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干扰ALDH1A1表达的shRNA载体成功转染宫颈癌HeLa细胞及意义被引量：3: 2013年; 目的:采用shRNA转染构建干扰乙醛脱氢酶-1(ALDH1A1)表达的宫颈癌HeLa细胞,以进一步探讨ALDH1A1与宫颈癌细胞的生物学特性之间的关系。方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞,加入梯度浓度G418溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取对数生长期细胞,采用Lipofectamine 2000脂质体将4种干扰重组质粒(ALDH1A1-1719、ALDH1A1-574、ALDH1A1-740、ALDH1A1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照质粒(shNC)转染宫颈癌HeLa细胞。5种重组质粒与Lipofectamine 2000脂质体的比例均为0.2μg:1μL,空白对照组中仅加入Lipofectamine2000脂质体。6 h后换液,24 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。结果:确定G418的最佳筛选浓度为400 mg/L;5种重组质粒均成功转染入HeLa细胞中。其中ALDH1A1-1719的转染效率为4.67%;ALDH1A1-574的转染效率为1.16%;ALDH1A1-740的转染效率为12.45%;ALDH1A1-921的转染效率为3.42%;shNC组的转染效率为1.02%。结论:干扰ALDH1A1表达的shRNA载体转染宫颈腺癌HeLa细胞成功可行且效果好。; 刘龙阳姚婷婷易娟娟陈勍张丙忠周晖彭永排林仲秋; 关键词：RNA 小分子干扰转染 HELA细胞

采用慢病毒载体干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株的构建及意义: 2013年; 目的:采用干扰乙醛脱氢酶1(ALDH-1)表达的慢病毒载体转染宫颈癌Hela细胞,构建干扰ALDH-1表达的稳转株,以利进一步探讨干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株的生物学特性。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,加入梯度浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取24孔板中对数生长的宫颈癌Hela细胞,吸弃旧培养液,加入400μL新培养基,分别加入4种干扰慢病毒液(ALDH-1、ALDH1-1719、ALDH1-740、ALDH1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照慢病毒液(LV3-NC),同时均加入Polybrene液。其中5种慢病毒液的加入量均为50μL(滴度均为1×108TU/mL),Polybrene的加入量为0.5μL(浓度为5 mg/L);24 h后换新鲜培养液,72 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。然后采用最佳筛选浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,以获得稳定转染的干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株。结果:确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为0.9 mg/L;5种慢病毒载体均成功转染入宫颈癌Hela细胞中,经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定转染细胞株。结论:干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株成功构建。; 刘龙阳张帝开易娟娟陈勍张丙忠陈志辽梁金晓林仲秋; 关键词：氧化还原酶类乙醛慢病毒属 HELA细胞

Hes1对宫颈癌细胞转移及上皮间质转化的影响被引量：1: 2015年; 目的:研究Hes1在宫颈癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化中的作用。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白质印迹(Western blotting)检测宫颈癌4个细胞系Hes1表达。小干扰RNA(si RNA)干扰下调Hes1后,Transwell检测Hes1下调对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响。通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测Hes1下调对上皮间质转化(EMT)主要相关分子的影响。结果:Hes1 m RNA在4种宫颈癌各细胞系中的表达差异有统计学意义(χ2=10.39,P=0.016)。下调Hes1后,迁移实验和侵袭实验均显示,穿膜细胞数Si Ha NC组与Si Ha 1组、He La NC组与He La 1组差异有统计学意义(均P<0.05)。Hes1下调后,与空白对照组、阴性对照组比较,Si Ha及He La的E-cadherin表达量均减少(均P<0.05),Si Ha细胞ZEB1、Slug表达量增加(均P<0.05);He La细胞vimentin、Slug表达量增加(均P<0.05)。结论:宫颈癌Si Ha、He La细胞中Hes1抑制迁移、侵袭;Hes1下调引起EMT;Hes1可能通过EMT参与宫颈癌细胞的迁移和侵袭。; 李睿歆姚婷婷刘昀昀谢庆生谢晓飞梁金晓林仲秋; 关键词：宫颈肿瘤细胞运动肿瘤侵润上皮间质转化 HES1

特异性干扰ALDH-1表达的子宫颈癌细胞系HeLa细胞的构建及鉴定被引量：1: 2014年; 乙醛脱氢酶1（ALDH-1）是细胞内乙醛氧化的解毒酶。短发夹状RNA（shRNA）以慢病毒为载体转染人宿主细胞后，可以整合到宿主DNA上发挥稳定持久的干扰效果。; 刘龙阳易娟娟张帝开陈惠祯陈勃林仲秋; 关键词：HELA细胞宫颈癌细胞系特异性乙醛脱氢酶宿主细胞解毒酶

雌、孕激素受体表达与宫腔粘连分离术后雌孕激素治疗疗效的相关性研究被引量：32: 2014年; 目的:研究宫腔粘连(IUA)患者子宫内膜组织中雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)的表达,探讨其与术后雌孕激素治疗疗效的关系。方法:采用免疫组化法检测55例中重度IUA患者子宫内膜组织的ER、PR表达;患者均行宫腔镜下IUA分离术,术后给予雌孕激素周期治疗。随访患者的月经改善情况,结合宫腔镜复查结果,分析PR、ER受体与预后的相关性。结果:ER、PR在腺体及间质中的表达均无显著差异(P=0.727,P=0.453);PR低表达组、高表达组患者术后雌孕激素治疗的有效率分别为63.64%和54.55%,两组比较无显著差异(P=0.503);ER低表达组、高表达组患者术后雌孕激素治疗的有效率分别为33.33%和70.27%,两组比较差异显著(P=0.018)。结论:患者子宫内膜PR的表达不能预测预后;ER表达水平与疗效呈正相关,其可能成为IUA术后雌孕激素治疗疗效的预测指标。; 管媚媚刘畅浩黄妙玲姚婷婷林少丹陈勍; 关键词：宫腔粘连孕激素受体疗效

实时荧光定量PCR法测定has-miR-429、has-miR-127-3p及has-miR127-5p在不同HPV感染的宫颈癌细胞中的表达: 2013年; 目的探讨has-miR-429、has-miR-127-3 p及has-miR127-5 p在不同宫颈癌细胞中的表达水平。方法用SiHa、Hela和C33A三种宫颈癌细胞株,提取和纯化mRNA,逆转录成cDNA,在测定最佳反应条件后,采用实时荧光定量PCR技术测定has-miR-429、has-miR-127-3p及has-miR127-5p的表达情况,结合内参U6进行相对定量分析。结果 miR-429、miR-127-3p及miR127-5p在SiHa细胞相对于Hela细胞表达为(0.0031±0.0002),(59.3786±3.7024)和(0.0524±0.0148),相对于C33A细胞表达为(0.0059±0.0005),(15.5625±1.2780)和(0.0334±0.0103)。结论 has-miR-429、has-miR-127-3p及has-miR127-5p可能与宫颈癌的HPV感染相关。; 姚婷婷刘秀婷张定梅禹夜林仲秋; 关键词：SIHA细胞

放疗诱导宫颈癌细胞中经典Wnt通路的表达情况及顺铂耐药性研究被引量：6: 2014年; 目的:研究放疗诱导后的耐放疗宫颈癌Hela、Siha细胞系顺铂耐药情况及经典Wnt通路相关分子在其化疗耐受中的作用。方法:分割剂量多次照射诱导宫颈癌细胞并成功建立耐放疗细胞系,将细胞分为R0组(空白对照)、R1组(分割剂量4GY,照射6次)和R2组(分割剂量6GY,照射4次)。CCK8法进行耐药实验,Real-time PCR及Western blot法检测Wnt/β-catenin通路及耐药分子表达情况。结果:Hela R0、R1、R2顺铂IC50分别为3.86、6.65μmol/L和6.53μmol/L,Siha R0、Siha R1、Siha R2顺铂IC50分别为4.79、7.25μmol/L和7.98μmol/L;与R0组相比,其他两组的IC50显著升高,差异有统计学意义(P<0.001)。放疗诱导宫颈癌Hela、Siha细胞中经典Wnt通路分子在基因与蛋白水平受到激活,其下游基因C-Myc、Cyclin D1表达增多,放疗诱导Hela细胞中耐药蛋白ABCB1、ABCG2表达升高,而放疗诱导Siha细胞中上述耐药蛋白变化无统计学差异。结论:经典Wnt通路可能是放疗诱导宫颈癌细胞化疗耐受性获得的重要机制,这为复发性宫颈癌患者提供了潜在治疗靶点。; 刘昀昀周晖谢庆生李睿歆谢晓飞梁金晓林仲秋; 关键词：放疗宫颈癌 WNT 耐药

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国家自然科学基金(81101979)

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