国家自然科学基金(30370494)
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
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- 早老素-1V97L基因突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ_(42)产生的影响被引量：1
- 2006年
- 目的探讨早老素-1(presenilin-1,PS-1)Val97Leu位点突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ42产生的影响。方法采用一步法定点突变技术,由含有野生型(wildtype,wt)PS-1的pcDNA3.1/Zeo(+)质粒合成携带有突变位点Val97Leu的突变型(mutationtype,mt)PS-1质粒并转染至神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中,筛选出稳定表达的细胞系。用ELISA法和放射免疫法来检测培养基及胞浆中Aβ42和总Aβ含量;同时检测APP及BACE表达水平的变化。结果48小时,转染突变PS-1基因的细胞,细胞内和细胞外Aβ42的含量较24小时有显著提高,且相对未转染、wt和mock转染的细胞也有显著提高,而各组间总Aβ的含量变化无明显差异。APP及BACE的表达水平各组间也无明显差异。结论此中国人阿尔茨海默病家系中发现的PS-1基因Val97Leu突变为一新的突变位点,可选择性引起细胞内外Aβ42的增高,因此认为是一病理性突变。
- 方伯言邵延坤贾龙飞董秀敏贾建平
- 关键词：早老素-1基因突变
- 中国人早老素-1突变基因对SH-SY5Y细胞凋亡易感性的影响被引量：3
- 2007年
- 目的研究在中国人家族性阿尔茨海默病(FAD)两个家系中发现的早老素-1(PS1)基因 V97L 和 A136G 突变对神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞的影响及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的保护作用机制。方法建立稳定表达野生型和突变型 PS1基因的 SH-SY5Y 细胞模型,给予血清剥夺或血清剥夺加 IGF-1,比较各转染细胞株的凋亡易感性和 IGF-1的保护作用;同时检测各组细胞的葡萄糖掺入率和细胞膜上葡萄糖转运子-1(GLUT1)表达的变化。结果 V97L 和 A136G 突变细胞株对血清剥夺的敏感性增加,细胞凋亡率显著高于野生型细胞株和空载体转染细胞(MOCK)(P<0.01);IGF-1可以有效改善血清剥夺对 SH-SY5Y 细胞的影响,使凋亡细胞减少。各组细胞的葡萄糖掺入率无明显差别,但加入 IGF-1后各组葡萄糖掺入率平均增加25%,细胞膜 GLUT1的易位表达增加15%～20%。结论 PS1 V97L 和 A136G 突变使 SH-SY5Y 细胞对营养剥夺的易感性增加可能是 FAD神经元变性脱失的原因之一;IGF-1可通过促使葡萄糖转运,提高细胞活性,起到保护作用。
- 方伯言贾建平
- 关键词：突变脱噬作用胰岛素样生长因子
- 血小板在低温致周围神经损伤中的作用
- 2008年
- 宋珏娴贾建平李云生
- 关键词：周围神经损伤血小板温度条件自由基损伤动物模型再灌注
- 矢状轴位胼胝体面积测量与脑脊液p-tau蛋白和Aβ_(1-42)含量对阿尔茨海默病早期诊断的价值被引量：7
- 2007年
- 目的评价矢状轴位磁共振成像(MRI)胼胝体面积测量和脑脊液 p-tau 蛋白及 Aβ_(1-42)含量对阿尔茨海默病(AD)早期诊断的价值。方法根据 NINCDS-ADRDA 标准诊断的25例可能AD,按 MMSE 评分分为2组:平均 MMSE 评分 AD1组为20.5±2.5;AD2组均为14.7±3,8。另设健康对照组,平均 MMSE 评分27.8±1.7。自动测量软件在 MRI 正中矢状位上对胼胝体面积直接测量。酶标记免疫吸附测定(ELISA)法对各组脑脊液中199位点磷酸化微管相关蛋白(p-tau199)和β-淀粉样蛋白1-42片段(Aβ_(1-42))含量测定。结果 AD1组的脑脊液中 p-tau199(pg/ml)为25.8±3.1,较对照组(17.7±1.5)增高,Aβ_(1-42)(pg/ml)为329.3±15.2,较对照组(522.5±15.1)降低,胼胝体面积较对照组缩小,但程度不显著。AD2组的胼胝体总面积较对照组明显缩小,以整个胼胝体缩小为特点,但尾部改变相对较轻;AD2组与 AD1组比较,p-tau 蛋白含量升高和 Aβ_(1-42)含量(pg/ml)降低的程度更明显,分别为31.3±4.8和318.5±30.8。结论胼胝体面积测量同时配合脑脊液 p-tau 蛋白和 Aβ_(1-42)含量的测定,不仅对确诊早期 AD 有帮助,而且能反映 AD 的病程变化。
- 孟然陈楠贾建平李坤成冀瑞俊吕海燕王芬
- 关键词：阿尔茨海默病胼胝体脑脊髓液TAU蛋白质类淀粉样Β蛋白肽碎片
- 淀粉样蛋白25～35片段对血小板聚集及钙离子变化的诱导作用被引量：1
- 2006年
- 目的观察淀粉样蛋白25～35片段(Aβ25～35)对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集及血小板胞质内钙离子水平的影响,探讨淀粉样蛋白在血小板中的作用。方法采集18例健康志愿者肘静脉血,检测在不同浓度Aβ25～35(0、5、10、20、40μmol/L)的作用下二磷酸腺苷诱导的血小板最大聚集率(PAGMax);以50%最大聚集反应的二磷酸腺苷浓度(EC50)1μmol/L作为测定Aβ25～35对血小板聚集影响的二磷酸腺苷基础浓度;激光共聚焦显微镜检测不同浓度Aβ25～35作用下钙荧光探针Fluo-3/AM标记的血小板胞质内钙离子([Ca2+]i)变化。结果(1)于富血小板血浆中加入二磷酸腺苷后,以二磷酸腺苷浓度为1μmol/L时血小板EC50最高,为(26.33±6.57)%,故以此作为测定Aβ25～35影响血小板聚集功能的基础浓度。(2)Aβ25～35作用前后,二磷酸腺苷诱导的PAGMax均不同程度增高(P<0.05),且随着Aβ25～35浓度增加,血小板最大聚集率呈逐渐增加(P<0.05),其中以40μmol/L浓度组血小板聚集率最大,与单纯给予二磷酸腺苷(Aβ25～35为0μmol/L时)相比差异具有显著性意义(P<0.01)。(3)不同浓度Aβ25～35(0、5、10、20、40μmol/L)诱导后,血小板胞质内[Ca2+]i水平均不同程度升高(P<0.01),[Ca2+]i浓度平均增高水平随Aβ25～35浓度的增加而增加(P<0.01),其中以40μmol/L浓度组血小板胞质内[Ca2+]i水平升高最为显著(P<0.01)。结论较高浓度的Aβ25～35具有促进二磷酸腺苷诱导血小板聚集、升高血小板胞质内[Ca2+]i水平的作用,Aβ25～35促进血小板聚集的作用可能与血小板胞质内钙离子水平的升高有关。
- 黄小钦贾建平
- 关键词：阿尔茨海默病淀粉样Β蛋白血小板聚集
- Human neuroblastoma cells transfected with two Chinese presenilin 1 mutations are sensitized to trophic factor withdrawal and protected by insulin-like growth factor-1被引量：3
- 2008年
- 背景二新奇 presenilin 1 (PS1 ) 变化， V97L 和 A136G，最近被发现涉及 Alzheimer 在二个中国家庭的疾病早发作。这研究试图验证他们的病理学的 effects.Methods 人的 neuroblastoma SH-SY5Y 房间稳定地有这二中国 presenilin 的 transfected 1 个变化被建立探索他们是否对敏感，或影响了由，浆液剥夺并且由像胰岛素的生长 factor-1 (IGF-1 ) 保护了。Apoptosis 率，房间的葡萄糖举起和房间膜上的葡萄糖运输蛋白质 1 的表示(GLUT1 ) 是 examined.Results V97L 或 A136G 异种显著地减少了房间生存能力并且增加了 apoptosis 率什么时候比作 PS1wt 并且嘲笑 transfected 房间。IGF-1 被发现显著地改进这些二种变异的房间的生存能力，并且为异种看保护的效果他们什么时候与营养的剥夺被对待。每根 transfected 房间线的葡萄糖举起在 IGF-1 处理以后增加了到大约 25% ，大约 15%-20%.Conclusions 平常地增加的房间膜上的 GLUT1 表示与变化可以贡献的二中国 PS1 在房间 transfected 提高了敏感到营养的退却神经原 apoptosis。IGF-1 提供了保护的效果给房间，可能通过提高的葡萄糖运输和 mitochondrial 活动。
- FANG Bo-yanJIA Jian-ping
- 关键词：阿尔茨海默氏病神经母细胞瘤胰岛素样生长因子
- PLAU基因多态性对血浆β-淀粉样蛋白水平的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究尿激酶型纤溶酶原激活物基因第6号外显子上rs2227564位点单核苷酸多态性对血浆β-淀粉样蛋白水平的影响。方法53例健康受试者,男30例,女23例;平均年龄为(64.32±7.80)岁。通过聚合酶链反应对目的基因片段进行扩增,分析PLAU基因第6号外显子上rs2227564位点单核苷酸多态性基因型,共检出胞嘧啶-胞嘧啶(CC)、胞嘧啶-胸腺嘧啶(CT)及胸腺嘧啶-胸腺嘧啶(TT)等3种基因型,根据CC、CT及TT等3种基因型分为3组,每组分别纳入16,20和17例受试者。通过放射免疫方法检测受试者血浆β-淀粉样蛋白水平。结果CC、CT及TT型受试者血浆β-淀粉样蛋白水平分别为(4.98±2.68)、(5.47±2.12)和(8.19±3.21)ng/L,3型受试者血浆β-淀粉样蛋白水平比较,差异亦有统计学意义(P=0.002),其中TT型血浆β-淀粉样蛋白水平高于CC型和CT型,差异有统计学意义(P=0.001,0.003)。结论PLAU基因第6号外显子上rs2227564位点的C和T单核苷酸多态性可以影响血浆β-淀粉样蛋白水平。
- 季雪莲贾龙飞贾建平
- 关键词：尿纤溶酶原激活物淀粉样Β蛋白单核苷酸放射免疫检测
- 阿尔茨海默病患者血小板淀粉样前体蛋白代谢的改变被引量：1
- 2007年
- 目的通过观察血小板活化后β淀粉样蛋白(Aβ)水平变化,探讨阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)患者血小板β-淀粉样前体蛋白(APP)代谢特点。方法分离36例 AD 患者和30名健康对照的血小板,用免疫印迹检测凝血酶作用后的可溶性 APP 水平;同时用放射免疫法测定 Aβ含量。结果凝血酶作用后,血小板上清中可以检测到可溶性 APP 和 Aβ。活化后 AD 患者血小板上清中可溶性 APP 水平较对照组水平下降31.0%(P<0.05)。凝血酶活化后,AD 组血小板上清 Aβ水平从(3.1±2.7)ng/L 增加至(5.8±3.2)ng/L(P<0.01),对照组 Aβ水平由(6.1±4.4)ng/L 增加为(11.5±5.9)ng/L(P<0.01)。AD 组 Aβ平均增加(2.8±2.1)ng/L,低于对照组增加水平(5.5±3.6)ng/L(P<0.01)。结论血小板中含有 APP 的代谢产物可溶性 APP 和 Aβ。AD 血小板可能存在 APP 代谢异常。
- 黄小钦贾建平樊春秋董秀敏
- 关键词：阿尔茨海默病血小板淀粉样Β蛋白前体
- 早老素1基因突变与阿尔茨海默病病理变化的关系被引量：4
- 2005年
- 目的:通过分析早老素1基因突变对淀粉样β蛋白前体代谢的影响,以及对tau蛋白异常修饰及神经元凋亡的作用,探讨早老素1基因突变与阿尔茨海默病病理变化的关系。资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2005-09与早老素1,基因突变和阿尔茨海默病相关文章,检索词“presenilin1,mutation,Alzheimer”,并限定文章语言种类为“English”。同时计算机检索CNKI1995-01/2005-09期间的文章,限定文章语言种类为中文,检索词“早老素-1,基因突变,阿尔茨海默病”。资料选择:就检索到的406篇文献进行筛选,选择以早老素1基因突变为主要研究内容的文献20多篇,无论研究对象为患者还是动物或细胞全部纳入,其中研究内容相似的,以近3年且发表在较权威杂志者优先。资料提炼:将筛选到的22篇重点文献按早老素1生物学功能、和病理作用分类:其中4篇与早老素1的生物学功能相关,10篇与早老素1和淀粉样β蛋白前体代谢的关系有关,4篇与早老素1和tau蛋白异常修饰的关系有关,4篇与早老素1和神经元凋亡的关系有关。资料综合:22篇文献综合结果说明早老素1有可能作为γ分泌酶本身或其活性中心来影响淀粉样β蛋白前体代谢,从而使淀粉样β蛋白42的产生增加;早老素1也可通过参与一些重要的信号转导途径调节蛋白激酶和磷酸酶的活性,增加tau蛋白异常磷酸化水平,并且影响神经元对凋亡的敏感性。结论:早老素1基因突变是家族性阿尔茨海默病的主要致病原因,它可通过多种机制导致阿尔茨海默病的病理变化。
- 方伯言贾建平
- 关键词：淀粉样Β蛋白前体
- 野生型与突变型PS1真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的为了对我们发现的中国人家族性阿尔茨海默病早老素-1(presenilin1,PS1)基因新的点突变进行蛋白功能研究,分别构建野生型和突变型PS1(G289T)与绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,并检测其在SHSY5Y细胞内的表达。方法利用含人全长PS1cDNA的pcDNA3·1(zeo+),采用定点突变技术,构建PS1(G289T)-pcDNA3·1(zeo+)载体。采用基因重组技术构建野生型和突变型PS1与绿色荧光蛋白共表达载体。应用脂质体将携带野生型和突变型PS1的质粒转染至SH-SY5Y细胞,检测报告基因表达,RT-PCR检测PS1mRNA表达。结果经限制性内切酶酶切图谱分析及DNA测序证实融合蛋白表达载体构建成功;RT-PCR产物经测序显示突变型PS1mRNA在SH-SY5Y中有表达。结论成功构建了人野生型和突变型PS1与EGFP共表达载体并成功转染至SH-SY5Y细胞,为进一步的研究工作奠定了基础。
- 邵延坤贾建平方伯言刘宪霜孙永馨董秀敏
- 关键词：绿色荧光蛋白SH-SY5Y
