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重组腺病毒体外诱导山羊骨髓间充质干细胞成骨分化的研究被引量：6: 2013年; 目的探讨腺病毒介导骨形态发生蛋白2（BMtr2）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）双基因体外转染山羊骨髓间充质干细胞（BMSCs）后目的基因表达与诱导成骨情况。方法从2岁健康雌性山羊髂骨处骨穿抽取骨髓2ml，利用密度梯度离心法分离培养山羊BMSCs，将前期构建好的腺病毒载体Ad—BMP2一bFGF、Ad—BMP2分2组，以MOI=5000分别转染BMSCs，每2d用ELISA法检测BMP2和bFGF的表达情况，每周用ALP染色试剂盒及定量试剂盒检测ALP表达情况。结果Ad—BMP2-bFGF转染BMSCs48h后，目的蛋白已有显著表达（BMP2为3996．22pg／ml、bFGF为1352．15pg／m1），第6天达到高峰（BMP2为5146．63Pg／ml、bFGF为1434．75Pg／m1），与未转染组比较差异有统计学意义（P〈0．05），3周后细胞呈现明显的成骨改变,All。P活性明显增高（266mol／L），Ad—BMP2-bFGF组ALP表达量约为Ad—BMP2组的1．5倍（P〈0．05）。结论经Ad—BMP2-bFGF转染的BMSCs具有持续高水平目的蛋白表达活性，转染后的BMSCs表现出明显的成骨活性．成骨活性明显强于Ad—BMP2组。; 严瀚徐绘华郭奇峰刘青华刘四红娄盼梅勇; 关键词：重组腺病毒骨形态发生蛋白2 碱性成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞

成骨诱导双基因共表达腺病毒载体的构建被引量：2: 2011年; 目的探讨用一条Link序列T2A连接骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因构建含目的基因的腺病毒载体的可行性。方法先从cDNA中扩增得到全长BMP-2和bFGF基因片段．再接于Link序列T2A的两端，通过T2APeptide的互补，延伸得到BMP2-T2A—bFGF的全长PCR产物，利用上游引物的BglⅡ酶切位点和下游引物的EcoRV酶切位点将其插入到pShuttle—IRES载体中，酶切、测序鉴定；利用同源重组技术将目的基因表达框从穿梭质粒转移到腺病毒载体，鉴定阳性克隆；将PacI线性化后的腺病毒载体转染到293A细胞，观察GFP表达，PCR鉴定后进行大量扩增，并用CsCl梯度离心法进行纯化；测量A260计算病毒感染滴度。结果克隆得到的BMP-2与bFGF基因测序正确，经BglⅡ和EcoRV双酶切得到的BMP2-bFGF2个基因全长序列完全克隆到穿梭质粒和重组腺病毒载体质粒中；转染293A细胞2周后观察到明显的GFP聚集表达，即病毒包装成功，扩增纯化后滴度为3．6×10^11 VP／ml。结论经酶切鉴定BMP-2与bFGF双基因共表达腺病毒载体构建成功。; 徐绘华郭奇峰厉新妍刘青华向帅娄盼; 关键词：骨形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子双基因共表达腺病毒

新型钌（Ⅱ）配合物抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导其凋亡被引量：3: 2013年; 【摘要】目的通过体外实验探讨新型钌（Ⅱ）多吡啶配合物△-[Ru（phen）2MCMIP]2＋（△-1）对人骨肉瘤细胞MG-63株增殖及凋亡作用。方法CCK-8法检测经0．00、12．50、25．00、50．00、100．00、150．00Ixmol／LA-1作用24、48、72h后，MG-63细胞的增殖情况；流式细胞术检测经0．00、25．00、50．00、100．00μmol／LA-1作用24h后，MG-63细胞的凋亡及周期变化。结果A．1可明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖，并呈明显剂量和时间依赖性；24、48、72hICs0分别为57．80μmol／L、45．27Ixmol／L、32．51μmol／L；流式细胞术检测得不同浓度△-1作用24h后，细胞早期凋亡比例从（1．06±0．12）％上升至（37．10±1．25）％，细胞周期被阻滞在G0／G1期。结论Δ-1能抑制MG-63细胞增殖，诱导细胞凋亡，并将细胞周期阻滞在G0／Gl期。; 容智敏郭奇峰刘四红刘青华徐绘华; 关键词：MG-63细胞增殖细胞周期

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广东省科技计划工业攻关项目(20108031500005)