湖北省科技攻关计划(2006AA304B05)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 相关作者：于愿王从俊陈堃郑建伟薛新波更多>>
- 相关机构：华中科技大学上海市第一人民医院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒介导MDA-7／IL-24选择性促进肝癌细胞的凋亡和增殖阻滞被引量：12
- 2006年
- 目的观察MDA-7／IL-24基因对不同p53状态人肝癌细胞HepG2、MHCC97L以及Hep3B和正常的肝细胞L02的选择性杀伤作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法将携带入MDA-7／IL-24基因的腺病毒Ad．mda-7感染人正常肝细胞L02和不同p53状态的肝癌细胞HepG2、MHCC97L、Hep3B。通过逆转录聚合酶链反应方法观察。MDA- 7／IL-24基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中MDA-7／IL-24蛋白的浓度,通过四甲基偶氮唑盐染色法及Hoechst染色观察MDA-7／IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用,Annexin-V和碘化丙啶双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡,应用流式细胞仪检测细胞周期。结果复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7／IL-24在肝癌细胞株HepG2, MHCC97L和Hep3B以及正常细胞L02中高效表达。细胞培养上清液中有MDA-7／IL-24蛋白表达。MDA-7／IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长,Hoechst染色提示MDA-7／IL-24促进肝癌细胞的凋亡,流式细胞仪提示MDA-7能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无影响,细胞周期分析提示MDA-7／IL-24阻滞肝癌细胞在G2／M期,同时对正常的肝细胞没有促凋亡作用和增殖阻滞作用。结论复制缺陷型重组腺病毒载体Ad．mda-7能介导MDA-7／IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,选择性地杀伤肝癌细胞HepG2、MHCC97L和Hep3B,促进细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡而与肿瘤细胞的P53基因的状态无关,同时对正常的肝细胞L02无任何毒性作用。
- 薛新波郑建伟王从俊陈堃胡回忆胡慧于愿吴在德
- 关键词：基因疗法
- Ad．mda-7高选择性杀伤不同转移潜能肝癌细胞的研究
- 2007年
- 目的利用携带人MDA-7／IL-24基因的复制缺陷型腺病毒（Ad．mda7）作为载体，感染不同转移潜能的肝癌细胞MHCC97H，MHCC97L，Hep3B和正常的肝细胞L02，观察该基因对肝癌的选择性杀伤作用和增殖抑制作用。方法将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒Ad．mda-7感染正常肝细胞L02和肝癌细胞MHCC97H，MHCC97L和Hep3B，通过RT-PCR和ELISA方法观察MDA7基因的表达，通过四甲基偶氮哩蓝染色法（MTT）观察该基因对肝癌细胞的生长抑制，Hoechst染色和流式细胞仪观察MDA-7对肝癌细胞的杀伤作用，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果RT-PCR提示复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7／IL-24在肝癌细胞株MHCC97H，MHCC97L，Hep3B和正常细胞L02中高效表达；ELISA方法检测提示细胞培养上清液中MDA-7／IL-24蛋白的表达，而且随着感染时间延长表达量升高；MTT实验结果表明MDA7能明显抑制肝癌细胞的生长，Hoechst染色和流式细胞仪提示MDA7能促进肝癌细的凋亡；细胞周期检测提示肝癌细胞大量被阻滞在G2／M期，正常细胞没有增殖阻滞作用。各项结果提示MDA7对正常的肝细胞没有促进凋亡和增殖阻滞的作用。结论Ad．mda-7选择性的杀伤肝癌细胞，促进细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡与肝癌细胞的转移潜能无关。
- 王从俊彭志海于愿陈堃郑建伟胡回忆吉文伟薛新波
- 关键词：MDA-7/IL-24基因治疗高选择性
- 重组腺病毒介导MDA-7/IL-24对Hep3B选择性杀伤和抑制增殖的研究被引量：3
- 2007年
- 目的观察黑色素瘤分化相关基因7(MDA-7/IL-24)基因对人肝癌细胞Hep3B和正常的肝细胞L02的作用,并且探讨其该作用机制。方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞HeP3B,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和ELISA方法观察MDA-7/IL-24基因的表达,噻唑蓝染色法(MTT)观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制,Hoechst染色和Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检测二种细胞的凋亡,利用PI染色后流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR方法检测bcl-2的表达变化。结果Ad.mda-7能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株Hep3B和正常细胞L02中高效表达,细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的表达(Hep3B:L02分别为790:810ng/L)。MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞的生长(抑制率分别是83%和1.2%),能促进肝癌细胞的凋亡(58%:2.2%),阻滞肝癌细胞在G_2/M期(48.29%:7.95%)。而对正常的肝细胞没有促凋亡和增殖阻滞作用;能明显的抑制Hep3B的凋亡抑制基因bcl-2的表达。结论Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,选择性的杀伤肝癌细胞Hep3B,促进细胞增殖阻滞,其机制是通过抑制bcl-2的表达诱导肿瘤细胞凋亡。
- 薛新波陈堃王从俊郑建伟于愿彭志海吴在德
- 关键词：腺病毒载体
