河北省自然科学基金(C2012401037)
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 相关作者：章广玲袁丽杰朱丽华王梅梅熊亚南更多>>
- 相关机构：华北理工大学中南大学河北联合大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金唐山市科学技术研究与发展指导计划项目更多>>
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- 泛素特异性蛋白酶7对HepG2.2.15细胞的炎症相关因子表达的影响
- 2021年
- 目的在预测miR-217对泛素特异性蛋白酶7(USP7)靶向作用的基础上探讨USP7在HepG2.2.15细胞中的促炎机制。方法将HepG2.2.15细胞分为对照组、转染组(siRNA-USP7)和阴性对照组(siRNA-NC)。检测细胞上清液中谷丙转氨酶(GPT)及谷草转氨酶(GOT)的含量;用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞上清液中乙型病毒性肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型病毒性肝炎e抗原(HBeAg)的含量;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)测定USP7、核因子κB p65(NF-κB p65)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA含量;用蛋白质印迹(Western blot)法和ELISA法检测各指标蛋白含量;用免疫共沉淀法验证USP7与NF-κB p65的相互作用。结果对照组、转染组和阴性对照组的GPT含量分别为(13.45±0.07),(6.85±0.21)和(13.75±0.35)U·L^(-1);GOT含量分别为(15.10±0.57),(7.55±0.07)和(15.70±0.42)U·L^(-1);HBsAg含量分别为(3766.00±62.39),(2093.50±51.47)和(3727.00±55.73)pg·mL^(-1);HBeAg含量分别为(49.64±0.65),(27.49±0.60)和(49.59±1.13)pg·mL^(-1);USP7蛋白表达量分别为0.97±0.03,0.49±0.01和0.96±0.04;NF-κB p65蛋白表达量分别为0.73±0.03,0.46±0.02和0.76±0.01;IL-6蛋白表达量分别为(83.00±4.24),(43.00±4.24)和(82.50±3.54)pg·mL^(-1);TNF-α蛋白表达量分别为(95.00±2.83),(57.00±1.41)和(92.50±4.95)pg·mL^(-1),转染组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫共沉淀显示USP7与NF-κB p65能够有效形成复合物。结论在乙型病毒性肝炎中,USP7呈现高表达,抑制USP7可减轻乙型病毒性肝炎细胞中NF-κB p65、IL-6以及TNF-α的表达,缓解肝细胞炎性损伤。
- 张咪马玉杨璐铭王林裴盛斐章广玲冯福民
- 关键词：乙型病毒性肝炎
- miRNAs对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响
- 目的筛选分析癌症基因组图谱(The cancer genome atlas, TCGA)数据库中，与正常肝组织相比在肝癌组织中差异表达的MicroRNAs(miRNAs)，细胞表型实验检测差异表达的miRNAs(Diff...
- 韩雪
- 关键词：肝癌MIRNAS细胞增殖肿瘤侵袭
- 文献传递
- 低浓度力达霉素对人白血病细胞K562增殖的抑制作用
- 2015年
- 目的探讨低浓度力达霉素(LDM)对人白血病细胞K562增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法以不同浓度LDM处理K562细胞48 h,通过MTT法检测LDM对细胞增殖的抑制作用;利用苔盼蓝染色对细胞活性进行测定;利用瑞氏-姬姆萨染色法观察LDM对细胞形态的影响;Elisa法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在细胞培养上清中的表达;采用Western Blot检测凋亡相关蛋白TNF-α的表达。结果 LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,用10-12、10-11、10-10、10-9、10-8mol/L浓度的LDM分别作用K562细胞48 h,抑制率分别为(21.2±2.48)%、(37.5±0.88)%、(52.1±1.24)%、(64.5±1.61)%和(71.3±2.00)%。通过瑞氏姬姆萨染色,荧光显微镜下可见胞膜皱缩,有泡状突起及不规则凹陷,胞核染色质浓缩,固缩,浓染,断裂成团块分散在胞膜周边。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清,LDM处理组与对照组相比,TNF-α表达水平升高。Western Blot分析显示,分别用10-8、10-10、10-12 mol/L浓度的LDM处理细胞48 h后,TNF-α蛋白的表达量依次为0.42±0.01、1.67±0.13(P<0.01)和2.41±0.08(P<0.01),与对照组0.23±0.02相比,吸光度值比升高。结论低浓度LDM可能通过上调TNF-α表达水平诱导K562细胞凋亡抑制其增殖。
- 穆丹张志斌章广玲刘志勇陈静
- 关键词：力达霉素K562细胞增殖细胞凋亡
- miR-210靶基因HBVSP2的鉴定
- 2012年
- 目的:构建miR-210的过表达载体,利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-210的靶基因HBVSP2。方法:构建含有miR-210前体序列的miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210;选取表达绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pcDNA3/EGFP,将miR-210在HBVSP2上靶位点的一段特异性序列插入该质粒中,构建EGFP报告载体pcDNA3/EGFP-HBVSP2,并与miR-210ASO或者pcDNA3.1(+)/pri-miR-210及表达红色荧光蛋白质(RFP)的pDsRed2-N1共同转染HEK293以及HepG22215细胞,用荧光分光光度计定量检测转染后提取的蛋白样品的荧光值。结果:共同转染pcDNA3/pri-miR-210和pcDNA3/EGFP-HBVSP2质粒后,EGFP/RFP的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-HBVSP2共转染组,差异具有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3/pri-miR-210和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-HBVSP2共转染组(P<0.05)。共转染miR-210ASO和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP的表达量高于共转染LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组,差异具有统计学意义(P<0.05)。LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP低于LacZ和pcDNA3/EGFP组(P<0.05)。结论:成功构建miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210和含有miR-210靶位点的pcDNA3/EGFP-HBVSP2,HBVSP2可能是miR-210的直接靶基因。
- 章广玲熊亚南朱丽华王梅梅甄永占袁丽杰汤华
- 关键词：质粒MIR-210基因转染
- miR-663对PG-LH7和PG-BE1细胞生长增殖和迁移侵袭的影响被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨microRNA-663(miR-663)对人肺巨细胞癌的低转移亚系PG-LH7和高转移亚系PG-BE1生长增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:实时定量RT-PCR检测A549细胞,PG-LH7细胞、PG-BE1细胞、miR-663ASO转染的PG-BE1细胞和miR-663mimics转染的PG-LH7细胞中miR-663表达水平;利用细胞计数、集落形成实验和CCK8法检测miR-663ASO或miR-663mimics转染后的PG-BE1细胞和PG-LH7细胞增殖;Transwell小室检测miR-663ASO或miR-663mimics转染后的PG-BE1细胞和PG-LH7细胞的侵袭和迁移能力。结果:miR-663在PG-LH7细胞中的表达低于A549细胞中的表达水平(P<0.05),miR-663在PG-BE1细胞中的表达高于A549细胞中的表达水平(P<0.05);miR-663mimics转染可以使miR-663在PG-LH7的表达水平增高(P<0.05),miR-663ASO转染可以使miR-663在PG-BE1的表达水平明显降低(P<0.05);miR-663mimics能够有效的促进PG-LH7细胞的增殖(P<0.05)、侵袭迁移能力(P<0.01);miR-663ASO能够有效的抑制PG-BE1细胞的增殖(P<0.05)、侵袭迁移能力(P<0.01)。结论:miR-663过表达能促进人肺巨细胞癌的低转移亚系PG-LH7的增殖、侵袭和迁移能力,而抑制miR-663表达抑制高转移亚系PG-BE1的生长增殖、迁移和侵袭能力。
- 王云朋刘章心怡张荣花赵鹏章广玲刘志勇
- 关键词：增殖
- MiR-199a-5p对肝星状细胞活化增殖的影响被引量：3
- 2021年
- miR-199a-5p是miRNAs家族的一员。为探讨对人肝星状细胞活化增殖和迁移的影响,为临床肝纤维化治疗提供新的思路,本研究构建miR-199a-5p过表达载体、合成miR-199a-5p反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)经脂质体转染LX-2细胞。采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞增殖和迁移能力;集落形成实验检测LX-2细胞的集落形成能力;实时荧光定量PCR技术检测细胞中转染miR-199a-5p后纤维化相关基因α-SMA和CollagenⅠ的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞中α-SMA表达水平。结果表明miR-199a-5p可以促进LX-2细胞增殖(P<0.01)、迁移(P<0.01)和集落形成(P<0.01);而ASO-199a-5p-5p组细胞增殖(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)和集落形成能力(P<0.01)受到抑制。RTqPCR结果显示miR-199a-5p在受TGF-β1刺激后的LX-2细胞中的miRNA表达水平高于未受刺激组的(P<0.05),转染miR-199a组细胞中α-SMA的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达水平升高。以上结论表明miR-199a-5p过表达能促进肝星状细胞活化、增殖。
- 王源刘章心怡苏静慧王密斯张荣花熊亚南王梅梅甄永占章广玲
- 关键词：肝星状细胞细胞增殖迁移
- 微小RNA在恶性肿瘤靶向治疗中的研究进展被引量：6
- 2018年
- 恶性肿瘤一直是当今世界最难攻克的顽疾之一,肿瘤靶向治疗以其高效低毒等特点为病人带来了新的希望,目前的靶向药物主要是单克隆抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂。微小RNA（micro RNA,mi RNA）是一类小的、进化保守的非编码RNA,负性调节编码基因以及非编码转录因子的表达,是各种细胞主要调控者,在肿瘤的发生、进展以及转移中发挥了重要的作用。研究显示,多种肿瘤均存在大量发挥癌基因或抑癌基因作用的mi RNA的表达失调,而这些表达异常的mi RNA已成为人们研制肿瘤靶向治疗的又一新工具。因此本研究就近年来mi RNA在肿瘤靶向治疗中的相关研究做一简要综述,以期为肿瘤的靶向治疗提供新的视角。
- 赵洪焕孔艺璇章广玲李玉凤韩素桂
- 关键词：微小RNA肿瘤靶向治疗
- MiR-23a质粒的构建及其在胃腺癌细胞系MGC803中的表达被引量：4
- 2014年
- 目的构建表达微小RNA-23a(miR-23a)的真核表达质粒,为进一步研究小RNA分子miR-23a在胃腺癌细胞系MGC803中的功能奠定良好的实验基础。方法首先设计并合成扩增miR-23a前体基因全长的PCR引物,提取胃腺癌细胞系MGC803基因组为模板,PCR扩增大小为324 bp的目的基因;PCR产物经过EcoR I和Bgl II酶切后,与线性化的pcDNA3载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒经脂质体方法转染MGC803细胞,实时定量PCR检测转染细胞MGC803中miR-23a的表达水平,经MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL实验及Transwell实验,观察过表达miR-23a后对MGC803细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果纯化质粒的相对分子质量为5.7 kb,酶切及测序鉴定结果符合目的条带大小(324 bp),插入的寡核苷酸序列与miR-23a前体基因序列完全相符;实时定量PCR结果表明pcDNA3/miR-23a能够有效表达miR-23a;MTT、平板克隆形成及软琼脂克隆形成实验结果显示,过表达miR-23a可以促进MGC803细胞活性;TUNEL实验结果显示,过表达miR-23a可以减少胃腺癌细胞MGC803凋亡的发生;Transwell实验结果显示miR-23a可以促进胃腺癌细胞MGC803的侵袭能力。结论构建的真核表达质粒在胃腺癌细胞MGC803中有效表达miR-23a,能够促进细胞活性及侵袭能力,并能抑制凋亡的发生。
- 陈力王梅梅周洪霞熊亚南章广玲李淑英袁丽杰朱丽华
- 关键词：细胞活性凋亡
- MiR-1-3p通过CAAP1抑制肝癌细胞HepG2的生物学行为被引量：1
- 2021年
- 为探讨miR-1-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的细胞生物学行为的影响,本研究通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-1-3p在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平;miR-1-3p过表达载体、miR-1-3p inhibitor分别转染HepG2细胞,RT-qPCR实验检测转染后miR-1-3p表达水平;通过CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、Western blot实验、划痕实验和Transwell实验研究miR-1-3p对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;利用生物信息学技术预测miR-1-3p的靶基因,并通过双荧光素报告实验对miR-1-3p的靶基因进行验证;RT-qPCR和Western blot实验检测miR-1-3p对CAAP1 mRNA及蛋白的表达影响。结果显示miR-1-3p在HepG2细胞系中的表达明显低于正常肝细胞LO2(P<0.05),体外细胞学实验结果显示,过表达miR-1-3p能够显著抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进凋亡,而下调miR-1-3p的表达则作用相反,双荧光素报告实验表明miR-1-3p过表达显著抑制野生型荧光素酶活性,RT-qPCR和Western blot结果显示miR-1-3p过表达显著抑制CAAP1表达,进而抑制其蛋白表达。本研究初步表明,miR-1-3p可能通过调控其靶基因CAAP1抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,miR-1-3p可能是一种新的治疗肝癌的小分子靶点。
- 侯晓丽卢鸿健苏静慧王一同刘雨潭王梅梅张荣花章广玲
- 关键词：肝癌细胞增殖凋亡
- miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨miR-185对人肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响。方法构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721。利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NR1D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NR1D1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用。结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P<0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NR1D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NR1D1 mRNA的3'端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P<0.05)。结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NR1D1是miR-185的直接靶基因。
- 王密斯张荣花王琳孔艺璇冯雪研刘志勇甄永占章广玲
- 关键词：肝癌细胞细胞增殖肿瘤浸润细胞运动
