国家教育部博士点基金(20070558213)
- 作品数：4 被引量：16H指数：2
- 相关作者：吴长有范艳莹周晖刘昀李琴更多>>
- 相关机构：中山大学广东省人民医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CFSE标记结合流式细胞术在研究NK细胞分裂与杀伤功能中的应用被引量：7
- 2010年
- 目的建立并优化CFSE标记结合流式细胞术检测人NK细胞分裂、增殖和杀伤功能的方法。方法利用CFSE标记磁珠纯化的人NK细胞,加或不加IL-2进行培养。分别在第3、5、7天收集细胞,流式细胞术对NK细胞的分裂增殖进行检测;利用IL-2活化NK细胞作为效应细胞,与靶细胞(K562细胞)按不同效靶比在37℃5%CO_2培养箱共孵育4 h加入碘化丙啶(PI),流式细胞术检测CFSE^+PI^+K562细胞(死亡的靶细胞)的百分率。结果CFSE标记的NK细胞在IL-2的作用下第5天即可观察到细胞增殖,至第7天80%以上的NK细胞均发生增殖,分裂1～6次。在对NK细胞杀伤功能的研究中,发现IL-2刺激后NK细胞的杀伤功显著增强。此外,当IL-2或IL-12活化的NK细胞作用于不同的靶细胞时,均可有效地杀伤靶细胞。结论以CFSE标记技术结合流式细胞术可在单细胞水平客观精确地对NK细胞的增殖、分裂和杀伤功能进行分析。本方法灵敏度高、操作简便易行、重复性好,对其他淋巴细胞亚群功能的研究具有重要的借鉴意义。
- 范艳莹吴长有
- 关键词：CFSENK细胞细胞分裂杀伤功能
- 鞭毛蛋白与IL-12协同诱导人NK细胞产生IFN-γ机制的探讨被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨细菌鞭毛蛋白(flagellin)与IL-12协同诱导人NK细胞产生IFN-γ的作用和机制。方法:自正常人静脉血中分离PBMCs,分别与培养液(medium)、flagellin、IL-12或flagellin+IL-12共同培养。三天后,利用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测培养上清中IFN-γ的水平。收集初次培养组细胞,洗去刺激后进行二次培养,检测IFN-γ的产生。利用流式细胞仪检测NK细胞上IL-12Rβ1和TLR5的表达情况。结果:一次培养的结果表明,flagellin或IL-12单独刺激PBMCs可诱导较低水平IFN-γ的产生。共同刺激下,可协同诱导高水平IFN-γ产生。二次培养结果表明,不同剂量IL-12的刺激flagellin初次培养组细胞,IFN-γ的产生呈剂量依赖性的增加;IL-12初次刺激组细胞在flagellin的二次刺激下,IFN-γ的产生亦呈剂量依赖性增加。流式结果表明,flagellin可上调NK细胞IL-12Rβ1的表达。IL-12可上调NK细胞TLR5的表达。结论:flagellin通过上调NK细胞IL-12Rβ1的表达,IL-12通过促进NK细胞TLR5的表达,从而协同诱导IFN-γ的产生。
- 李琴刘昀吴长有
- 关键词：鞭毛IL-12NK细胞IFN-Γ
- 卡介苗(BCG)通过诱导IL-12产生和受体表达促进人NK细胞功能被引量：6
- 2009年
- 目的:研究卡介苗(BCG)对人自然杀伤细胞(NK)功能的作用及其机制。方法:分离抗结核抗体阴性志愿者外周血PBMC、纯化NK细胞,分别与BCG、IL-12、BCG+IL-12、BCG+抗IL-12Rβ1 mAb(2B10)培养。利用ELISA方法检测培养上清液IFN-γ、IL-12p40含量;利用ELISpot方法检测IFN-γ、颗粒酶B产生细胞的频率;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定杀伤功能。利用流式细胞术检测NK细胞IL-12Rβ1的表达。结果:BCG呈剂量依赖的方式诱导PBMC产生IFN-γ。在BCG刺激条件下,PBMC颗粒酶B分泌细胞数明显高于不加任何刺激剂组(P<0.05)。BCG增强PBMC杀伤活性。BCG不能诱导纯化NK细胞产生IFN-γ,但与IL-12同时刺激则表现出协同作用。纯化NK细胞经BCG刺激后杀伤活性与未刺激相比差异无统计学意义。BCG呈剂量依赖方式诱导PBMC产生IL-12、并促进NK细胞不同亚群表达IL-12Rβ1。2B10抗体抑制BCG对PBMC产生IFN-γ和分泌颗粒酶B的诱导作用。结论:BCG间接地促进NK细胞的生物学活性,其部分机制是通过诱导单核细胞产生内源性IL-12、并上调NK细胞表达IL-12R。
- 周晖范艳莹吴长有
- 关键词：卡介苗自然杀伤细胞外周血单个核细胞
- 记忆性NK细胞的研究进展被引量：1
- 2010年
- 付笑迎吴长有
- 关键词：NK细胞自然杀伤细胞CELLS免疫系统细胞因子病原体
