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河南省科技攻关计划(102102313105)
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相关作者:
王云龙
孙新城
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作者
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徐桂超
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王云龙
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含A(H1N1)流感病毒NP基因病毒样颗粒的构建和表达
2010年
目的:构建并表达含有A(H1N1)流感病毒NP基因片段并可抗RNase降解的病毒样颗粒,作为RT-PCR检测的阳性对照。方法:设计带有NcoⅠ、BamHⅠ酶切位点的引物克隆MS2噬菌体的装配蛋白和包膜蛋白基因,化学合成含BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的A(H1N1)流感病毒NP基因片段,将这些基因连接到质粒载体pET-28b(+)上,转化到E.coliBL21(DE3)感受态细胞中进行表达,表达产物进行纯化,然后进行RNase攻击试验和稳定性试验。结果:获得含NP基因片段的病毒样颗粒,可抵抗RNase降解,并能在37℃稳定保存30d。结论:该病毒颗粒稳定、安全、可靠,可作为A(H1N1)流感病毒RT-PCR检测、定量分析的有效阳性参考品。
王云龙
徐桂超
李智涛
孙新城
王国强
昌静峰
李彦霞
关键词:
病毒样颗粒
核糖核酸酶
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