国家教育部博士点基金(20090181120076)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- Tat-p21融合蛋白的表达及其在A549细胞中的活性研究
- 2013年
- 在本研究中,通过分子克隆的手段,将编码Tat跨膜转运结构域的CDS与人野生型p21蛋白的CDS相连接,并通过原核表达系统表达纯化相应蛋白;然后用该蛋白按浓度梯度:100,200,400,800,1000nmol/L与A549细胞共同孵育,各浓度在10,60,120,240min终止反应,通过Western Blotting检测进入细胞的p21蛋白量,以此确定最佳的转导条件;接着检测了转导进入A549细胞的Tat-p21融合蛋白在细胞中稳定存在的时间.然后通过绘制细胞生长曲线的方法比较了转导Tat-p21的细胞与负对照实验组生长速度的区别.结果发现,融合Tat跨膜结构域的p21蛋白能够高效进入A549细胞,并在细胞内发挥相应生物学功能,使细胞的生长受到抑制,增殖减慢;而作为负对照的p21蛋白则无相应功能.
- 施慧敏吴兰赵梓亦吴传芳
- 关键词：TATP21蛋白A549细胞
- piggyBac共转染系统的构建以及转座活性的验证被引量：1
- 2011年
- piggyBac(PB)转座子的末端反向重复序列(ITR)和转座酶编码序列(PBase)分别克隆于质粒PB1156、atub-pBac-K10.1TR与包含红色荧光蛋白表达序列(RFP)的质粒pmClherry-N1重组构成供体质粒(Donor);PBase与真核表达载体pEFrF-PGK重组构成辅助质粒(Helper).使用由供体质粒与辅助质粒组成的PB二元共转染系统转染HEK293细胞,结果表明该二元共转染系统具有较好的转座活性,并且在分子水平验证了转座的发生以及使用反向PCR(IPCR)定位了其中一个转座插入位点在HEK293基因组DNA上的位置.
- 缪辉刘华华吴传芳
- 关键词：转座子共转染
