)

作品数:4 被引量:16H指数:3
相关作者:陈超李拴美刘端崔亚丽朱晶晶更多>>
相关机构:西北大学陕西北美基因股份有限公司更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项更多>>
相关领域:医药卫生生物学化学工程更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 2篇生物学
  • 2篇医药卫生
  • 1篇化学工程

主题

  • 2篇多态
  • 2篇多态性
  • 2篇药物
  • 2篇药物相互作用
  • 2篇人细胞
  • 2篇人细胞色素
  • 2篇人细胞色素P...
  • 2篇细胞
  • 2篇细胞色素
  • 2篇细胞色素P4...
  • 2篇基因
  • 2篇基因多态性
  • 2篇半数抑制浓度
  • 1篇等位
  • 1篇等位基因
  • 1篇等位基因多态...
  • 1篇电泳
  • 1篇药物代谢
  • 1篇融合蛋白
  • 1篇体外

机构

  • 3篇西北大学
  • 2篇陕西北美基因...

作者

  • 3篇陈超
  • 1篇刘端
  • 1篇马平平
  • 1篇杨磊
  • 1篇朱晶晶
  • 1篇崔亚丽
  • 1篇李拴美
  • 1篇王会娟

传媒

  • 2篇中国医药生物...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇Journa...

年份

  • 4篇2009
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
体外研究人细胞色素P450 3A4等位基因多态性对药物代谢和药物相互作用的影响被引量:7
2009年
目的体外研究药物对人细胞色素P4503A4(CYP3A4)(野生型,WT)及其4个突变等位基因重组酶CYP3A4*3(M445T)、CYP3A4*4(I118V)、CYP3A4*17(F189S)和CYP3A4*18(L293P)的抑制程度。方法采用荧光高通量法和HPLC法分别测定WT及其4个突变等位基因重组酶催化荧光底物——二甲基荧光素(DBF)脱烷基化和探针底物——硝苯地平氧化反应时的酶动力学参数;且通过测定大扶康、万络、西乐葆、酮康唑、地尔硫卓和维拉帕米的半数抑制浓度(IC50)值,确定6种药物对酶的抑制程度。结果除F189S外,其余4种重组酶均能催化DBF和硝苯地平反应生成相应的产物。各突变等位基因重组酶催化DBF反应的Km值(亲和力)与WT相当,M445T和L293P的内在清除率分别是WT的3.1和3.8倍(P<0.05),I118V是WT的1.3倍(P=0.1010)。各重组酶催化硝苯地平氧化反应的Km值均比WT小,I118V和L293P的内在清除率分别是WT的0.7和2.6倍(P<0.05),M445T与WT相当(P=0.7676)。6种药物对各重组酶的抑制程度强弱均为:酮康唑>地尔硫卓>维拉帕米>大扶康>西乐葆>万络;药物对各重组酶的IC50值大小为:WT
李拴美刘端朱娟莉陈超
关键词:细胞色素P450酶系统半数抑制浓度药物相互作用
基于谷胱甘肽-磁性微粒的GST融合蛋白纯化体系的建立被引量:5
2009年
本研究将还原型谷胱甘肽(GSH)共价结合在异硫氰酸根末端磁性微粒表面,制备了具有超顺磁性的谷胱甘肽-磁性微粒亲和介质,以表面修饰有谷胱甘肽的磁性微粒为载体,建立了谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白的纯化体系。对100μL细胞裂解液纯化体系所需磁性微粒用量、谷胱甘肽-磁性微粒与细胞裂解液的孵育时间、清洗条件等进行了优化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白的纯度进行了检测,Bradford方法对融合蛋白进行了定量测定,对纯化得到的目的蛋白进行了Western blotting分析。结果表明,每毫克异硫氰酸根末端磁性微粒对GSH的固定化容量为150μg,10 mg谷胱甘肽-磁性微粒可满足100μL细胞裂解体系中目的蛋白的纯化,最佳孵育时间为40 min,对GST融合蛋白的平均纯化量为516μg。本方法快速、简便,基于磁性微粒的分离还可实现自动化,对GST融合蛋白的纯化具有很好的应用前景。
朱晶晶杨柳杨磊陈超崔亚丽
关键词:还原型谷胱甘肽GST融合蛋白
体外重组人细胞色素P450 2C9酿酒酵母表达体系的构建及其基因多态性对药物相互作用影响的初探被引量:3
2009年
目的体外构建重组人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系,且利用该体系研究药物对CYP2C9基因多态性酶抑制程度的差异性。方法将CYP2C9*1(野生型)和通过定点突变PCR法获得的等位基因突变克隆CYP2C9*2(R144C突变体)和CYP2C9*3(I359L突变体)电穿孔转化酿酒酵母后,差速离心法制备酿酒酵母微粒体,蛋白免疫印迹法检测3种CYP2C9微粒体蛋白的表达;HPLC法检测CYP2C9*1与特异性底物双氯芬酸的反应,记录产物峰面积值,利用Prism Demo软件计算米氏常数(Km)值;利用荧光底物BOMCC对3个等位基因进行酶活性分析,分别计算Km、最大酶促反应速度(Vmax)和内在清除率。采用荧光高通量方法测定5种药物(甲苯磺丁脲、磺胺苯比唑、酮康唑、氟西汀和泰洛平)对酶的抑制程度。结果蛋白免疫印迹结果表明,3个等位基因均表达目的蛋白。CYP2C9*1代谢双氯芬酸的Km值为5.34±0.96μmol/L;以BOMCC为底物时,CYP2C9*1和CYP2C9*2的Km值分别为16.94±4.78、34.73±5.51μmol/L,Vmax分别为0.21±0.10、0.12±0.01pmol/(min·pmolP450),内在清除率分别为0.012±0.003、0.003±0.0001μl/(min·pmolP450);CYP2C9*3无催化活性。5种药物对CYP2C9*1的抑制程度:磺胺苯比唑>酮康唑>氟西汀>甲苯磺丁脲>泰洛平;对CYP2C9*2的抑制程度:磺胺苯比唑>甲苯磺丁脲>酮康唑>氟西汀>泰洛平。结论成功构建了重组人细胞色素CYP2C9及其多态性等位基因(CYP2C9*2、CYP2C9*3)酿酒酵母表达系统;初步建立了药物对CYP2C9基因多态性酶的抑制作用体外检测体系,为指导临床联合用药奠定了基础。
马平平王会娟朱娟莉陈超
关键词:细胞色素P450酶系统半数抑制浓度药物相互作用
A simple method for purification of genomic DNA from whole blood using Fe_3O_4/Au composite particles as a carrier被引量:1
2009年
Objective:To establish a method of genomic DNA extraction from whole blood using Fe3O4/Au composite particles as a carrier. Methods: Two crucial conditions (sodium chloride concentration and amount of the magnetic particles) were optimized and 8 different human whole blood samples were used to purify genomic DNA under the optimal condition. Then agarose gel electrophoresis and polymerase chain reaction (PCR) were performed. Results: The optimal binding condition was 1.5 mol/L NaCl/10% PEG, and the optimal amount of Fe3O4/Au composite particles was 600 μg. The yields of the genomic DNA from 100 μl of different whole blood samples were 2-5 μg, and the ratio of A260/A280 was in the range of 1.70-1.90. The size of genomic DNA was about 23 kb and the PCR was valid. Conclusion: The purification system using Fe3O4/Au composite microparticles has advantages in high yield, high purity, ease of operating, time saving and avoiding centrifugation. The purified sample was found to function satisfactorily in PCR amplification.
Zhao MingZhang XianqingWang SenChen ChaoCui Yali
关键词:DNA纯化琼脂糖凝胶电泳PCR扩增
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