国家科技重大专项(2008ZXJ09006-001)
- 作品数：9 被引量：46H指数：4
- 相关作者：李桦谢剑炜魏霞谢蓝王瑞更多>>
- 相关机构：军事医学科学院烟台大学北京军区总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗HIV先导物DAAN-4048在大鼠肝微粒体的代谢产物被引量：1
- 2013年
- 目的应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)并辅以代谢数据采集和处理软件,快速筛查和鉴定了新型非核苷类逆转录酶抑制剂的先导物二芳烃取代苯胺类化合物(DAAN)-4048在大鼠肝微粒体的代谢产物,并分析结构中的代谢软点。方法应用质量亏损过滤技术在UPLC-QTOF-MS/MS上比较分析0 h与2 h孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中筛查得到了DAAN-4048的10个代谢产物。应用仪器的碰撞能量梯度功能(MSE)对部分产物进行MS2分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构。结果结果表明,先导物在大鼠肝微粒体中发生广泛的代谢,Ⅰ相代谢反应以氧化(羟基化)为主,Ⅱ相代谢主要以谷胱甘肽结合反应为主。结论本文通过分析新型抗HIV先导物DAAN-4048的结构和代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为该类先导物结构优化和后续的临床前评价提供了科学指导。
- 王瑞魏霞陈佳秦炳杰谢剑炜李桦谢蓝
- 关键词：非核苷类逆转录酶抑制剂大鼠肝微粒体代谢产物
- 同时定量检测水胺硫磷和水胺氧磷的液相色谱-串联质谱法及应用被引量：1
- 2012年
- 目的建立同时测定大鼠全血中水胺硫磷及其活性代谢产物水胺氧磷的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析方法,用于毒代动力学研究中血药浓度的测定。方法采集大鼠全血样品后即刻用4倍体积冰冷乙腈沉淀蛋白。待测物用Zorbax SB C18柱（2.1 mm×50 mm,1.8μm）分离,以含有0.1%甲酸的水和甲醇为流动相系统进行梯度洗脱。采用ESI源正离子多反应监测模式分析,水胺硫磷、水胺氧磷和内标三唑磷的定量离子对分别为m/z 231→121、274→215和314→162。结果水胺硫磷和水胺氧磷在5μg/L～5 mg/L浓度范围内线性良好,最低定量限为5μg/L,回收率在63.1%～77.8%的范围内,准确度和精密度符合生物样品的检测要求。大鼠静脉注射3 mg/kg水胺硫磷后,水胺硫磷在血中很快下降,消除半衰期为22.2 min。活性代谢产物水胺氧磷的生成也较快,10～15 min达到（257.91±42.00）ng/ml的平均峰值,消除半衰期为17.6 min。水胺硫磷和水胺氧磷的AUC0~t分别为（528.62±49.15）和（191.11±33.23）h.μg/L。结论本研究首次建立了同时定量测定大鼠全血中水胺硫磷和水胺氧磷的LC-MS/MS分析方法,方法的专属性好、灵敏度高,适用于水胺硫磷及水胺氧磷在大鼠体内的毒物代谢动力学研究。
- 魏霞钟玉环原梅谢剑炜李桦
- 关键词：水胺硫磷液相色谱-串联质谱法毒物代谢动力学
- 抗人类免疫缺陷病毒先导物DAAN-5508的大鼠药动学研究
- 2014年
- 目的建立检测大鼠血浆中抗人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）候选化合物DAAN-5508的LC—MS／MS方法，并将其应用于大鼠体内药动学研究。方法血浆样品用甲醇沉淀蛋白处理；色谱分离用含0．1％甲酸的甲醇和水为流动相梯度洗脱，流速为0．3mL·min^-1。定量分析在Triple Quad LC—MS／MS上采用电喷雾离子化电离源（ESI）、正离子多重反应离子监测（MRM）的方式进行。将建立的方法应用于大鼠静注和口服DAAN-5508的药动学和生物利用度研究。结果DAAN-5508在0．2～2500ng·mL^-1内呈良好的线性关系（r^2=0．9998），最低定量限为0．2ng·mL^-1。方法的回收率〉80％，日内和日间精密度和准确度符合生物样品的检测要求。大鼠静注（5mg·kg^-1）和口服（15mg·kg^-1）DAAN-5508后，静注和口服的消除半衰期分别为2．6和4．6h。大鼠口服后DAAN-5508的吸收较快，血浆浓度在1h左右达到（188．0±62．33）ng·mL^-1的峰值，口服生物利用度为12％。结论本实验建立了特异、灵敏、简便快捷的定量检测血浆DAAN-5508的LC—MS／MS方法，成功应用于DAAN-5508的大鼠药动学和生物利用度研究。
- 王瑞秦炳杰魏霞谢剑炜李桦谢蓝
- 关键词：液相色谱-串联质谱法药动学
- 小肠首过代谢的研究进展被引量：10
- 2010年
- 肠道是口服药物的主要吸收器官,肠道上皮细胞中不仅存在大量影响药物吸收的转运体,还含有多种与肝脏中相同的代谢酶。此外,肠腔细菌丛中也含有大量代谢酶。这些因素使小肠成为肝外最重要的代谢器官。肠道对口服药物的首过代谢作用正逐渐被认识,其对口服药物的吸收和生物利用度的影响成为药物代谢性质评价的重要内容。本文概述了小肠上皮细胞中代谢酶的分布特点和含量,肠腔中菌丛的分布特点和所含代谢酶,并对药物肠道首过效应的国内外研究方法和进展进行了综述。
- 邓婧婷庄笑梅李桦
- 水胺硫磷在大鼠肝微粒体的生物转化和代谢动力学
- 目的探讨水胺硫磷在大鼠肝微粒体的体外代谢活化产物及代谢动力学特征。方法应用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(LC/QTOF MS)筛查并鉴定水胺硫磷在大鼠肝微粒体孵育液中的氧化产物。用乙酰胆碱酯酶抑制法考察水胺硫磷及其氧化...
- 魏霞谢剑炜李桦
- 关键词：有机磷化合物水胺硫磷毒性作用
- 文献传递
- 抗HIV候选化合物DAPA-7035的大鼠药代动力学研究被引量：1
- 2012年
- 目的建立检测大鼠血浆中抗HIV候选化合物DAPA-7035的LC-MS/MS方法,并将其应用于大鼠体内药代动力学研究。方法血浆样品用甲醇沉淀蛋白处理;色谱分离在资生堂CAPCELL PAK C18柱(MGⅢ,150 mm×2.0 mm,5μm)上用含0.1%甲酸的甲醇和水为流动相梯度洗脱,流速为0.3 ml/min。定量分析在Agilent 6430 Triple Quad LC-MS/MS上采用电喷雾离子化电离源(ESI)、正离子多反应监测的方式进行,检测离子对分别为m/z 382.2→197(DAPA-7035)和m/z 390.1→208(内标)。将建立的方法应用于大鼠静注和口服DAPA-7035的药代动力学研究。结果 DAPA-7035在0.1～2500 ng/ml的浓度范围内呈良好的线性关系(r2=0.9985),最低定量限为0.1 ng/ml,方法的回收率>80%,日内和日间精密度和准确度符合生物样品的检测要求。大鼠静注(5 mg/kg)和口服(15 mg/kg)DAPA-7035后,静注和口服的消除半衰期分别为3.77 h和5.34 h。大鼠口服后DAPA-7035的吸收较快,血浆浓度在1.6 h左右达到(298.4±42.9)ng/ml的峰值,口服生物利用度为15.3%。结论本研究首次建立了特异、灵敏、简便快捷的定量检测血浆DAPA-7035的LC-MS/MS方法,成功应用于DAPA-7035的大鼠药代动力学和生物利用度研究。
- 王瑞原梅王生彪谢剑炜李桦谢蓝
- 关键词：非核苷类逆转录酶抑制剂液相色谱-串联质谱法药代动力学
- 补骨脂素和异补骨脂素对体外细胞色素P450酶活性的抑制和诱导作用被引量：18
- 2012年
- 目的探讨补骨脂素(PSO)和异补骨脂素(IPSO)对细胞色素P450(CYP)活性的抑制和诱导作用。方法将人肝微粒体或鼠肝微粒体与PSO或IPSO以及CYP特异性探针底物共孵育30 min,分别以非那西丁O-脱乙基、甲苯磺丁脲4-羟基化、美芬妥因-4-羟基化、右美沙芬O-脱甲基化和咪达唑仑1'-羟基化为同工酶CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6(大鼠2D2)和CYP3A4(大鼠3A1/2)代谢活性的标志,用HPLC-MS/MS法检测相应代谢产物的生成量并计算相应的IC50值,评价PSO和IPSO对5种CYP同工酶的潜在抑制作用。将PSO和IPSO或阳性诱导剂与"三明治"培养大鼠肝原代细胞共孵育72 h后,再加入CYP探针底物孵育1 h,检测相应代谢产物的生成量,与阳性诱导剂组比较,评价二者对CYP1A和CYP3A的诱导作用。结果 PSO和IPSO对人肝微粒体和鼠肝微粒体的CYP1A2均有较强的抑制作用,在人肝微粒体中的IC50值分别为0.17和0.13μmol·L-1;在鼠肝微粒体中的IC50值分别为0.47和0.36μmol·L-1。二者对人肝微粒体的CYP2D6也有中等强度的抑制作用,IC50值分别为3.59和9.51μmol·L-1。PSO和IPSO 100μmol·L-1可分别将大鼠肝细胞的CYP3A活性提高1.18和0.96倍,有一定的诱导作用。结论 PSO和IPSO能显著抑制CYP1A2酶活性,对CYP3A有一定的诱导作用。
- 钟玉环沈国林原梅刘万卉李桦
- 关键词：异补骨脂素药物相互作用微粒体
- 水胺硫磷在大鼠肝微粒体的生物转化和代谢动力学被引量：4
- 2012年
- 目的探讨水胺硫磷在大鼠肝微粒体的体外代谢活化产物及代谢动力学特征。方法应用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(LC/QTOF MS)筛查并鉴定水胺硫磷在大鼠肝微粒体孵育液中的氧化产物。用乙酰胆碱酯酶抑制法考察水胺硫磷及其氧化产物水胺氧磷的抑酶活性。应用液相色谱-三重四级杆串联质谱(LC/Triple-Q MS/MS)定量检测肝微粒体中的水胺硫磷及其代谢产物水胺氧磷,研究水胺硫磷及其产物的消长动力学和氧化产物生成的酶动力学。结果筛查并鉴定了水胺硫磷在大鼠肝微粒体的氧化脱硫产物水胺氧磷。水胺氧磷对乙酰胆碱酯酶的抑制活性远高于水胺硫磷,IC50值比水胺硫磷低4个数量级,表明水胺硫磷的氧化脱硫反应是一个代谢活化过程。水胺硫磷在大鼠肝微粒体中的半衰期(t1/2)为14.6 min,外推得到体内肝清除率ClH为43.8 ml·min-1.kg-1。水胺氧磷的生成符合双相酶动力学模型,Km,app1为1.12μmol·L-1,产物生产最大速率(Vmax1)为0.43μmol·min-1.g-1;蛋白Km,app2为67.92μmol·L-1,Vmax2为1.28μmol·min-1.g-1蛋白。结论水胺硫磷在大鼠肝微粒体中能快速代谢消除,生成抑酶活性更高的产物水胺氧磷而产生毒性。
- 魏霞谢剑炜李桦
- 关键词：有机磷化合物水胺硫磷毒性作用
- 生物样品中蓖麻毒素的双夹心酶联免疫定量检测方法及应用被引量：10
- 2011年
- 目的建立定量检测生物样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法并研究毒素在大鼠体内的分布。方法利用抗蓖麻毒素的单克隆抗体(MAb)3D74和辣根过氧化物酶(HRP)标记的小鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体4C13,建立了定量检测血清和组织样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法,并对方法学进行了必要的验证。结果建立的双抗夹心ELISA方法检测组织中蓖麻毒素的浓度范围为1.25～320 ng/ml,最低定量限为2.5 ng/ml,日内和日间精密度分别小于3.5%和9%。将该方法应用于蓖麻毒素组织分布的定量测定,结果显示,大鼠静脉染毒后毒素可以在心、肝、脾、肺、肾、肠和脂肪等组织分布,以脾脏的分布为最高,其次为肝脏,染毒后0.5和2 h脾与血清的比值分别为3.9和7.2。在脑和肌肉中未检出毒素。结论建立的双夹心ELISA方法简便、灵敏,可以用于定量检测血清和组织等生物样品中的毒素含量,为蓖麻毒素的毒物代谢动力学研究及毒素中毒的快速检测提供了技术支撑。
- 王晨宇郎立伟钟玉环王玉霞贾培媛武军华李桦
- 关键词：蓖麻毒素酶联免疫分析
- 两类抗HIV先导物的大鼠肝微粒体代谢产物筛查被引量：3
- 2012年
- 应用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)并辅以代谢数据采集和处理软件,快速筛查了两类新型非核苷类逆转录酶抑制剂先导物DAPA-7012和DAAN-4442在大鼠肝微粒体的代谢产物,并分析结构中的代谢软点。应用质量亏损过滤技术在UPLC-QTOF-MS/MS上比较分析0 h与2 h-孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中分别筛查得到DAPA-7012的14个代谢产物和DAAN-4442的14个代谢产物。应用仪器的碰撞能量梯度功能(MSE)对部分产物进行MS2分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构。结果显示,两个化合物的I相反应以氧化(羟基化)为主,Ⅱ相反应以谷胱甘肽结合为主。骨架结构上B环的差异(吡啶环和苯环)对两类先导物的肝微粒体代谢途径没有显著影响。化合物共同的易代谢位点是B环上的伯胺基与C环上的甲基。不同之处在于DAAN-4442 B环4-位上的硝基易发生还原反应,DAPA-7012C环的苄基碳原子(亚甲基)更易发生氧化反应。课题组前期构效关系(SAR)研究结果表明,伯胺基与甲基均为活性必需基团,有必要通过进一步结构优化来提高这些活性基团的稳定性。将先导物代谢产物信息与结构活性分析相结合,可以为先导物结构优化提供参考。
- 王瑞陈佳秦炳杰谢剑炜李桦谢蓝
- 关键词：非核苷类逆转录酶抑制剂
