河南省教育厅科学技术研究重点项目(12A310007)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 发文基金：河南省教育厅科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
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- 雌激素受体α基因shRNAi慢病毒载体的构建与滴度测定
- 2012年
- 目的:构建雌激素受体(ER)α基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,检测病毒感染细胞的滴度。方法:针对已经筛选确定的ERα基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCsil-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生shERα-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用shERα-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实,成功构建ERα shRNA的慢病毒载体shERα-LV。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108TU/mL。结论:成功构建人ERα基因RNAi慢病毒载体,为ERα在乳腺癌发生发展中的研究提供了基础。
- 曾宪旭班振英党秋红楚天骄雷冬梅
- 关键词：RNA干扰雌激素受体Α绿色荧光蛋白质类
