河南省基础与前沿技术研究计划项目(122300410150)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：王选年银梅朱艳平岳锋杨媛更多>>
- 相关机构：河南科技学院新乡学院更多>>
- 发文基金：河南省教育厅科学技术研究重点项目国家自然科学基金河南省基础与前沿技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达
- 2015年
- 为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α。挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别。本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料。
- 杨媛朱艳平岳锋孙国鹏张艳芳银梅王选年
- 关键词：胞外区克隆原核表达
- 猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：8
- 2014年
- 根据GenBank中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)5′NTR的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,以CSFV全长基因重组质粒pGEM-CSFV为标准品,建立TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并检测人工感染CSFV后不同时期猪血浆中CSFV的载量。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,R2=0.999;敏感性高,最低检测限为1×101拷贝/μL;特异性强,与猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应性;重复性好,组内和组间变异系数均小于2%。人工感染CSFV后第7天猪血浆中CSFV载量达到峰值,之后逐渐降低。结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、重复性好等优点,为CSFV的定量分析及临床诊断奠定基础。
- 岳锋朱艳平银梅王选年
- 关键词：猪瘟病毒实时荧光定量PCRTAQMAN探针
