浙江省卫生厅资助项目(2006B865)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：王懿娜方红陈鸿超吴炜彭国平更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 紫外线诱导人角质形成细胞衰老的作用与端粒酶表达无关
- 2009年
- 目的:探讨人永生化角质形成细胞(HaCaT)和人皮肤原代角质形成细胞(HEKa)接受紫外线照射后的衰老机制及其凋亡、坏死和细胞周期的改变。方法:中波紫外线(UVB)小剂量、多次照射HaCaT细胞和HEKa细胞,以细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)化学染色法观察细胞衰老状态,流式细胞术检测细胞凋亡、坏死和细胞周期阻滞情况;ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;Western blot检测redox蛋白p66Shc的表达;RT-PCR法检测细胞内人端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因在UVB照射前后的表达情况。结果:UVB照射后,SA-β-Gal细胞化学染色结果显示HaCaT细胞和HEKa细胞均呈现强阳性染色。HaCaT细胞的凋亡率从(1.81±0.25)%增至(4.43±0.28)%,坏死率从(0.05±0.01)%上升至(0.10±0.03)%,但细胞周期未见明显阻滞;HEKa细胞的凋亡率从(0.65±0.05)%增至(59.53±2.35)%,坏死率达(3.89±0.24)%,较对照组显著增加(P<0.05),且细胞周期大部分阻滞于G0/G1期。HaCaT细胞和HEKa细胞的细胞内SOD活性经UVB照射后显著下降(P<0.05),而MDA水平则明显增高。p66Shc蛋白在UVB照射后表达增强。HaCaT细胞在UVB照射前后均高表达hTERT基因,而HEKa细胞不表达hTERT基因。结论:HaCaT细胞和HEKa细胞均可被UVB诱导进入"应激性早衰"状态,此衰老与细胞内氧化应激水平密切相关,而与端粒酶表达无关;但HaCaT细胞的凋亡率、坏死率及细胞周期阻滞情况较HEKa细胞好,这可能与HaCaT细胞高表达端粒酶水平,从而对细胞损伤修复能力及分化调节能力较强有关。
- 王懿娜吴炜彭国平方红
- 关键词：紫外线表皮细胞衰老
- 不同年龄段人群皮肤组织中两种mtDNA缺失研究被引量：3
- 2008年
- 目的定量观察不同年龄段健康人群皮肤组织中线粒体DNA（mtDNA）大片段4977bp和3895bp缺失的发生情况，探讨与自然老化及日光照射之间的关联性。方法收集不同年龄段71例皮肤组织，曝光部位（颈项部、手背部或额面部）31例，非曝光部位（臀部、大腿部或腰腹部）40例，分别提取其基因组DNA，以普通PCR对mtDNA中的4977bp缺失和3895bp缺失突变进行扩增，并以荧光实时定量PCR法对mtDNA中的4977bp缺失和3895bp缺失突变进行定量检测和分析。结果普通PCR检测显示4977bp缺失和3895bp缺失的发生率均随年龄增大而增加，40岁以后人群中mtDNA的4977bp缺失和3895bp缺失发生率分别高达47．5％（19／40）和30．0％（12／40），显著高于40岁以前人群（Х^2分别为4．673，6．118，P〈0．05）。4977bp缺失和3895bp缺失在曝光部位的总发生率为48．4％（15／31）和32．3％（9／31），较非曝光部位升高，但两者相比差异并无统计学意义。定量PCR检测结果表明4977bp缺失和3895hp缺失的相对拷贝数无论在曝光还是非曝光部位，均与年龄增长呈正相关（丘分别为0．907，0．845，P〈0．05）；但4977bp缺失在曝光与非曝光部位的突变数相比差异无统计学意义（P=0．264），而3895bp缺失在曝光与非曝光部位相比差异却有统计学意义（P=0．014）。结论mtDNA中4977bp缺失主要与自然老化相关，可作为观察皮肤自然老化进程的指标之一。3895bp的缺失与紫外线照射具有更为密切的联系。
- 王懿娜方红陈鸿超
- 关键词：DNA线粒体衰老
