河南省科技攻关计划(112102110118)
- 作品数：6 被引量：33H指数：3
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- 相关机构：河南师范大学河南科技学院新乡医学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 内生枯草芽孢杆菌HD-1β-甘露聚糖酶基因的克隆及结构生物学分析被引量：3
- 2013年
- 采用PCR技术从一株内生枯草芽孢杆菌HD-1基因组DNA中扩增出β-甘露聚糖酶基因核苷酸编码序列.序列分析表明,该基因全长1 089bp,编码362个氨基酸和一个终止密码子,N端前27个氨基酸为其信号肽.该酶氨基酸序列与相同来源的β-甘露糖苷酶同源性最高达98.34%,具有ManB保守结构域,属于糖苷水解酶家族26的一员.通过对该酶分子三维结构的预测分析,该酶的催化域形成TIM桶状结构,Cys92和Cys112形成二硫键,它们之间的部分构成该酶的氧化还原反应的活性中心,Glu100和Glu292分别为该酶的酸碱催化位点和亲核催化位点.三维结构的分析为提高酶的催化活性的和功能方面的定向改造提供了依据.
- 张建新刘起丽胡文波聂国兴韩科芳赵杰
- 关键词：内生枯草芽孢杆菌Β-甘露聚糖酶
- 产β-mannanase内生菌的诱变育种和酶学特性研究被引量：3
- 2012年
- 以实验室筛选的产伊甘露聚糖酶的黄豆内生菌Bacillussubtilis HD-1（54．6U／mL）为出发菌株，分别采用紫外线，硫酸二乙酯，紫外线-光复活和紫外线．硫酸二乙酯对其进行诱变，结果表明，以紫外线-硫酸二乙酯复合诱变效果最好，获得-株高产伊甘露聚糖酶的突变菌株BacillussubtilisLID．20，酶活达89．5u／mL，比出发菌株提高了63．9D／01遗传性能稳定。该伊甘露聚糖酶的最适反应温度和pH分别为50℃和7．0，该酶在50℃以下，pH5．0-8．0之间稳定性较好，属于中性酶。亚铁离子和钴离子对酶有较强的激活作用，相对酶活分别提高了13．2％和31．7％，但锰离子对酶有强烈的抑制作用，相对酶活仅有对照组的55．6％；金属离子钾、钙、钴和钡都能增强酶热稳定性，其中钴离子的增强效果最为明显，残余酶活约是对照组的1．5倍。
- 张建新张吨王海磊胡文波韩科芳朱岩昆赵杰聂国兴
- 关键词：内生菌Β-甘露聚糖酶诱变
- 内生枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的纯化研究被引量：1
- 2013年
- 方法:采用硫酸铵盐析、乙醇沉淀和聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系法对β-甘露聚糖酶进行提纯。目的:对一株内生枯草芽孢杆菌UD-20产生的β-甘露聚糖酶进行分离与纯化。结果:硫酸铵盐析与乙醇沉淀法提纯出酶的回收率分别为15%和7.5%,纯化倍数分别为1.968和0.977;双水相法提纯β-甘露聚糖酶在最优的体系为PEG2000 22%(m/m)、(NH4)2SO416%(m/m)、NaCl 2%(m/m)条件下,酶收率高达97.16%,萃取率为99.26%,纯化倍数为2.820。结论:硫酸铵盐析与乙醇沉淀法提纯出酶的回收率很低,而双水相法提纯β-甘露聚糖酶效果较好,可用于进一步的精提纯。
- 张建新韩科芳赵杰曹金金邵亚萍赵念念
- 关键词：Β-甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌双水相体系盐析
- 产β-甘露聚糖酶内生菌的筛选及酶学特性分析被引量：14
- 2011年
- 采用富集培养的方法从黄豆种子中分离出17株内生菌菌株,利用刚果红染色法筛选出3株产β-甘露聚糖酶的内生菌。摇瓶培养并分别测定其酶活力,其中一株酶活力较高,达54.59 U/mL。经生理生化性质测定及16S rDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。酶学性质分析发现,该酶最适作用温度和pH分别为30°C?50°C和7.0,在50°C保温2 h酶活仍保留68%,pH 5.0?9.0条件下保温1 h酶活仍保留64%以上;Zn2+、Ca2+、Co2+、Ba2+、K+对该酶有激活作用,其中以Ca2+的激活作用最为明显,使酶活提高了31%,Mn2+和EDTA对该酶有抑制作用。
- 张建新赵丹丹刘起丽聂国兴张吨胡文波明红
- 关键词：Β-甘露聚糖酶黄豆枯草芽孢杆菌酶学性质
- 柑橘皮内生细菌分离及柑橘青霉病菌拮抗菌筛选研究被引量：13
- 2011年
- 柑橘青霉病是柑橘贮藏期的主要病害,为利用拮抗内生菌进行生物防治,本研究选取3个品种柑橘的橘皮,采用研磨液培养法分离纯化得到26株内生细菌。通过对峙培养法,发现5株内生细菌对柑橘青霉病菌有明显拮抗作用,占菌株总数的19.2%。对这5株细菌进行初步鉴定,分属于气芽孢杆菌属(Aerobacillus sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、气单胞菌属(Aeromonas spp.)、假单胞杆菌属(Pseudomonas spp.)和黄单胞杆菌属(Xanthomonas spp.)5个属。不同的柑橘品种橘皮内的内生拮抗细菌的出现频次不同。抑菌结果表明,培养3天时,H-3抑菌圈直径最大,达到了15.3mm,H-18抑菌圈最小,只有5.6mm;4天时,各抑菌圈直径均有缩小,但缩小幅度不大;5天时H-3拮抗作用仍十分明显,抑菌圈直径为10.3mm。根据H-3的菌体形态特征、生理生化测定及其16S rDNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌的发现对柑橘青霉病的生物防治有较好的应用价值。
- 刘起丽张建新徐瑞富段长勇
- 关键词：拮抗菌
- 内生菌产β-mannanase条件优化及底物特异性研究被引量：2
- 2013年
- 以产β-甘露聚糖酶的植物内生菌Bacillus subtilis UD-20为研究对象,通过对产酶条件优化得出最佳产酶方案为:魔芋精粉30 g/L,蛋白胨3 g/L,硝酸铵3 g/L,氯化钙3.0 mmol/L,氯化镁2.0 mmol/L,氯化钡0.2 mmol/L,2%的接种量发酵培养72 h,酶活高达213.6 U/mL,是优化前的2.4倍,通过补料发酵使酶活提高到275.1 U/mL,较补料前提高了34%。另外,静置培养也使酶活得到了很大提高。较低的Km(10.9 mg/mL)和较高Vmax(9 960.2 U/mL)显示该酶的具有较强的底物特异性,以葡甘露聚糖为底物时的酶活高达6 116.6 U/mL,是酶解槐豆胶的22.2倍,酶解瓜尔豆胶的28.2倍。
- 张建新张吨王海磊韩科芳赵杰聂国兴
- 关键词：内生菌Β-甘露聚糖酶葡甘露聚糖酶动力学
