国家教育部博士点基金(20110146110012)
- 作品数：6 被引量：19H指数：4
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- 利用细菌双杂交文库筛选华癸中慢生根瘤菌7653R中与外膜蛋白Opa22互作的蛋白被引量：6
- 2014年
- 为研究华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653R外膜蛋白Opa22在共生固氮过程中的作用机制,构建了细菌双杂交基因组随机文库,并以Opa22为诱饵,钓取与其相互作用的候选靶蛋白。结果获得12个与Opa22蛋白互作的阳性克隆,为后续研究Opa22的作用机制提供了新的线索和思路,同时也为开展根瘤菌蛋白互作的研究构筑了良好的技术平台。
- 李一星李芳周鑫兰谢福莉李友国
- 关键词：共生固氮
- 紫云英根瘤中共生固氮下调表达基因的分离与初步分析被引量：2
- 2014年
- 对前期利用抑制消减杂交技术（Suppressive subtractive hybridization， SSH）构建的紫云英（A stra-galus sinicus）根部组织的共生固氮差异表达cDNA文库进行了全文库测序和初步分析，并利用半定量RT-PCR方法验证了其中5个基因片段在根瘤中的下调表达。结果表明，从180个克隆中共获得94个有效序列，文库插入片段长度为200~1300 bp。 BLAST同源比对分析结果表明，有90个序列可以找到同源片段，有4个可能为新基因，按功能分为10个类群。
- 李一星吴梅李友国
- 关键词：共生固氮抑制消减杂交
- 华癸中慢生根瘤菌7653R MCHK_8182基因的共生固氮功能被引量：9
- 2016年
- 根据华癸中慢生根瘤菌7653R全局转录组分析结果,获得在共生固氮阶段显著上调表达的基因MCHK_8182;设计重叠延伸PCR引物,构建MCHK_8182双交换突变重组质粒载体;通过三亲本杂交,将突变载体导入7653R;在蔗糖压力培养下进行筛选,最终获得MCHK_8182双交换突变株。PCR及测序验证双交换突变株构建成功。植物盆栽试验结果显示,与7653R野生型接种的植株相比,MCHK_8182突变菌株接种的植株根瘤数减少,但固氮酶活未见明显差异。
- 路达彭杰丽谢福莉陈大松李友国
- 关键词：细胞色素P450突变株共生固氮表型
- 华癸中慢生根瘤菌7653R SraG sRNA的共生固氮功能被引量：6
- 2016年
- 基于前期对华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653RsRNA(small non-coding RNA,sRNA)的生物信息学预测,经Northern blot验证获得SraGsRNA。本研究采用RACE与转录组高通量深度测序确定了SraG全长,并分别利用RNAfold软件和TargetRNA软件预测了SraG二级结构和靶位点,进而构建了M.huakuii 7653R的SraG插入失活突变体(M.huakuii SraGmut),并对突变体接种紫云英的共生表型进行了检测。盆栽试验结果表明,与野生型菌株M.huakuii 7653R相比,接种突变株M.huakuii SraGmut的固氮能力显著下降,突变株固氮酶活性下降约40%,植株鲜质量和根瘤数目也显著降低。结果表明,SraG的功能与M.huakuii 7653R的共生固氮过程相关,作为sRNA可能参与根瘤菌的共生固氮调控过程。
- 李振鹏马春草谢福莉陈大松李友国
- 关键词：SRNA突变体共生固氮表型
- 紫云英根瘤中特异表达CCPs基因的同源分析及表达定位被引量：4
- 2016年
- 将紫云英根瘤中特异表达的编码CCPs(cysteine cluster protein)同源多肽的蛋白AsF259在大肠杆菌表达菌株(DH10B)中进行体外诱导表达,分别检测其在洋葱表皮细胞与紫云英根瘤中的细胞定位,并利用免疫荧光技术,检测紫云英中AsF259基因的时空表达特征。结果表明:AsF259蛋白分布于洋葱表皮的细胞壁、细胞膜、细胞质;基因表达和融合蛋白定位实验显示,AsF259在根瘤中呈特异性表达,在类菌体分化前期大量表达,且AsF259蛋白与类菌体共定位,表明AsF259基因属于NCR家族,在类菌体分化、维持和共生固氮过程发挥重要作用。
- 张晓媛王建云魏丰李振鹏谢福莉李友国
- 关键词：共生固氮类菌体
- 紫云英类受体蛋白激酶Nip43靶蛋白的筛选与初步鉴定被引量：1
- 2016年
- 以紫云英类受体蛋白激酶Nip43的S-TKs结构域构建诱饵载体,通过酵母双杂交技术,筛选获得17个候选的阳性克隆。经过测序分析和Blast比对,最终确定了1个互作蛋白EPN。EPN蛋白是网格蛋白聚合反应中的配体蛋白,可调控网格蛋白的聚合反应。通过实验验证显示,靶蛋白EPN与Nip43蛋白互作最强的区域为ENTH/ANTH结构域。Real-time q PCR检测表明,epn基因参与了根瘤菌早期结瘤过程。
- 叶竞阳王建云熊小波陈大松谢福莉李友国
- 关键词：紫云英共生固氮酵母双杂交
