中国博士后科学基金(20080431367)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：曹广文李淑华方美玉鹿文英王珊珊更多>>
- 相关机构：第二军医大学广州军区疾病预防控制中心上海市虹口区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用环介导等温扩增技术检测西尼罗病毒被引量：4
- 2010年
- 目的建立一种早期快速检测西尼罗病毒的方法。方法以人工合成西尼罗病毒基因(1021～1240,NY99)作为模板,利用环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计合成3套6对引物,特异性识别人工合成西尼罗病毒基因的8个位点,在恒温63℃60min条件下扩增,80℃2min终止反应,通过real-timePCR仪实时监测反应过程,最终产物经凝胶电泳观察。同时将该方法的灵敏度及特异性与常规PCR进行比较。结果 LAMP反应在20min内即可完成,最终产物经电泳观察可见大小片段不等的呈梯度扩增条带,而同为黄病毒属的登革热病毒、流行性乙型脑炎病毒及阴性对照等均无扩增。灵敏性是常规PCR的10倍,可以检测到9.23copies/μl的病毒。结论该方法具有灵敏、特异、快速、简便、成本低等优点,适合基层和现场检测使用,对西尼罗病的早期诊断和流行病学筛查具有重要意义。
- 李淑华鹿文英曹广文
- 关键词：西尼罗病毒环介导等温扩增聚合酶链反应
- 应用单管巢式多重PCR技术检测登革病毒及分型被引量：4
- 2010年
- 目的建立一种单管巢式多重RT-PCR方法,以用于临床对于不同型别登革病毒混合感染的检测并分型。方法将1-4型登革病毒RNA混合,首先用1-4型病毒通用外引物进行一步法RT-PCR,然后以混合病毒RT-PCR产物为模板,在同一反应管内同时加入4对（5条）型特异性引物进行巢式多重PCR,结果用EB染色的3%琼脂糖凝胶电泳观察;并将其检测敏感性和特异性与该方法的单一病毒模板RNA扩增进行比较。结果经反应条件的优化,混合病毒模板单管巢式多重PCR可以在同一反应管内同时扩增出4条病毒特异性目的条带,分别为482、119、290、389 bp。其敏感性和特异性与单一病毒RNA的扩增相当,对模板RNA检测的敏感性可以达到66.068 copies/μl。结论该方法简便、快速、敏感、特异,可以根据扩增目的片段的大小进行诊断和分型,对于临床登革病毒混合感染病例的诊断和快速分型有应用价值。
- 李淑华方美玉刘世建常文军王珊珊曹广文
- 关键词：登革病毒
- 利用反转录环介导等温扩增技术检测麻疹病毒被引量：1
- 2014年
- 目的建立一种快速检测麻疹病毒的方法。方法以分离到的麻疹病毒RNA为模板，利用环介导等温扩增技术（LAMP）原理，设计合成3套引物，特异型识别病毒基因的8个位点，在反转录酶作用下，63℃扩增60min，80℃2min终止反应，最终产物分别经凝胶电泳和荧光目视观察。通过real—time仪实时监测反应过程，同时将该方法的灵敏度、特异度与常规RT-PCR、real-timeRT-PCR进行比较。结果RT-LAMP反应约1h即可完成，最终产物经电泳观察可见大小片段不等的呈梯度的扩增条带，目视显示反应液颜色由黄色变为绿色。灵敏性是常规RT-PCR和real—timeRT-PCR的100倍。结论RT-LAMP方法具有灵敏、特异、快速、简便、成本低等特点，适用于基层和现场使用。
- 李淑华刘岩曹广文
- 关键词：麻疹病毒反转录-聚合酶链反应
