国家自然科学基金(81160098)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：李玉奎王立斌范恒陈冬梅魏军更多>>
- 相关机构：宁夏医科大学南京明基医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- REG3α基因促进胰岛内皮细胞分泌胰岛素
- 2012年
- 目的探讨小鼠胰岛再生衍生因子3α(REG3α)对胰岛β细胞功能代偿作用。方法建立小鼠部分(90%)胰腺切除模型,分别于术前、术后12和24 h检测血糖,术后48 h收集小鼠剩余胰腺组织,经全基因组芯片分析、q-PCR验证REG3α表达;然后构建REG3α过表达质粒,转染MS1细胞系,48 h后ELISA检测细胞上清培养液胰岛素分泌量的变化,并通过q-PCR检测转染后MS1中PDX1、INSULIN2 mRNA表达水平。结果小鼠部分胰腺切除后REG3α发生高表达。转染REG3α过表达质粒组胰岛素分泌量显著高于未转染组(转染REG3α组879±2 ng/L,未转染组686±5 ng/L,P<0.01);转染REG3α过表达质粒组胰岛素分泌量显著高于转染空载体pcDNA3.1组(转染REG3α组879±2 ng/L,转染空载体组671±5 ng/L,P<0.01)。转染REG3α过表达质粒后MS1中的PDX1、INSULIN2mRNA表达水平明显高于未转染组及转染空载体pcDNA3.1组(P<0.01)。结论 REG3α促进内皮细胞表达和分泌胰岛素可能具有对胰岛β细胞功能代偿作用。
- 滕兆刚范恒王立斌李玉奎魏军
- 关键词：胰岛素转染
- 母体和胎儿来源的人胎盘间充质干细胞抑制小鼠皮肤移植免疫排斥作用的比较被引量：4
- 2015年
- 目的研究母体来源的人胎盘间充质干细胞(m PMSC)、胎儿来源的人胎盘间充质干细胞(f PMSC)抑制不同品系小鼠皮肤移植免疫排斥作用的差异及其机制。方法分离两种来源的细胞;流式细胞术鉴定两种来源的细胞及其差异;MTT法检测其增殖能力;利用CD200抗体中和f PMSC的CD200受体;用携带CD200基因及其空载体的腺病毒感染m PMSC。将60只C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只:PBS组、m PMSC组、f PMSC组、f PMSC联合抗CD200抗体组、m PMSC联合CD200腺病毒组、m PMSC联合腺病毒空载体组。以ICR乳鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体,建立异品系皮肤移植免疫排斥模型,并将上述细胞经尾静脉分别注入各组模型小鼠体内。观察小鼠状态及移植皮肤排斥情况。反转录PCR检测小鼠脾脏中白细胞介素17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12的mRNA水平,ELISA检测小鼠血液中IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-12的水平。结果 f PMSC的CD200阳性率明显高于m PMSC。m PMSC、f PMSC组和PBS组比较,f PMSC组和m PMSC、f PMSC联合抗CD200抗体组比较,m PMSC联合CD200腺病毒组和m PMSC联合腺病毒空载体组比较,前者的移植皮肤的存活时间均明显延长。m PMSC和f PMSC组IL-17、IFN-γ和TNF-α的表达量和PBS组比较明显降低;与f PMSC联合抗CD200抗体组相比,f PMSC组IL-17、IFN-γ、TNF-α和IL-12的表达量明显降低;与m PMSC联合腺病毒空载体组相比,m PMSC联合CD200腺病毒组IL-17、IFN-γ和TNF-α的表达量明显降低。结论 f PMSC抑制小鼠皮肤移植免疫排斥的作用优于m PMSC;f PMSC高表达CD200可更强的抑制免疫细胞的增殖、分化以及成熟等,从而更有效的抑制IL-17、IFN-γ、TNF-α等细胞因子的分泌;f PMSC更适于作为临床上抑制皮肤移植免疫排斥作用的种子细胞。
- 郝贵亮王立斌陈冬梅梁雪云王琼朱永朝马晓娜刘晓明李玉奎
- 关键词：胎盘间充质干细胞CD200皮肤移植免疫排斥
- C-fos诱导生长因子在胰腺再生中的重要作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨c-fos诱导生长因子(Figf)对小鼠胰腺再生的影响。方法建立小鼠胰腺损伤模型,于术前、术后12h、24h检测血糖,48h后收集剩余胰腺组织。经全基因组芯片分析、Q-PCR验证Figf发生高表达。构建Figf过表达质粒,转染胰岛内皮细胞(MS 1),36h后ELISA检测上清培养液胰岛素分泌量的变化,Q-PCR检测转染后MS 1中Pdx1、Insulin1mRNA表达水平。结果小鼠胰腺再生过程Figf mRNA表达上调。与未转染组、转染PcDNA 3.1组比较,转染Figf过表达质粒组胰岛素分泌量明显升高[未转染组(116.89±6.09)(P<0.01);转染PcDNA 3.1组(114.24±4.60)(P<0.01)],转染Figf过表达质粒组Pdx1、Insulin1mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。结论 MS 1中过表达Figf可使Pdx1、Insulin1mRNA表达水平升高,增加胰岛素的分泌。Figf可能在胰岛β细胞再生中发挥着重要作用,是小鼠胰腺再生的关键基因。
- 滕兆刚魏军范恒李玉奎王立斌
- 关键词：胰岛素胰腺再生
- pri-mir-302/367重组慢病毒载体的构建及其下游调节基因的鉴定
- 2013年
- 目的:构建可诱导表达pri-mir-302/367的慢病毒载体,并研究miR-302/367家族基因miR-302a/b/c/d和miR-367及其下游调节基因OCT4、SOX2和NANOG在HeLa细胞中的诱导性表达。方法:以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增pri-mir-302/367基因。经双酶切后连接入pLV-TRE质粒,构建pLV-TRE-302慢病毒重组体,酶切及测序予以鉴定。将重组质粒和辅助质粒共同转染293 FT细胞,并测定病毒滴度。用病毒转染HeLa细胞,强力霉素(doxycline,DOX)诱导后,通过real-time PCR测定miR-302/367家族基因及其下游调节基因的表达。实验分为诱导组(DOX+)、非诱导组(DOX-)和空白组(blank)。结果:酶切及测序证实重组慢病毒载体pri-mir-302/367构建成功,病毒滴度为5×106TU/ml;DOX诱导72 h后,real-time PCR结果显示诱导组高于非诱导组和空白组(P<0.05,其中miR-302a:P DOX+vs.DOX-=0.032,P DOX+vs.blank=0.048;miR-302b:P DOX+vs.DOX-=0.001,P DOX+vs.blank=0.001;miR-302c:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.000;miR-302d:P DOX+vs.DOX-=0.002,P DOX+vs.blank=0.047;miR-367:P DOX+vs.DOX-=0.001,PDOX+vs.blank=0.001;OCT4:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.001;SOX2:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.000;NANOG:P DOX+vs.DOX-=0.000,PDOX+vs.blank=0.000),而非诱导组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05,其中miR-302a:P blank vs.DOX-=0.057;miR-302b:P blank vs.DOX-=0.832;miR-302c:P blank vs.DOX-=0.445;miR-302d:P blank vs.DOX-=0.979;miR-367:P blank vs.DOX-=0.161;OCT4:P blank vs.DOX-=0.051;SOX2:P blank vs.DOX-=0.060;NANOG:P blank vs.DOX-=0.078)。结论:成功构建了携带人miR-302/367可控性慢病毒载体,为后续的重编程研究奠定了实验基础。
- 张耀林马海滨陈冬梅范恒李玉奎
- 关键词：HELA细胞
