国家科技支撑计划(2008BAI54B03)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 相关作者：刘金花董关木刘芳马岚童亮更多>>
- 相关机构：中国食品药品检定研究院中国药品生物制品检定所云南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脊髓灰质炎疫苗研究进展被引量：10
- 2011年
- 脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒感染所引起的疾病,只能以接种疫苗进行预防。口服脊髓灰质炎疫苗已大幅度降低了全球脊髓灰质炎的发病率,然而,由于疫苗相关麻痹型脊灰和疫苗衍生脊髓灰质炎病毒风险的出现,今后必须停止使用口服脊髓灰质炎疫苗,以彻底根除脊髓灰质炎。消灭脊髓灰质炎野病毒之后,将会严格管理来源于野毒株的传统脊髓灰质炎灭活疫苗生产,而用Sab in株研制的脊髓灰质炎灭活疫苗抗原性及免疫原性与传统脊髓灰质炎灭活疫苗不同。脊髓灰质炎病毒样颗粒可能成为一种可开发的脊髓灰质炎疫苗。
- 刘金花董关木
- 关键词：脊髓灰质炎病毒口服脊髓灰质炎疫苗脊髓灰质炎灭活疫苗病毒样颗粒
- 脊髓灰质炎病毒Sabin2株结构蛋白VP1在昆虫杆状病毒表达系统中的表达
- 2011年
- 目的在昆虫杆状病毒表达系统中表达脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)Sabin2株结构蛋白VP1。方法从Sabin2疫苗原液中RT-PCR扩增PV结构蛋白VP1基因,克隆入pFastBac1质粒,转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-VP1。将第2代rBac-VP1感染sf9细胞,间接免疫荧光法检测VP1蛋白的表达,并优化感染条件。结果重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1转化子可扩增出3 203 bp的目的片段;第2代rBac-VP1的滴度为6×107 pfu/ml,其感染的sf9细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,以不同MOI的rBac-VP1感染sf9细胞,VP1蛋白表达量差别不大,而在96 h内,随着感染时间的延长,VP1蛋白的表达量逐渐升高。结论在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达了PV Sabin2株结构蛋白VP1,为脊髓灰质炎亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 刘金花董关木安祺曹守春孔艳
- 关键词：脊髓灰质炎病毒VP1蛋白杆状病毒
- 狂犬病疫苗有效抗原含量检测方法的研究进展被引量：3
- 2010年
- 狂犬病病毒抗原含量是狂犬病疫苗的主要质量指标之一,快速、准确、有效的狂犬病疫苗抗原含量检测方法可以提高工作效率。本文对几种狂犬病疫苗有效抗原含量的检测方法作一综述,并进行了综合评价。
- 刘金花董关木
- 关键词：狂犬病疫苗抗原
- 58型人乳头瘤病毒L2蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 目的原核表达并纯化我国高发的致宫颈癌58型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2,并制备其单克隆抗体。方法从含有HPV-58基因组的质粒pHPV58中扩增L2基因,插入改构的原核表达载体pGEX-KGV中,转化大肠杆菌BL21(DE3),乳糖诱导表达,透析复性并亲和层析纯化重组蛋白,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。结果重组表达质粒pGEX-KGV-HPV58 L2经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,表达量可占菌体总蛋白的15.5%;纯化的重组蛋白纯度可达95%;共获得10株抗HPV-58 L2的高效价单克隆抗体。结论已成功原核表达、纯化了HPV-58 L2重组蛋白,并制备了单克隆抗体,为下一步HPV-58 L2蛋白抗原表位的研究以及相关预防性抗体药物和广谱重组疫苗的开发奠定了基础。
- 林洁吕琦童亮刘芳马岚
- 关键词：原核细胞基因表达蛋白质复性
