国家自然科学基金(31160024)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：海南省农业科学院海南大学中国农业科学院蔬菜花卉研究所更多>>
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- 象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能分析
- 象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)是世界上公认的一种为害巨大的根结线虫,常造成农作物严重的经济损失.研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能有助于解析其生存适应机制,为寻找高效低毒的方法防治...
- 陈慧王会芳陈绵才
- 关键词：抗逆性RNA干扰
- 微生物在瓜类枯萎病生物防治中的应用
- 瓜类枯萎病是葫芦科作物上常见的一种土传病害,给瓜类蔬菜的生产造成严重的损失。近年来,利用微生物来防治瓜类枯萎病取得了较大的进展,已成为防治该病害的重要手段。本文对近十年来国内外瓜类枯萎病的生物防治进行了简单的回顾和综述,...
- 赵志祥肖敏谢丙炎肖彤斌陈绵才
- 关键词：瓜类枯萎病生物防治微生物
- 番石榴园宏基因组Fosmid文库构建及杀线活性克隆的筛选
- 从海南乐东受象耳豆根结线虫严重侵染的番石榴园中,健康番石榴根围取土样,经总DNA提取、纯化、末端修复、连接、包装和转染等过程,构建宏基因组Fosmid表达文库。特征分析表明:该文库库容31008个克隆,平均插入片段36....
- 赵志祥张怀军严婉荣肖敏陈绵才
- 关键词：宏基因组文库蛋白酶基因象耳豆根结线虫
- 文献传递
- 杀象耳豆根结线虫Pro-21fa6克隆子产活性蛋白酶研究
- 2015年
- 本文提取土壤样品总DNA,以Fosmid为载体,构建宏基因组文库。以脱脂奶为底物,象耳豆根结线虫为靶标,筛选杀象耳豆根结线虫的产蛋白酶基因克隆子。以克隆子Pro-21fa6为研究对象,从酶活、蛋白含量变化、p H变化对发酵过程进行了研究。结果表明,构建31 104个克隆子,库容1.067 Gb,获得产蛋白酶阳性克隆子111株,其中9株对象耳豆根结线虫具有毒杀作用,Pro-21fa6克隆子毒杀效果最好。培养条件温度35℃、转数200 r/min、以及脱脂奶与诱导剂共同作用可以使酶活提高,是基础培养基的1.33倍。Pro-21fa6蛋白酶克隆子初步研究,为蛋白酶基因基因片段亚克隆、测序、活性蛋白酶分离纯化奠定了基础。
- 张怀军赵志祥陈绵才
- 关键词：基因组文库FOSMID文库象耳豆根结线虫
- 象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能分析被引量：1
- 2016年
- Hsp70基因的表达量在研究中常作为一个重要的生理指标来反映机体的状况。为了研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能,本研究前期成功构建了p EASY-E1-Me Hsp70和p ET30a-Me Hsp70两个原核表达载体,通过热激转化将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21进行表达。对转入Me Hsp70基因的大场杆菌BL21、转入空载的大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21原始菌种在55℃、65℃进行热稳定性测定,在37℃、200 r/min条件下进行生长曲线测定。热稳定性试验结果表明,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌生存时间较长,而转入p EASY-E1-Me Hsp70的菌株、转入空载的菌株和原始菌株热稳定性都相对较差。通过荧光定量PCR测定发现Me Hsp70基因均有上调表达,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌Hsp70基因水平高于其他菌株。生长曲线测定试验结果表明,重组菌株与原始菌株生长曲线基本一致,转入p ET30a-Me Hsp70载体的菌株调整期滞留时间长于其他菌株。该项研究表明Me Hsp70基因能够提升大肠杆菌BL21的抗应激能力和影响大肠杆菌BL21的生长,为进一步开展Me Hsp70基因在象耳豆根结线虫生长过程的功能研究提供了一定的理论基础。
- 陈慧王会芳赵志祥陈绵才
- 关键词：象耳豆根结线虫大肠杆菌抗逆性
- 热带雨林土壤真菌18S rRNA基因多样性分析被引量：3
- 2012年
- [目的]探讨热带雨林土壤真菌群落结构,阐释微生物与植物之间的互作关系,以期为开发利用热带雨林这一特殊生态环境中丰富的微生物基因资源提供理论依据。[方法]运用扩增18S rDNA限制性分析(Amplified 18S ribosomal DNA restriction analysis,ARDRA)和18S rRNA基因序列分析技术,分析了热带雨林土壤真菌物种丰度、优势种群和进化关系等群落结构特征。试验采用PVPP洗涤-CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-SDS热处理等方法,提纯微生物总DNA,构建真菌18S rRNA基因克隆文库,对阳性克隆进行ARDRA分析,选取有代表性的克隆测序,利用DOTUR软件将真菌序列按照97%相似性的标准分成若干个可操作分类单元(Operational taxonomic u-nit,OTU)。[结果]构建的克隆文库包含21个OTU,其中以子囊菌和担子菌为主,各占克隆文库的64.7%和15.5%。子囊菌中以盘菌为主,占到整个克隆文库的47.4%;担子菌中以伞菌为主,占到整个克隆文库的10.4%。接合菌和壶菌均有少量克隆出现在文库中。首次从海南岛热带雨林土壤中发现牛肝菌。研究显示该环境真菌多样性极其丰富,涵盖了真菌主要门的绝大多数。[结论]该研究结果为揭示热带雨林土壤真菌群落结构多样性、挖掘该环境样品的真菌基因资源提供了参考依据。
- 赵志祥肖敏肖敏梁延坡谢丙炎梁延坡
- 关键词：酶切分型系统进化分析
