天津市应用基础与前沿技术研究计划(12JCZDJC26000)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：天津医科大学总医院天津大学更多>>
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- 回顾性研究：甲状腺机能亢进症伴肝功能损害危险因素分析被引量：4
- 2015年
- 目的：肝功能损害是甲状腺机能亢进症（主要是 Graves 病）常见的并发症之一,会直接影响Graves 病治疗方法的选择,以及 Graves 病的治愈率。我们的研究目的是根据 Graves 病患者的临床表现及生化实验室化验结果,分析导致 Graves 病肝功能损害的危险因素。方法2008年至2012年期间初次接受131 I 治疗的1928例 Graves 病患者。在131 I 治疗前进行的各项检查包括：甲状腺24 h 吸碘率（24 h RAIU）、血清 FT3、FT4,血清超敏促甲状腺素（sTSH）,促甲状腺素受体抗体（TRAb）,甲状腺球蛋白抗体（TgAb）,甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）,血清肝功能检测等。数据分析采用独立样本 t 检验,χ2检验,Logistic 回归和皮尔森相关分析。结果 Graves 病伴发肝功能损害组的患者年龄、Graves 病病程,甲状腺重量,FT4水平, TPOAb 和 TRAb 水平高于单纯 Graves 病组。 Graves 病伴发肝功能损害的影响因素包括：患者年龄、Graves病病程、心率、甲状腺重量、FT4水平,24 h RAIU,TgAb,TPOAb 和 TRAb 水平；其中24 h 吸碘率为保护性因素,而患者年龄、Graves 病病程、心率、甲状腺重量、FT4水平,TgAb,TPOAb 和 TRAb 水平等为 Graves 病伴发肝功能损害的危险因素。结论当 Graves 病患者的年龄超过45岁,心率超过90次/ min,甲状腺的重量〉35 g,Graves 病病程〉3年,FT4〉70.5 pmol/ L,TPOAb〉360 IU/ ml,TRAb〉15 IU/ L 时,Graves 病患者伴发肝功能损害的危险性增加,建议将131 I 治疗为该类患者的首选治疗方法。
- 李承霞谭建张桂芝孟召伟王仁飞李玮郑薇
- 关键词：甲状腺机能亢进症肝功能损害I转氨酶胆红素
- 肿瘤基因治疗相关的特异性启动子研究新进展
- 2014年
- 肿瘤基因治疗是一种在基因水平上治疗肿瘤的方法，是现有治疗肿瘤的先进方法之一。但是，肿瘤基因治疗技术还存在很多未解决的问题，例如目的基因表达的靶向性问题等。现有研究证实，使用特异性启动子可以提高肿瘤基因治疗的靶向性。启动子是指能启动mRNA转录的一段特异性DNA序列，特异性启动子是指仅在特定组织或肿瘤中才会被激活的启动子。该文将就肿瘤基因治疗相关的特异性启动子的近期研究，按启动子的作用类型进行综述。
- 李玮谭建
- 关键词：基因疗法靶向疗法
- GFAP启动子介导放射性^131I靶向性治疗胶质瘤的实验研究被引量：3
- 2013年
- 目的在体外研究中证明神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子能引导人钠碘转运体基因（hNIS）实现胶质瘤靶向性表达，并能有效介导放射性碘治疗胶质瘤。方法使用Lipofectamine2000脂质体将PGL3．Basic、PGL3-Control、PGL3．GFAP质粒分别转染至U251、U87、MRC-5细胞，24h后在化学发光仪中检测各细胞的相对反应活性；构建GFAP启动子引导hNIS基因表达的重组腺病毒Ad．GFAP．hNIS，转染至各细胞后Westernblotting检测细胞GFAP、hNIS蛋白的表达；同时设Ad—CMV—EGFP组（空白对照）和Ad．CMV—hNIS组（阳性对照），应用y计数器测量3组细胞的131I摄碘和外流能力，龙胆紫染色后记数细胞并计算克隆形成率：U87细胞接种BALB／c雌性裸鼠20只，按随机数字表法分4组（注射Ad-GFAP—hNIS、不注射131I，注射Ad—GFAP—hNIS、注射131I，注射Ad—CMV—EGFP、不注射131I，注射Ad—CMV—EGFP、注射131I，每组5只），各组进行相应处理后观察移植瘤生长情况并比较裸鼠生存周期；U87荷瘤裸鼠肿瘤内注射Ad—GFAP—bNIS和Ad．CMV—EGFP后腹腔内注射1mCi的^99mTcO4溶液，应用SPECT显像。结果与PGL3-Basic、PGL3．Control比较，PGL3-GFAP质粒转染后U251、U87细胞相对反应活性降低，差异有统计学意2Z（P〈0．05）；Western blotting显示U87和U251细胞表达GFAP、hNIS蛋白；125I摄碘能力试验显示感染重组腺病毒Ad-GFAP—hNIS后，U87和U251细胞摄碘能力分别提高69．5倍和70．8倍，细胞内131I的有效半衰期缩短；在U87和U251细胞中，Ad-GFAP-hNIS组细胞克隆形成率分别为（9.31±0．50）％和（9．33±1．15）％，均高于Ad．CMV．EGFP组和Ad—CMV—hNIS组，差异有统计学意义（P〈0．05）；注射Ad—GFAP．hNIS且注射131I组裸鼠生存周期（44．00±0．58）d最长；SPECT实验显示Ad-GFAP—hNIS组裸鼠肿瘤组织可以摄取放射性核素，而Ad—CMV—EGFP组裸鼠不能摄取。结论感染Ad-GF
- 李玮谭建王澎
- 关键词：神经胶质瘤钠碘转运体放射性碘治疗
- 131 I标记靶向EGFR免疫纳米脂质体抑制肿瘤细胞生长的实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的：制备131 I标记的、抗西妥昔单克隆抗体（ C225）修饰的免疫纳米脂质体131 I-C225-BSA-PCL，探讨其体外抑制EGFR过表达肿瘤细胞生长的作用。方法分别构建EGFR靶向性和非靶向性纳米脂质体C225-BSA-PCL和BSA-PCL，并行透射电镜和动态光散射分析；使用流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜观察上述纳米脂质体在EGFR过表达肿瘤细胞中的靶向性结合及内吞情况。用氯胺T直接标记法对纳米脂质体进行131 I标记，MTT法检测131 I标记纳米脂质体的细胞杀伤活性，并观察其细胞摄取及胞内存留情况。采用独立样本t检验对数据进行分析。结果成功构建EGFR靶向性和非靶向性纳米脂质体C225-BSA-PCL和BSA-PCL，其有效直径约为130～180 nm。流式细胞仪检测和共聚焦显微镜观察结果均显示C225-BSA-PCL能被EGFR过表达的肿瘤细胞摄取，而BSA-PCL的摄取相对较弱。 MTT检测结果显示，靶向性核素纳米脂质体131 I-C225-BSA-PCL较非靶向性的131 I-BSA-PCL具有更强的细胞杀伤效果，IC50值分别为0．03～1．32和0．25～12．19。细胞摄碘实验结果显示，131 I-C225-BSA-PCL能被细胞快速摄取，并于4 h达摄取峰值，其细胞摄取明显高于131 I-BSA-PCL（ t＝3．03～16．86，均P＜0．05）。结论 EGFR靶向性纳米脂质体C225-BSA-PCL较BSA-PCL具有更强的与EGFR过表达肿瘤细胞结合并被其摄取的能力。131 I-C225-BSA-PCL可在EGFR过表达的肿瘤细胞中存留较长时间并表现出明显的靶向性杀伤效果，能有效抑制肿瘤细胞的生长。
- 李玮刘中云李承霞谭建常津李宁季艳会
- 关键词：脂质体碘放射性同位素
- hTERT和GFAP双启动子条件复制腺病毒介导放射性碘治疗脑胶质瘤的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的利用条件复制腺病毒Ad—Tp—E1a—Gp—NIS感染脑胶质瘤细胞，探讨其介导靶向性放射性碘治疗脑胶质瘤的可行性。方法克隆人端粒反转录酶（hTERT）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子，荧光素酶分析法检测启动子启动效率。构建并纯化条件复制腺病毒Ad—Tp—E1a—Gp—NIS，进行肿瘤选择性病毒复制实验。U87和U251细胞感染Ad—Tp—E1a—Gp—NIS后，进行Westernblot分析蛋白质表达，131I内流及外流和131I克隆形成实验。结果荧光素分析实验证明，hTERT和GFAP启动子分别可以引导荧光素蛋白在U251和U87细胞中表达，表达效率为37．31％～49．00％（F=5．87，P〈0．05）和59．75％～62．10％（F=11．89，P〈0．01）。Ad—Tp—E1a—Gp—NIS能够在hTERT阳性和GFAP阳性实现肿瘤选择性复制，且在GFAP启动子引导下能成功表达hNIS基因。Westernblot分析表明，hTERT蛋白和GFAP蛋白在U87和U251细胞中显示出相对分子质量为120×103和49×103的条带。感染Ad-Tp—E1a—Gp—NIS后，U87细胞摄碘能力提高78．80倍（F=2914．58，P〈0．01），U251细胞摄碘能力提高92．48倍（F=2275．91，P〈0．01）。体外细胞克隆分析证明，感染病毒并在131I中孵育12h后，超过90％的肿瘤细胞被杀死，而对照组细胞仅有65％（t=11．73～78．33，P〈0．01）。结论Ad·Tp·E1a-Gp-NIS能实现条件性复制并具有明确的肿瘤靶向性。在细胞水平实验中，能引导放射性131I杀死胶质瘤细胞。
- 李玮谭建王澎李宁李承霞
- 关键词：HTERT启动子胶质瘤
- 双特异性启动子调控条件复制腺病毒载体的构建
- 2013年
- 目的 构建并鉴定既能在人端粒酶反转录酶（hTERT）启动子调控腺病毒早期区域1A（E1A）基因,又能在胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子引导入钠碘转染体（hNIS）基因的腺病毒载体.方法 采用免疫印迹分析检测人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87、人神经胶质瘤细胞U251和人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞感染病毒前自身GFAP和端粒酶蛋白的表达情况.通过PCR扩增获得hTERT启动子、GFAP启动子及hNIS基因,采用基因合成腺病毒E1A基因.采用hTERT和GFAP启动子重组质粒转染MRC-5、U251、U87细胞,转染24 h后应用荧光分析法检测hTERT启动子及GFAP启动子的启动活性.再将上述特异性启动子分别与E1A基因和hNIS基因连接,最后插入穿梭质粒pDC311中,构建重组质粒pDC311-Tp-E1A-Gp-NIS,并应用EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切及测序鉴定.将pDC311-Tp-E1A-Gp-NIS与骨架腺病毒质粒pBHGlox△E1-3Cre共转染人胚肾293细胞,得到条件复制腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS后,分别感染293、MRC-5、U87和U251细胞,利用病毒空斑形成实验检测条件复制腺病毒的复制能力.使用重组腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS及Ad-CMV-EGFP（对照）感染U251、U87及MRC-5细胞后,采用γ计数器测定由hNIS基因介导的摄125I能力.结果 在U87和U251细胞中,均有相对分子质量120000的端粒酶和49000的GFAP蛋白的表达,在MRC-5中,则无表达.GFAP启动子和hTERT启动子能引导目标基因胶质瘤靶向性表达,启动效率分别为U87细胞中（62.10±6.26）％和（49.24±1.73）％,U251细胞中（59.75±34.36）％和（37.31±16.86）％.限制性内切酶能将质粒pDC311-Tp-E1A-Gp-NIS酶切成3252、5500 bp的片段,经测序鉴定后与预计序列一致.成功构建的Ad-Tp-E1A-Gp-NIS条件复制腺病毒,在U87和U251细胞能很好的产生病毒颗粒,在293细胞也能实现复制,但是在MRC-5细胞中则无病毒产生.U251和U87细胞感染Ad-Tp-E1A-Gp-NIS后均具备了较明显的摄125I能力,约为对照组的93.4倍和107.1
- 李玮谭建
