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国家自然科学基金(30571371): 作品数：12 被引量：54H指数：6; 相关作者：王永山欧阳伟唐雨德王忠灿张海彬更多>>; 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

引起免疫失败的传染性腔上囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达被引量：8: 2010年; 将从安徽省传染性腔上囊病(IBD)免疫失败的病鸡腔上囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了原核表达质粒pGEX-VP2,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,结果呈阳性反应;SDS-PAGE分析结果显示,重组VP2融合蛋白的分子质量为68ku,表达量约占菌体总蛋白量的16.0%,表达产物主要以包涵体形式存在于菌体内;Western-blotting结果显示,重组VP2蛋白与IBDV抗体发生反应,形成一条特异性蛋白带,表明获得的重组蛋白具有良好的抗原反应性。; 曹冰玉王永山范红结欧阳伟王忠灿唐雨德; 关键词：传染性腔上囊病病毒 VP2基因原核表达

近期引起免疫失败的传染性腔上囊病病毒VP2基因的分子特征被引量：21: 2008年; 用RT-PCR方法从2007年12月在安徽境内发生的两起传染性腔上囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡腔上囊组织样品AH1与AH2中扩增出了传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析表明,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1 350 nt,编码450 aa,七肽基序均为S-W-S-A-S-G-S,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、QI、、D、AI、和S,具有IBDV强毒的分子特征,AH1和AH2感染的20日龄雏鸡产生明显IBD病变,死亡率为25%(1/4)。同源性分析表明,26个血清Ⅰ型IBDV毒株VP2基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为90.7%～99.6%和95.5%～100%,不同IBDV毒株VP2基因的七肽基序、特征性氨基酸残基以及高变区的亲水性有差异。在进化树上,26个血清Ⅰ型IBDV毒株可分为数组,其中的15个中国分离IBDV毒株不在同组,毒株之间的亲缘关系与分离地区或分离时间没有明显的联系。AH1和AH2与现行商品疫苗毒株B87的VP2基因核苷酸序列的差异率分别为5.3%和5.2%,这也进一步佐证了IBDV野毒VP2基因变异所引起的毒力变化和VP2抗原表位的漂移是导致当前IBD疫苗免疫预防失败的主要原因。; 王永山欧阳伟潘群兴范红结张海彬王忠灿唐雨德谭维国; 关键词：传染性腔上囊病病毒 VP2基因分子特征

IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达: 运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选...; 周宇王永山范红结欧阳伟唐雨德王忠灿; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因抗原表位

传染性法氏囊病病毒多表位模拟肽串联基因的表达与免疫原性分析被引量：6: 2007年; 用5株传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体(mAb)从噬菌体随机肽库中得到了5个含有不同IBDV抗原表位的模拟肽序列。在此基础上,将5个抗原表位用GGGS四肽连接构建多表位基因5epis。将该基因合成、克隆后,构建原核表达质粒pET-5epis,在大肠杆菌中表达重组多表位蛋白r5EPIS,经SDS-PAGE分析,r5EPIS占菌体总蛋白的15%、分子量10kDa。用IBDV单克隆抗体和多克隆抗体对r5EPIS进行免疫印迹对比分析,结果表明,r5EPIS具有IBDV特异性和免疫反应性。将r5EPIS经皮下注射免疫兔,400μg/只/次,免疫2次,间隔7d,用IBDV间接ELISA检测血清抗体,第一次免疫7d后抗体效价为1∶4000,第二次免疫14d后抗体效价升高到1∶256000,说明r5EPIS可诱导机体产生IBDV特异性抗体。用r5EPIS加免疫佐剂经肌肉注射免疫鸡,50μg/只/次,免疫2次后,血清抗体效价可达到1∶12800,用200个ELD50IBDV超强毒株GX8/99攻击实验鸡,r5EPIS免疫组全部存活,而单用佐剂对照组的死亡率为86.7%(13/15),证明r5EPIS可诱导机体产生抗IBDV感染的保护性免疫应答,预示构建的5epis可作为IBD多表位疫苗研究的候选基因。; 王永山范红结张晓民李银肖焕娟; 关键词：传染性法氏囊病病毒抗原表位免疫原性

近期地方发生传染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征: IBDV属双RNA病毒科,基因组包括大(A)小(B)两个片段,有五种病毒蛋白:VP1、VP2、VP3、VP4和VP5。VP1由B片段编码,为病毒自身编码的依赖RNA的RNA聚合酶。其它四种病毒蛋白由A片段编码的多聚蛋白加...; 王永山欧阳伟潘群兴李银范红结张海彬王忠灿唐雨德; 文献传递

近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达: 为制备近期IBDV毒株的重组VP2蛋白,将近期安徽IBD免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-VP2,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）;经...; 曹冰玉王永山范红结欧阳伟王忠灿唐雨德; 关键词：传染性法氏囊病病毒 IBDV VP2 原核表达; 文献传递

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用: 将引起传染性法氏囊病IBD免疫预防失败的IBD病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli...; 欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因病毒样颗粒间接ELISA; 文献传递

传染性法氏囊病安徽近期毒株VP2基因在昆虫细胞中的表达被引量：3: 2009年; 为真核表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因,将2007年12月从安徽境内发生的传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中克隆的IBDV VP2基因插入到pFastBac1供体质粒中,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,经抗性筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-VP2,用脂质体法转染Sf9细胞。对rBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用western blot分析,在50ku处出现1条特异蛋白条带;电镜观察重组VP2蛋白能够自组装成病毒样颗粒。本实验为研制针对近期流行IBDV的新型病毒样颗粒疫苗和新型检测试剂奠定了基础。; 欧阳伟王永山张海彬潘群兴王晓丽刘洁周宇曹冰玉王忠灿; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因杆状病毒病毒样颗粒

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用: 将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli ...; 欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因病毒样颗粒间接ELISA; 文献传递

IBDV抗原表位与HBcAg嵌合基因的分子设计及其表达产物分析: 为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)...; 刘小娟王永山欧阳伟张海彬王晓丽王忠灿唐雨德; 关键词：抗原表位嵌合基因

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