安徽省高等学校优秀青年人才基金(2009SQRZ036)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：涂健祁克宗钟瑾彭开松李民欢更多>>
- 相关机构：安徽农业大学中国科学院更多>>
- 发文基金：安徽省高等学校优秀青年人才基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 禽防御素在雏鸡抗鸡白痢沙门菌感染中的表达及其分子设计被引量：2
- 2014年
- 为了探寻有效防治雏鸡感染鸡白痢沙门菌的新型防御素生物制剂,建立雏鸡感染鸡白痢沙门菌（S.Pullorum）的模型,感染3～24 h后检测十二指肠组织禽防御素（AvBDs）抗感染的防御性表达水平,分析AvBDs的理论等电点,选择活性强且结构稳定的AvBD,对其进行分子设计,以期构建出理论生物活性更强且结构更稳定的改型防御素.结果表明,与对照组相比,雏鸡感染鸡白痢沙门菌3～24 h后十二指肠AvBD-6的表达水平明显上升,差异显著（P＜0.05）,结合理论等电点分析,选择AvBD-6做设计出发肽,用天冬氨酸替换AvBD-6原有的中性氨基酸,并在C端增加抗菌肽BF2衍生物的α螺旋,成功构建了改型防御素AvBD6-BF2,其理论生物活性与结构稳定性均强于AvBD6出发肽.本研究将为AvBDs生物制剂用于防治鸡白痢沙门菌病的可行性提供参考.
- 涂健王斌祁克宗温俊柳周秀红汪雪雁刘红梅
- 关键词：雏鸡分子设计
- 鸡β-防御素7在大肠杆菌中的表达及活性分析被引量：3
- 2012年
- 【目的】根据鸡β-防御素7(Gal-7)的成熟肽基因序列合成基因,构建表达Gal-7的大肠杆菌工程菌,研究重组鸡防御素Gal-7成熟肽的体外生物活性。【方法】将合成的gal-7基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-6p-1中,得到重组质粒pGEX-6p-gal7,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达得到含GST标签的融合蛋白GST-Gal7;之后用Prescission蛋白酶将GST标签切除,并对成熟肽进行质谱分析;再利用琼脂打孔扩散法检测Gal-7成熟肽的体外抑菌活性,用2倍稀释法测定对指示菌的最低抑菌浓度。【结果】成功构建Gal-7大肠杆菌异源表达工程菌,表达纯化的重组Gal-7成熟肽质谱鉴定分子量为5 516 Da,其对黄色微球菌(NCIB 8166)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(CMCC 44102)均有抑菌活性,最低抑菌浓度分别为16.875、67.5、67.5、135 mg/L。【结论】获得表达鸡Gal-7成熟肽的大肠杆菌工程菌,并且切除GST标签的Gal-7成熟肽具有生物活性。
- 李民欢祁克宗涂健钟瑾
- 关键词：Β-防御素异源表达抗菌活性
- 鸡β防御素Gallinacin-8基因乳酸菌表达载体的构建
- 鸡β-防御素gal-8是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。本研究从已构建的重组质粒pGEM-T Easygal-8-8中克隆出gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pNZ8048,构建重组质粒pNZ804...
- 杨涛钟瑾涂健彭开松祁克宗
- 关键词：原核表达乳酸乳球菌
- 文献传递
- 密码子优化前后AvBD2成熟肽基因的表达水平及其抑菌活性的比较
- 2013年
- 根据大肠杆菌的密码子偏好性,将编码AvBD2成熟肽的基因原片段Na-AvBD2优化为片段Op-AvBD2,将2条片段分别转化至大肠杆菌中重组表达,表达产物经GST树脂纯化后,对二者的表达水平和抗菌活性进行了比较。结果,融合蛋白rOp-AvBD2的表达量比rNa-AvBD2高2倍。而两者对大肠杆菌(CM-CC44102)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、鸡白痢沙门氏菌(CVCC533)和粪肠球菌(ATCC29212)的抑菌活性及对鸡白痢沙门氏菌(CVCC533)和粪肠球菌(ATCC29212)菌体超微结构的破坏程度无显著差异。结果提示AvBD2在预防和治疗细菌感染中具有替代抗生素的潜在应用价值,而密码子优化将成为通过基因工程生产AvBDs的可行途径。
- 涂健段慧缪刘祁克宗王海霞邵颖彭开松
- 关键词：密码子优化大肠杆菌抑菌活性
- 鸡β-防御-素8 cDNA在大肠杆菌中的融合表达被引量：2
- 2009年
- 为了评价鸡β-防御素的功能与基因工程化生产的可能性,从已构建的重组载体pGEM-T Easy-gal-8中克隆gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建表达质粒pGEX-6P-1-gal-8,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。挑取阳性克隆菌用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果检测显示,融合表达的GST-gal-8蛋白大小约30 ku,经灰度扫描显示该融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的119 mg/L。用固定化的谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化,融合蛋白经Prescission蛋白酶酶切并纯化获得了完整的gal-8成熟多肽。抑菌活性试验显示,表达的gal-8成熟肽对黄色微球菌有一定的抑菌活性。
- 杨涛钟瑾涂健彭开松祁克宗
