江苏省“333工程”培养资金资助项目(2007-16-09)
- 作品数：15 被引量：90H指数：5
- 相关作者：郑金旭汤艳黄振杰卢坤琴夏德刚更多>>
- 相关机构：江苏大学附属医院江苏大学北海市人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省“333工程”培养资金资助项目卫生部科学研究基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Rho激酶-1在肺纤维化小鼠肺组织中的表达变化与上皮-间充质转化被引量：4
- 2010年
- 目的观察Rho激酶-1(Rock-1)在博莱霉素(BLM)致小鼠肺纤维化中的表达变化,探讨其在肺纤维化中与上皮-间充质细胞转化(EMT)的关系。方法将60只小鼠随机分成正常对照组(Cont组),BLM致肺纤维化模型组,地塞米松(DXM)治疗组。BLM组给予0.04ml BLM(5mg/kg)一次性气管内灌注,治疗组在BLM一次性气管内灌注后每天给予DXM 5mg/kg腹腔注射。各组分别于第3、7、14和28天各处死5只小鼠,取肺组织,做病理切片,HE染色观察小鼠肺炎症和纤维化的程度,以样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组织化学检测不同实验组小鼠间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮细胞标记物上皮钙黏素(E-Cad)的表达,应用Western blotting法测定不同实验组小鼠rock-1的表达水平。结果 BLM组肺组织病理切片按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态改变,肺组织胶原含量在第7天明显增加,第28天达高峰,HYP含量测定动态增高。与Cont组比较、BLM组、DXM组E-Cad的蛋白表达降低,α-SMA蛋白表达增高。Western blotting结果显示,BLM组Rock-1的表达与正常对照组比较显著增高(P<0.05),第14天时达到高峰。DXM组Rock-1的表达逐步下降。结论 Rock-1在小鼠肺纤维化中表达增高,表明其可能是肺纤维化形成的促进因子,且随着Rock-1的增高,α-SMA逐步增高E-Cad逐步降低,推测Rock-1在肺纤维化形成中的机制可能与促进EMT有关。
- 郑金旭田高润夏德刚卢坤琴吕晓婷
- 关键词：RHO激酶肺纤维化博莱霉素小鼠
- IL-31在实验性小鼠肺纤维化过程中的动态表达及意义被引量：8
- 2009年
- 目的探讨白细胞介素31(IL-31)在博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中的表达及意义。方法将48只小鼠随机分为对照组和实验组。分别给予0.9%氯化钠注射液和BLM(5 mg/kg)一次性气管内灌注后第7、14、21和28天处死小鼠,取肺组织,应用Western Blotting法测定其中IL-31蛋白表达水平。结果实验组肺组织中IL-31蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。实验组中IL-31蛋白表达从第7天开始高于对照组,第21天达到高峰,第28天降低。结论IL-31在肺纤维化形成过程中存在高表达,尤其在介导中后期肺纤维化进程中发挥重要作用。
- 郑金旭徐丽娜范利娟端礼荣钱海
- 关键词：肺纤维化白细胞介素6
- 肺泡上皮细胞间质转化及其信号转导途径在肺纤维化中的作用被引量：13
- 2011年
- 目的以TGF-β1诱导A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),探讨EMT过程及其信号转导途径在肺纤维化中的作用。方法体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志物的mRNA表达,Western blot检测上皮及间质细胞的标志物以及信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达,应用倒置相差显微镜观察TGF-β1干预前后细胞形态学的变化。结果 TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志物的mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),间质细胞标志物的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1上调(P<0.05),snail2弱表达(P>0.05);倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可以在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制与Smad 2/3、Snail1信号转导途径相关,提示肺泡上皮细胞向间质细胞的转化是肺纤维化发生的直接原因,而Smad 2/3、Snail1信号转导途径很可能是关键环节。通过诱导或促进肺泡上皮细胞向间质细胞转化,可以促使肺纤维化的发病,而通过阻断这一过程及其下游的信号转导通路有望治疗肺纤维化。
- 黄振杰郑金旭汤艳曾彤华蔡文华李斐
- 关键词：转化生长因子Β1A549细胞上皮细胞间质转化肺纤维化
- 肺泡上皮细胞间质转化对肺癌细胞转移影响的研究被引量：7
- 2011年
- 目的:通过以TGF-β1诱导肺腺癌细胞系A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(EMT),并探讨EMT过程的信号转导途径及肺EMT与肺癌转移之间的关系。方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志的mRNA表达,蛋白质印迹法检测上皮及间质细胞标志的蛋白表达、信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1和Snail2的表达及基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,通过倒置相差显微镜观察肺EMT过程中细胞形态学的变化。结果:TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志(E-cad、CK19)的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),间质细胞标志(Vimentin、α-SMA)的mRNA和蛋白表达上调,P<0.05;信号转导蛋白P-Smad 2/3和Snail1上调(P<0.05),Snail2弱表达,P>0.05;基质金属蛋白酶MMP-2上调(P<0.05),MMP-9弱表达,P>0.05;倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论:在TGF-β1的诱导下,肺腺癌细胞从上皮细胞向间质细胞转化,其与Smad 2/3和Snail1信号转导途径相关,同时伴随了MMP-2的表达增强,因此肺泡上皮细胞向间质细胞的转化可能通过改变细胞形态学和增加基质金属蛋白酶的表达,增强了癌细胞的侵袭性,促进肺癌的转移。而通过阻断肺癌细胞的EMT过程及其信号转导途径有可能抑制肺癌的转移。
- 黄振杰郑金旭汤艳蔡文华曾彤华陈文海梁海青
- 关键词：A549细胞转化生长因子Β1上皮细胞间质转化肺肿瘤
- HSP47在肺纤维化中的作用机制被引量：3
- 2010年
- 肺纤维化（PF）是由各种原因引起的弥漫性肺部炎症疾病，其病理特征是肺炎症损伤、成纤维细胞灶的形成、细胞外基质过度沉积，最终导致了肺组织结构的异常重塑。目前，PF的发病机制尚不明确。近年来，细胞因子成为研究疾病发病机制的热点，如TGF-β1、IFN-γ、TNF-α、PDCF、IGF-1、IL-1和IL-8等，它们相互作用，相互协调，形成一个复杂的细胞因子网络，在PF形成中起着重要的调控作用。
- 汤艳郑金旭
- 关键词：热休克蛋白47肺纤维化
- 柴胡皂甙d对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的治疗作用及机制研究被引量：24
- 2010年
- 目的探讨柴胡皂甙d（SSd）抗小鼠肺纤维化的作用及其机制。方法180只小鼠按随机数字表法分5组。其中4组为博来霉素（BLM）诱导肺纤维化模型组（气管内注射BLM5mg／kg），分为单纯造模组（BLM组）、地塞米松（DXM）干预组（DXM组）、SSd干预组（SSd组）和SSd＋DXM联合干预组（SSd＋DXM组），每组40只；造模后1h，后3组小鼠分别腹腔注射DXM5mg／kg（0．1ml）、SSd1．8mg／kg（0．l8m1）、SSd＋DXM（0．1ml＋0．18m1），BLM组腹腔注射0．28ml生理盐水，每天1次，连续28d。另1组为正常对照组（NC组，20只），同时间按同样方法注入0．28ml生理盐水。给药第3、7、14、28天每组各处死5只小鼠，取肺组织行常规组织病理学检查，检测肺组织中羟基脯氨酸（HYP）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量；取外周血检测SOD和MDA含量。造模的4组每组各20只小鼠用于观察自然生存状况。结果SSd可明显提高肺纤维化小鼠存活率（SSd组和SSd＋DXM组存活率均为80．0％，BLM组为50．0％，P〈0．05），并显著减轻小鼠肺泡炎和肺纤维化程度。DXM组、SSd组和DXM＋SSd组肺组织HYP含量给药第14、28天明显低于BLM组（P〈0．05），血清及肺组织MDA含量给药第3、7、14天明显低于BLM组（P〈0．05，P〈0．01），血清SOD含量给药第3、7、14天、肺组织SOD含量给药第3、7天明显高于BLM组（P〈0．05，P〈0．01）。结论SSd有很明显的抗肺纤维化作用，其作用机制可能与抗脂质过氧化作用有关。
- 郑金旭卢坤琴夏德刚田高润黄振杰
- 关键词：柴胡皂甙肺纤维化脂质过氧化作用
- 肺纤维化中肺内细胞参与机制研究进展
- 2011年
- 肺纤维化发病机制包括3个主要环节：肺泡炎症和免疫反应；肺实质损伤；受损肺泡异常修复致肺纤维化。在肺纤维化病程中，肺内各种细胞均参与其中，了解其参与机制有助于探索治疗肺纤维化的潜在靶点。
- 管淑红郑金旭
- 关键词：肺纤维化
- 白细胞介素32在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化组织中的表达及意义被引量：2
- 2010年
- 目的探讨白细胞介素32(IL-32)在博来霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化过程中各期的表达和意义。方法将72只雄性小鼠随机分为三组,每组24只。分别给予0.9%氯化钠注射液0.04ml(C组)和等量的BLM(5mg/kg)(B、A组),一次性气管内灌注。A组在BLM灌注后每天给予地塞米松5mg/kg腹腔注射。然后各组分别于第3、7、14和28天各处死6只小鼠,取肺组织,做病理切片、免疫组织化学染色,应用Westernblot法测定IL-32表达。结果B组肺组织病理切片按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化动态改变。B组肺组织中IL-32蛋白表达水平高于C组(P<0.01)和A组。结论IL-32在肺纤维化形成过程中高表达,可能在肺纤维化形成的早中期发挥重要作用。
- 郑金旭夏德刚田高润卢坤琴丁明钱海
- 关键词：肺纤维化博来霉素白细胞介素32
- 构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型被引量：13
- 2010年
- 背景:肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺发育和肺功能调节中起重要作用,它与肺纤维化和肺癌等疾病的发生发展有密切联系,为了对这些疾病进行体外实验研究,必须对肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、原代培养与鉴定以建立一个稳定高效的细胞模型。目的:建立一套可靠的小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、原代培养与鉴定的方法,为肺纤维化及肺癌等疾病的进一步研究奠定基础。方法:①用低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化法,分离小鼠肺组织细胞成分。取出小鼠肺组织,剪成小块,加入胰蛋白酶,移出细胞悬液,加入含胎牛血清的DMEM中止消化;同法用胰蛋白酶再消化1次,中止消化后加入Ⅰ型胶原酶,再中止消化。②经差速离心差速贴壁和免疫黏附法纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞,进行原代培养。将肺细胞悬液接种入包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出含未黏附细胞的液体接种于另一包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出未黏附细胞,去上清,重悬沉淀,将细胞接种于培养皿和培养板中培养。倒置显微镜观察细胞形态及生长特点,测定肺泡Ⅱ型上皮细胞产量、纯度及活力,免疫细胞化学染色鉴定肺泡表面活性蛋白A和肺泡表面活性蛋白C的表达,透射电镜鉴定肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性细胞结构。结果与结论:用此方法,每只小鼠获得肺泡Ⅱ型上皮细胞(4.8±1.2)×106,纯度达到(85.0±2.4)%,细胞活力为(92.0±2.4)%,倒置显微镜下原代肺泡Ⅱ型上皮细胞呈圆形或立方形,细胞质内有大量反差明显的细小颗粒,细胞为岛状生长方式;免疫细胞化学鉴定,肺泡表面活性蛋白A呈棕黄色,肺泡表面活性蛋白C呈绿色,均定位表达于细胞浆;透射电镜见特征性板层小体和细胞游离面大量微绒毛。证实利用胰酶联合胶原酶消化,差速离心差速贴壁和免疫黏附纯化的方法可获得高产量高纯度的AECⅡ,能满足一般的体外实验要求。
- 郑金旭黄振杰汤艳丁明
- 关键词：小鼠原代培养
- 结缔组织生长因子通过活化ERK1/2通路促肌纤维母细胞增殖被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)促进转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化的肌纤维母细胞增殖作用及其分子机制。方法:用TGF-β1预处理人胚肺成纤维细胞(HELF)48h,使细胞转化为肌纤维母细胞,然后将预处理后的细胞分为对照组,CTGF刺激组,和PD98059干预组。以Western免疫印迹法检测α-SMA水平,并通过MTT法检测CTGF对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化的肌纤维母细胞增殖作用。结果:CTGF刺激组α-SMA蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);用PD98059阻断ERK-1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的α-SMA蛋白表达(P<0.05);CTGF刺激组细胞增殖明显与对照组相比(P<0.01);用PD98059阻断ERK-1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的细胞增殖(P<0.05)。进一步实验显示CTGF刺激细胞15min时能明显诱导TGF-β1预处理细胞内Erk-1/2磷酸化(P<0.01),30min是达到高峰,60min时下降到基础水平。结论:CTGF通过ERK1/2信号通路促进TGF-β1诱导的肌纤维母细胞增殖。
- 郑金旭田安国黄震杰
