广东省自然科学基金(S2012010009190)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- TFAM重组腺病毒的构建及其对骨关节炎软骨细胞的保护作用
- 2013年
- 目的通过构建重组腺病毒载体,转染骨关节炎软骨细胞,探讨线粒体转录因子A(TFAM)保护软骨细胞退变的作用。方法构建TFAM重组腺病毒载体,并转染骨关节炎软骨细胞。分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹法检测转染后细胞中TFAM mRNA及蛋白的表达情况;鉴定转染后软骨细胞线粒体DNA拷贝数的变化。结果成功构建TFAM重组腺病毒,且体外转染率高;RT-PCR结果示细胞转染后MOI为500、1 000组TFAM mRNA的表达明显升高(P<0.01);Western印迹结果示转染后MOI为500、1 000两组TFAM蛋白表达均升高,其中MOI=1 000组表现最为明显(P<0.01);骨关节炎细胞组线粒体DNA的平均拷贝数为(389±117),而MOI=500组为(575±144),MOI=1 000组为(762±179),前者显著低于后两者(P<0.01)。结论转染TFAM重组腺病毒可正向增强其在软骨细胞中的表达,保持线粒体DNA结构的稳定性。
- 廖壮文黄彦梁月屏吕浩然张珠江
- 关键词：重组腺病毒TFAM
- 雌激素缺乏条件下MiR-133通过调控间充质干细胞成骨分化参与骨质疏松形成的机制被引量：5
- 2016年
- 目的探究MiR-133在雌激素缺乏条件下在骨质疏松中的表达情况及对间充质干细胞成骨分化的影响。方法从绝经后骨质疏松患者处分离间充质干细胞,利用qRT-PCR检测MiR-133的mRNA表达水平;利用荧光素酶和Western印迹检测MiR-133对其靶基因SLC39A1表达的调控;通过检测碱性磷酸酶和RUNX2表达情况,显示MiR-133和SLC39A1对间充质干细胞成骨分化产生的影响。结果 MiR-133在雌激素缺乏的患者中显著升高,并且负性调控间充质干细胞成骨分化能力;MiR-133直接靶向负性调控SLC39A1启动子活性,降低SLC39A1的蛋白表达水平;SLC39A1能够上调碱性磷酸酶的活性,上调RUNX2的表达水平。结论 MiR-133的过表达与雌激素缺乏具有显著相关性,MiR-133通过抑制SLC39A1的表达弱化间充质干细胞成骨分化能力,进而促使绝经后骨质疏松的发生。
- 谢楚海史群伟郭剑鸿范子文李菊根陈斌伟曹燕明吴波以
- 关键词：MICRORNAS间充质干细胞雌激素缺乏骨质疏松
- 骨关节炎患者线粒体转录因子A表达与线粒体DNA拷贝数关系的研究被引量：3
- 2015年
- 目的研究膝关节骨关节炎患者与正常人外周血及关节软骨细胞中的线粒体转录因子A(TFAM)表达和线粒体DNA拷贝数的关系,探讨其相关性。方法选择20例的膝关节骨关节炎患者为骨关节炎组,以正常关节软骨患者20例为对照组。各收集其外周血及关节软骨细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光PCR(SYBR GREEN I染料法)检测外周血及软骨组织中TFAM mRNA的表达水平和软骨细胞线粒体DNA拷贝数。结果骨关节炎组外周血和软骨细胞TFAM mRNA的表达量均低于正常组患者(P<0.05),且二者表达量呈正相关(P<0.01);骨关节炎组线粒体DNA的平均拷贝数均于正常组患者软骨细胞(P<0.01),且与软骨细胞TFAM mRNA的表达量呈正相关(P<0.01)。结论 TFAM通过增加其线粒体DNA拷贝数,这将可以对骨关节炎的病因提出新的解释和补充,可能为骨关节炎的检测和治疗提供新的途径。
- 陈斌伟杨进顺黄彦廖壮文
- 线粒体转录因子A参与软骨细胞退变逆转的机制被引量：1
- 2014年
- 目的初步探讨线粒体转录因子A(TFAM)参与软骨细胞退变逆转机制,以期阐明TFAM与骨关节炎发生、发展的关系。方法以含血清培养液培养分离的原代正常软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞,MTT检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,并利用基因组学和定量PCR等技术分析膝关节OA患者、正常关节软骨细胞的线粒体DNA特征和TFAM表达的差异情况。结果 1MTT检测OA细胞组的增殖低于正常细胞组(P<0.01);2OA组细胞凋亡率为7.11%,而正常组为1.65%,IL-1β诱导后OA细胞凋亡率为35.13%,正常组有13.79%;3OA软骨细胞TFMA mRNA的表达量低于正常软骨细胞(P<0.05),且OA软骨细胞线粒体DNA的平均拷贝数显著降低(P<0.01);线性回归分析结果表明OA细胞和正常细胞中TFMA mRNA的表达量和线粒体DNA拷贝数之间均有相关性(P<0.05)。结论分离的原代OA软骨细胞符合软骨细胞退变,为其研究提供了较好的实验对象,其线粒体DNA拷贝数与调控其转录、复制的主要调节因子TFMA的表达有相关性。
- 黄彦梁月屏廖壮文吕浩然谢楚海
- 关键词：线粒体转录因子A骨关节炎
