江苏省自然科学基金(BK2006014)
- 作品数：14 被引量：80H指数：6
- 相关作者：唐家琪王长军潘秀珍郑峰陆承平更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京农业大学聊城职业技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 病原菌毒力岛研究进展被引量：8
- 2008年
- 毒力岛作为基因组岛的一种亚类,是细菌染色体上具有特定结构和功能特征的可移动基因大片段,经基因水平转移(转导、接合或转化)获得,可使细菌基因组进化在短期内发生"量的飞跃",直接或间接增强细菌的生态适应性,与病原菌的致病性密切相关。毒力岛存在于多种动植物病原细菌中,对于细菌的毒力变异、遗传进化甚至新病原亚种形成有重要意义。简要综述了病原菌毒力岛的研究进展,介绍了毒力岛的结构、功能特征及其在病原菌进化中作用。
- 王长军唐家琪
- 关键词：病原菌基因水平转移
- 江苏省中部地区猪链球菌主要致病血清型分子流行病学调查被引量：6
- 2008年
- 目的了解江苏省中部地区正常猪群猪链球菌及主要致病血清型分布。方法采集江苏省中部地区正常屠宰猪样本303份，用聚合酶链反应（PCR）法进行猪链球菌及主要致病血清型的检测，并对3株分离的猪链球菌菌株进行系统的生物学和分子遗传学鉴定。结果303份猪标本中，2005年正常猪群中猪链球菌的携带率达88．0％，其中1（或14）型、2（或1／2）型、7型和9型携带率分别为9．6％、8．5％、11．3％、29．5％；2006年正常猪群中猪链球菌的携带率为82．5％，1（或14）型、2（或1／2）型、7型和9型携带率分别为17．6％、2．4％、25．8％、20．0％；3株分离菌株均为2型，2a毒力因子表现型为cps2^＋／gdh^＋／mrp^-／epf^-／sly^-／fops^＋／orf2^＋／89k^-，2f、14e毒力因子表现型均为cps2^＋／gdh^＋／mrp^-／epf／sly^-／fbps^-／orf2^-／89k；3株分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、青霉素等高度敏感，但对阿米卡星和四环素有显著的耐药性；对BALB／c小鼠和家兔无明显致病性。结论江苏省中部地区正常猪群中猪链球菌携带率处于较高水平，多种血清型同时存在，毒力因子表型与流行毒力株有显著差异。
- 鞠爱萍王长军郑峰潘秀珍董亚青葛俊超陆承平唐家琪
- 关键词：猪链球菌聚合酶链反应流行病学分子
- 猪链球菌2型唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株的构建及其生物学特性被引量：8
- 2009年
- 利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株。PCR和Southern杂交结果均显示neuB基因在1株转化重组体中完全被壮观霉素抗性基因替代,表明neuB基因敲除突变体构建成功。生物学特性鉴定显示,突变体与强毒株在菌落形态、溶血活性以及染色特性方面均无明显差异;电镜检查发现突变体表面结构组分与强毒株有显著差异,荚膜明显变薄,质地更加紧密;小鼠致病性试验结果显示,突变体毒力显著减弱。研究结果提示菌体荚膜中的唾液酸对于猪链球菌2型侵袭和致病具有重要作用。
- 董瑞萍王长军程功李明王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除生物学特性
- 猪链球菌2型人源分离株EF单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2008年
- 为了解猪链球菌2型(SS2)菌株毒力相关因子的致病机理,建立高效的免疫学检测方法,将SS2胞外因子(EF)抗原性强的区域通过基因克隆、原核表达,经亲和层析纯化的EF蛋白免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫细鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗EF蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶128～1∶512,诱生腹水的抗体效价为1∶104～1∶105。4株McAb腹水的Western blot鉴定表明McAb能特异性的识别EF。以2G1单抗腹水与和EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。
- 王海丽徐公义王长军唐家琪陆承平
- 关键词：猪链球菌2型单克隆抗体
- 猪链球菌基因芯片检测方法的研究被引量：16
- 2008年
- 目的建立猪链球菌基因芯片检测方法,实现对猪链球菌种、致病血清型及毒力相关基因的同步检测和鉴定。方法根据GenBank中猪链球菌的相关序列,设计并合成探针,采用点样法制备芯片;检测样本基因组DNA标记后与基因芯片杂交,激光扫描检测信号。结果检测结果显示,针对猪链球菌种、主要致病血清型及主要毒力相关基因设计的寡核苷酸探针可特异地识别对应靶基因,重复性好;而针对不同菌株设计的株特异性探针未获得预期检测效果。结论初步建立猪链球菌基因芯片检测体系,敏感性与特异性高,对于高通量鉴定猪链球菌菌种及其毒力有重要价值。
- 郑峰王长军曾海攀董亚青鞠爱萍潘秀珍朱进唐家琪
- 关键词：猪链球菌基因芯片血清型毒力
- 猪链球菌2型人源分离株MRP单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2008年
- 为建立一种针对猪链球菌2型（SS2）毒力因子的特异性检测方法，研制了抗SS2溶菌酶释放蛋白（MRP）单克隆抗体（McAb），并对其生物学活性进行了分析。将表达、纯化的SS2菌株MRP免疫BALB／c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，以纯化的MRP蛋白作为包被抗原，通过间接ELISA方法筛选获得了6株能稳定分泌抗MRPMcAb的杂交瘤细胞系288、3G5、1G1、3G9、186和2C3。经用间接ELISA方法测定，单抗腹水的抗体效价均超过1：10^5，杂交瘤细胞培养上清液的效价为1：128～1：1024。Western-blotting鉴定结果表明，6株单抗均具有特异的生物学活性；以288单抗腹水和SS2多克隆抗血清建立的夹心ELISA方法可特异地检测MRP。
- 王海丽徐公义王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白单克隆抗体
- gdh基因在猪链球菌中的分布及重组GDH的抗原性研究被引量：7
- 2008年
- 目的了解谷氨酸脱氢酶基因(gdh)在不同血清型猪链球菌(S.suis)中的分布情况,分析重组谷氨酸脱氢酶(GDH)的抗原性,为其应用于S.suis感染诊断和疫苗研究提供实验数据。方法应用PCR方法检测不同血清型S.suis中的gdh;利用45 kD重组GDH制备多克隆抗体,Western blot方法分析S.suis各血清型菌株与多克隆抗体的反应以及实验感染S.suis2型的猪血清与重组GDH的反应情况。结果在S.suis35个血清型标准株中,除了22、26、27、29、32及34型以外,其余包括1、2、1/2、7、9和14型在内的29个血清型、61株国内外S.suis2型分离株全部扩增出目的条带。用重组GDH免疫小鼠,在小鼠血清中均检测到抗GDH的抗体;Western blot结果显示,全部被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带,6份实验感染猪血清均能与重组GDH产生反应条带。结论重组GDH具有免疫原性和反应原性,该蛋白有可能作为建立诊断试验的候选抗原,为进一步开展相关的血清学诊断方法和疫苗研究奠定基础。
- 潘秀珍赵华梅葛俊超王长军李先富郑峰唐家琪
- 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶抗原
- 猪链球菌2型烯醇化酶的分子克隆与免疫学特性被引量：5
- 2008年
- 对新近测定的猪链球菌2型(S.Suis 2)05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,设计合成引物,PCR法扩增出约1.3 kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32a。将重组表达质粒pET32a::eno转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE初步检测到分子量约为75kD的蛋白带。通过His-Tag亲和层析纯化,获得融合蛋白His-ENO。Western-blot表明该表达产物具有免疫原性。基于ELISA进行的细胞定位实验证实了Enolase可以部分存在S.suis 2 05ZYH33细菌的表面。这提示了Enolase作为一种新发现的抗原对于引发猪链球菌相关疾病可能发挥着重要的作用。
- 孙雯潘秀珍王长军郑峰唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型烯醇化酶ELISA
- 猪链球菌2型中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷菌株的构建被引量：6
- 2009年
- 目的构建猪链球菌2型(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷株。方法利用同源重组基因敲除方法获得S.suis2强毒株05ZYH33荚膜合成基因cps2B敲除突变株,通过小鼠攻毒实验证实荚膜缺陷株对细菌毒力的影响。结果PCR和Southern杂交结果均显示cps2B基因完全被壮观霉素抗性基因替代,表明基因敲除突变体构建成功。电镜结果证实突变体荚膜合成能力缺失,小鼠致病性实验结果显示突变体毒力基本丧失。结论成功构建05ZYH33荚膜缺陷株,提示菌体荚膜多糖成分对于猪链球菌2型侵袭和致病具有显著作用。
- 胡丹王长军胡福泉王晶程功李明潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型荚膜多糖基因敲除
- 猪链球菌2型反应调控因子ReυS突变株的构建被引量：2
- 2008年
- 目的构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33反应调控因子ReυS基因敲除突变体，研究基因敲除后对细菌基本生物学性状及对小鼠和猪的致病性的影响。方法构建中间为壮观霉素抗性基因，两侧为ReυS编码基因上、下游同源序列的基因敲除载体，通过同源重组和PCR法鉴定，获得ReυS编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代的突变株。体外观察基因敲除后细菌的稳定性、生长曲线、菌落形态、溶血性、染色情况、镜下形态及蛋白表达等基本生物学性状有无发生明显改变。以10^8CFU野毒株和缺失株分别感染BALB／c小鼠和20日龄仔猪，观察致病性有无明显区别。结果PCR分析显示ReυS编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代，基因敲除后细菌的基本生物学性状无明显改变。动物感染实验显示，RevS缺失株对小鼠的致病性显著减弱，但对其主要宿主猪的致病性未见显著改变。结论成功构建了猪链球菌2型强毒株05ZYH33反应调控因子ReυS基因敲除突变株，基因敲除后未明显影响细菌的基本生物学性状，但对小鼠和猪的致病性有所减弱。
- 鞠爱萍王长军李明程功郑峰潘秀珍陆承平唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除
