广东省医学科学技术研究基金(A2003074)
- 作品数：9 被引量：106H指数：4
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- 应用流式细胞术研究大蒜粉对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响被引量：3
- 2006年
- 目的建立流式细胞术检测小鼠巨噬细胞吞噬功能的方法,探讨其在保健食品增强免疫力功能评价中的意义。方法昆明种小鼠随机分为4组,其中3组分别按0.11、0.22、0.66 g/(kg.BW)低、中、高3个剂量的大蒜粉片灌胃,阴性对照组给予纯净水,连续30 d后,分离小鼠腹腔巨噬细胞,与调理后的荧光微球孵育后,用流式细胞仪检测FITC荧光阳性巨噬细胞数来计算巨噬细胞吞噬率,观察大蒜粉对腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能的影响,同时用ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验及小鼠迟发型变态反应试验观察大蒜粉对小鼠细胞免疫功能的影响。结果用荧光微球技术结合流式细胞仪检测实验组和对照组的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能,结果显示,实验组(大蒜粉)能明显提高小鼠巨噬细胞吞噬功能,其低、中、高3个剂量组吞噬百分率分别为(24.42±4.10)%、(23.82±4.55)%、(29.55±5.81)%,吞噬指数分别为0.36±0.07、0.35±0.08、0.47±0.11,均高于阴性对照组[(17.32±4.80)%,0.24±0.07](P<0.01);各剂量组迟发型变态反应能力均升高,低剂量组淋巴细胞转化值增高,均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的方法具有简便、快捷、重复性好以及准确率高的特点,适合在保健食品增强免疫力功能评价中推广应用。
- 黄琼李志杨杏芬黄俊明黄建康蔡玟
- 关键词：流式细胞术小鼠
- 环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与评价被引量：51
- 2008年
- 目的建立环磷酰胺致免疫低下模型,应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/自然杀伤细胞G2D受体(NKG2D+)和T淋巴细胞分化抗原CD69+/CD3+评价其免疫低下动物模型中的应用。方法以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+和外周血T淋巴细胞CD69+/CD3+亚群,同时进行脾NK细胞活性测定,ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和牌的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性降低。结论环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立长期免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值。
- 杨颖蔡玟黄志彪黄俊明李文立黄健康
- 关键词：保健食品免疫低下
- 灵芝虫草菌丝体对大鼠NK细胞活性影响的流式细胞术研究被引量：2
- 2005年
- 目的:研究灵芝与虫草菌丝体联合使用对SD大鼠NK细胞免疫调节的作用。方法:将灵芝虫草菌丝按0.75%和1.50%的比例掺入饲料中(分别相当于0.75 g/kg、1.50 g/kg BW剂量)给SD大鼠自由摄食,连续30 d后取其外周血用流式细胞术检测NK细胞活性。结果:1.50g/kg BW剂量组大鼠外周血CDl61a-/CD25+和CDl61a+/CD25+的表达明显高于对照组,差异比较有统计学意义(P<0.05)。结论:灵芝虫草菌丝体有增强大鼠NK细胞活性的作用。
- 黄建康黄琼李志蔡玟杨杏芬黄俊明
- 关键词：流式细胞术NK细胞CD25
- 荧光微球分析技术及其应用被引量：3
- 2005年
- 黄琼
- 流式细胞术在保健食品功能评价中的应用被引量：6
- 2005年
- 目的建立保健食品增强免疫力功能评价指标的流式细胞术检测方法,并初步评价其应用价值。方法3种受试物蛋白粉、参茸膏和灵芝虫草菌丝体小鼠实验模型的实验剂量组均按人体推荐量的5、10、30倍进行灌胃,阴性及阳性对照组均给予等量纯净水,阳性对照组为给药结束前3d开始每天灌胃给予25mg/kg左旋咪唑,并于给药结束当天用2%绵羊红细胞进行免疫;大鼠实验模型采用拌饲法按人体推荐量的25、50倍给予受试物;实验结束后同步检测以下指标:(1)传统指标:包括刀豆素A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠脾自然杀伤(NK)细胞活性测定、绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。(2)流式细胞仪检测指标:小鼠外周血淋巴细胞计数,大、小鼠T、NK细胞表面活化抗原检测以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能。结果给予受试物蛋白粉后,0.83、1.67、5.01g/kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞的相对比例和绝对数量与阴性对照组间差异无统计学意义;给予受试物参茸膏后,3.75、7.50和15.0ml/kg剂量组的小鼠外周血T淋巴细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,与其他传统检测指标有良好一致性;蛋白粉0.83、1.67g/kg剂量组小鼠外周血NK细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,且与NK细胞活性测定结果有良好一致性;给予1.50g/kg剂量灵芝虫草菌丝体的大鼠外周血NK细胞CD25表达阳性比例较阴性对照组升高;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验:传统检测方法未发现对照组与剂量组有明显差别,而流式细胞术检测结果显示:灵芝虫草菌丝体0.15、0.30和0.90g/kg剂量组总吞噬比例增加,0.30、0.90g/kg剂量组吞噬指数均提高。结论应用流式细胞术检测保健食品增强免疫力功能指标,与传统方法检测结果具有良好一致性,且具有更高的敏感性,在检测和评价保�
- 杨杏芬黄琼黄俊明李志蔡玟黄建康陈壁锋
- 关键词：流式细胞术保健食品外周血NK细胞大鼠实验模型外周血淋巴细胞计数阳性对照组
- CD69^+/NKG2D^+比值在保健食品评价中应用被引量：4
- 2005年
- 目的研究小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/NKG2D+检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用。方法以左旋咪唑25mg(kg·bw)连续灌胃3d设立左旋咪唑阳性对照;进行小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+检测和脾NK细胞活性测定试验,观察0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉对小鼠NK细胞免疫功能的影响。结果与阴性对照组比较,左旋咪唑对照组和0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉剂量组外周血NK细胞CD69-/NKG2D+、CD69+/NKG2D+比值以及脾NK细胞活性均明显升高。结论外周血NK细胞CD69+/NKG2D+检测与传统的NK细胞免疫检测结果有较好一致性,且方法敏感性较好,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。
- 黄琼李志黄建康杨杏芬黄俊明蔡玟
- 关键词：自然杀伤(NK)细胞左旋咪唑保健食品
- 流式微球分析技术应用于小鼠血清免疫球蛋白同种型的检测研究
- 2006年
- 目的：建立流式微球分析技术鉴定免疫球蛋白同种型的方法，为其应用于单克隆抗体制备提供参考。方法：采用绵羊红细胞致敏小鼠产生相应抗体，利用Mouse Immunoglobulin Isotyping CBA Kit检测血清中免疫球蛋白同种型及κ、λ轻链的表达。结果：阴性对照显示所有免疫球蛋白同种型检测阴性；标准样品1显示IgG1λ，IgG2bλ，IgAλ和IgG1κ，gG2bκ，IgAκ，IgEκ阳性，标准样品2显示IgG2aλ，IgG3λ。IgMλ和XgG2aκ，IgG3κ，IgMκ阳性；与标准一致。原血清检测显示所有免疫球蛋白同种型均阴性；血清1：10～1：10000稀释后检测结果显示IgMλ链及IgG1，IgG2a。IgG2b、IgG2b，IgG1，IgG2bκ链随稀释倍数不同有不同的表达。血清在1：1000～1：10000稀释范围检测结果较一致。其中又以1：5000为最佳检测浓度。而血清1：100稀释后虽然κ链的表达均能检测到，但与表达的水平不相关；血清1：100000稀释后只检测到IgG1，IgG2κ链的表达。结论：CBA方法分析免疫球蛋白同种型属于定性检测，方法灵敏、简便快速且便于大量检测，是目前鉴定免疫球蛋白同种型的较优方法。
- 黄琼蔡玟黄俊明杨杏芬李志黄建康
- 关键词：小鼠
- 流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能被引量：36
- 2007年
- 目的确立采用流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的实验条件，以提供一种快速、准确和敏感的方法评价保健食品对吞噬功能的影响。方法取昆明种小鼠巨噬细胞，与荧光素标记大肠杆菌于37℃避光孵育1．5h，与荧光微球于4℃，25℃及37℃避光孵育1．5h或于37℃避光孵育0．5，1．0，1．5和2h后，用流式细胞仪观察和分析腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球或荧光素标记大肠杆菌的能力。吞噬百分率（PP）表示吞噬一个或多个荧光微球的巨噬细胞占巨噬细胞总数的百分比；吞噬指数（PI）表示平均每个巨噬细胞吞噬荧光微球的数量；或吞噬荧光素标记大肠杆菌实验中，在M1处每个巨噬细胞的平均荧光强度（FI）。为验证和确定实验条件的可靠性，取昆明种小鼠每日经口分别给予蛹虫草菌丝体或灵芝孢子油30d后，取腹水巨噬细胞。分别与荧光微球或荧光素标记E．colik-12于37℃，培养1．5h后用流式仪进行吞噬功能的检测。结果25℃及37℃孵育条件时，PP分别为（28．0±1．4）％和（44．0±3．3）％，显著高于4℃的结果；1．5h及2．0h孵育时间，PP分别为（34．9±4．0）％和（39．5±11．3）％，显著高于0．5h及1．0h的结果。25—37℃孵育1．5—2．0h是合适的孵育条件。37℃孵育未加重组小鼠IFN-γ（rmIFN-γ）刺激时，PP为33．8％。PI为1．80，经rmIFN-γ处理后，PP为73．6％。PI为2．64，吞噬功能明显增强。0．15，0．30及0．90g·kg^-1蛹虫草菌丝体处理组PP和0．30及0．90g·kg^-1蛹虫草菌丝体处理组PI均较阴性对照组显著提高。0．33和1．00g·kg^-1灵芝孢子油处理组M1处的FI显著高于阴性对照组。结论流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能是一种灵敏、简便、准确而高通量的定量评价保健食品影响吞噬功能的方法。
- 黄琼李志杨杏芬黄俊明黄建康蔡玟
- 关键词：流式细胞术
- 免疫低下模型的建立及流式细胞术的检测研究被引量：9
- 2007年
- 目的:探讨环磷酰胺致免疫低下模型的建立,并试图研究应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)和T淋巴细胞的应用。方法:以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群和外周血T淋巴细胞亚群,同时进行脾NK细胞活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果:环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和脾的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性降低。结论:环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立保健食品免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。
- 杨颖李志黄俊明黄琼蔡玟黄健康张静李欣黄志彪
- 关键词：保健食品免疫低下动物模型淋巴细胞亚群流式细胞术
