国家自然科学基金(30571395)
- 作品数：3 被引量：37H指数：2
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- 秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究被引量：32
- 2007年
- 秀丽隐杆线虫作为一种模式线虫,已广泛应用于寄生性线虫基因功能的研究以及寄生性线虫疫苗候选抗原基因的表达。通过对秀丽隐杆线虫形态、培养条件以及保存方面的研究,发现秀丽隐杆线虫在16℃NGM培养基中生长良好,将其放入30%甘油溶液中,在-80℃冰箱中可以保存较长的时间。
- 庞林海杜爱芳李孝军侯玉慧高翔
- 关键词：秀丽隐杆线虫
- 绿色荧光蛋白在秀丽隐杆线虫中的表达被引量：2
- 2008年
- 为探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在秀丽隐杆线虫体内的异源表达,以及电穿孔技术在线虫基因转化中应用的可能性,根据秀丽隐杆线虫Act-1基因序列设计引物,以其基因组DNA为模板,进行PCR扩增,成功扩增出Act-1启动子。将PCR产物与pUCm-T载体连接后,转化至DH5α感受态细胞,筛选出阳性克隆并测序。pEG-FP-N1真核表达载体经双酶切去掉CMV启动子序列,补平自连成载体pEGFP-4.1(4.1kb)。pEGFP-4.1和T载体上的Act-1启动子序列分别经双酶切,连接筛选阳性克隆,并进行酶切鉴定构成pAct-EGFP绿色荧光蛋白表达载体。通过电穿孔法转化秀丽隐杆线虫,通过PCR检测及激光共聚焦显微镜观察发现绿色荧光基因在虫体有明显的表达。
- 周前进庞林海张红丽杜爱芳
- 关键词：秀丽隐杆线虫启动子电穿孔法
- 捻转血矛线虫H11部分功能域基因的原核表达与分析被引量：3
- 2008年
- 生物信息学软件分析表明，捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）ZJ株的H11抗原基因含有4个糖基化位点与1个锌结合区，为分析这些功能域在H11天然抗原诱导的免疫保护中的作用，对H11部分基因进行克隆和表达．参照本实验室在GenBank上登录的捻转血矛线虫ZJ株的H11基因序列设计引物，扩增H11开放阅读框670～1710bp的部分基因序列，命名为HPS（H1jpartial sequence）．基因片段与表达载体pET-28b分别以NdeI、XhoI酶切后构建重组表达载体pET28bHPS，并将其转入大肠杆菌BL21中，提取质粒经PCR和酶切鉴定获得阳性质粒并对其进行测序．结果表明，扩增得到的目的基因片段为1041bp，与已发表的ZJ株和国外株参考序列比较，核苷酸同源性分别为100％和98．8％将重组表达载体用IPTG诱导表达，表达产物利用SDS-PAGE和Western-blotting检测表明，HPS基因在大肠杆菌中成功表达，融合蛋白的分子量约为37．34kDa，诱导6h的蛋白表达量可达到58．9％．
- 张红丽姜小磊周前进杜爱芳
- 关键词：捻转血矛线虫
