山东省卫生厅科技基金(2007HW029)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：潍坊医学院附属医院潍坊医学院昌邑市人民医院更多>>
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- 三种因子联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化
- 2009年
- 背景:间充质干细胞的生物学特性及影响分化调控因子的研究认为,体外原代培养的间充质干细胞自然分化为肝细胞的比例较低,选择一种合适的诱导剂提高其分化为肝细胞的比例尤为必要。目的:以肝细胞生长因子、表皮生长因子及成纤维生长因子体外联合,验证其诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-08在潍坊医学院实验中心完成。材料:Sprague-Dawley大鼠40只,由潍坊医学院实验动物中心提供。方法:采用贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,取传至第3代细胞,设立2组:空白对照组加入含体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养基;联合诱导组在此基础上,另加入10μg/L成纤维生长因子、8μg/L肝细胞生长因子、8μg/L表皮生长因子。主要观察指标:倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫荧光染色观察甲胎蛋白及白蛋白的表达,PAS检测糖原的表达,靛青绿摄入情况,酶学检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶的水平。结果:联合诱导组细胞呈多角形、卵圆形或圆形细胞的特征性改变,空白对照组骨髓间充质干细胞仍保持梭形或纺锤形。联合诱导组培养14d可见白蛋白和甲胎蛋白免疫反应阳性细胞;诱导7d时偶见PAS阳性细胞与靛青绿阳性细胞,随诱导时间延长,阳性细胞逐渐增多;诱导14d时开始检测到谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶的合成,21d达高峰,之后下降。上述各指标空白对照组细胞均呈阴性。结论:成纤维生长因子、肝细胞生长因子与表皮生长因子体外联合应用,能够成功诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化。
- 吴金生朱建祥蒋吉英王晓萃丁洁于树娜魏德全王宝松
- 关键词：骨髓间充质干细胞成纤维生长因子肝细胞生长因子表皮生长因子肝细胞
- 胎肝滤液诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化被引量：2
- 2009年
- 目的探讨胚胎肝组织滤液定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为肝细胞的诱导条件,为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法在体外培养体系中加入胎肝滤液,模拟体内肝脏微环境,诱导BMSCs向肝细胞定向分化,以免疫细胞化学检测肝细胞标志物;PAS检测糖原表达;靛青绿染色检测转化细胞的分化程度;测定细胞培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的含量以检测其功能状态。结果BMSCs经胎肝滤液诱导14d时细胞呈现多角形、卵圆形或圆形细胞的特征性改变;甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)免疫反应、PAS反应和吲哚靛青绿(ICG)摄入实验及上清液中ALT、AST、ALP等酶均在诱导的第7天开始出现,AFP和ALB免疫反应在21d时达高峰;PAS反应和ICG摄入实验随着时间的延长而增强;上清液中的各个酶在14d达高峰,之后呈下降趋势。结论胎肝滤液可诱导BMSCs形成具有肝细胞形态和功能特点的细胞。
- 王晓萃蒋吉英吴金生丁洁于树娜魏德全王宝松姜栋栋
- 关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞免疫组织化学
