国家自然科学基金(81101915)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 转染Notch2基因对人脑胶质瘤细胞系A172生长的抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨人脑胶质瘤细胞系A172转染Atoc/i2基因后抑制细胞增殖情况及其机 制。方法将A172细胞分为空白对照组、转染空载质粒组（pcDNA3）、转染Notch2质粒组 （Notch2-pcDNA3）三组，后两组分别转染空载体和Notch2。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响，流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的影响，Transwell方法检测其对细胞侵袭的作用，Western blotting检测转染Notch2质粒后A172细胞中重要信号通路成员Notch2、表皮生长因子受体 （EGFR）、组织磷酸化蛋白（p-AKT）、胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、人第10号染色体缺失的磷酸酶 （PTEN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）、细胞核因子kB（NF-kB）、增殖细胞核抗原（PCNA）、白细胞介素-2（Bcl-2）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及周期素依赖性激酶 抑制因子l（CyclinDl）]相关基因的表达。结果MTT实验结果显示，与对照组及pcDNA3组比 较，A172细胞被转染Notch2后细胞存活率明显下降，差异有统计学意义（P〈0.05）;S期及G2/M期 细胞减少，G0/G1细胞较对照组相比增加22.1%,细胞明显被阻滞于G0/G1期；凋亡细胞数从对照组 的1.2%增加到14.8%;细胞侵袭数由对照组的35.23个降低至17.43个。与PI3K-AKT通路相关的 重要成员 EGFR、p-AKT、PI3K 以及 NF-kB、PCNA、Bc1-2、MMP-2、MMP-9 及 CyclinDl 等表达水平 均有明显下调；而拮抗PI3K/AKT活性的抑癌蛋白PTEN以及Caspase-3的表达则明显上调。结论转染TVoteM基因可抑制细胞增殖和侵袭，诱导细胞凋亡以及重要信号通路成员的基因表达变化。
- 王广秀许鹏贾志凡张安玲浦佩玉
- 关键词：NOTCH2神经胶质瘤EGFRPI3KAKT通路
- 敲低转录共激活子对胶质瘤细胞生物学特性的影响
- 2015年
- 目的 研究敲低带PDZ结合域的转录共激活子（transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ）表达后对胶质瘤细胞株细胞生物学特性的影响.方法 采用TAZ小干扰RNA（TAZsiRNA）敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ表达,用实时定量聚合酶链式反应（real time-PCR） 及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别鉴定转染后TAZ敲除效果,噻唑兰比色法检测两种细胞株的增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;Western blot法检测凋亡、增殖及侵袭等相关蛋白的表达变化.结果 转染TAZ siRNA可显著敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ mRNA及蛋白表达水平;两种细胞株中TAZ被抑制后,细胞增殖率均下降且呈逐渐下降趋势,而细胞凋亡率分别增高至（12.05±0.65）％和（8.02 ±0.66）％（LN229：F=414.2,P=0.000;SNB19：F=156.8,P=0.000）;两细胞株TAZ siRNA组细胞穿膜细胞数与对照组和无义序列组相比明显降低,划痕间隙融合能力也显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;Western blot法检测显示转染后细胞增殖核抗原（Kiel 67 antigen,Ki-67）、B淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、基质金属蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9,MMP-9）等增殖、凋亡及侵袭相关蛋白表达明显下调.结论 敲低TAZ可抑制胶质瘤细胞株LN229和SNB19增殖和侵袭能力,提示TAZ可能成为治疗胶质瘤的新靶点.
- 栗伟杰王广秀于福华张安玲康春生韩磊浦佩玉贾志凡
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤侵润
- 人脑胶质瘤中miR-106b^25基因簇表达的研究被引量：6
- 2014年
- 目的:检测胶质瘤细胞系及组织中miR-106b^25基因簇成员miR-106b、miR-93、miR-25的表达情况。方法:运用实时定量PCR的方法检测不同人脑胶质母细胞瘤细胞系及不同病理级别胶质瘤标本中miR-106b^25基因簇成员miR-106b、miR-93和miR-25的表达水平。原位杂交技术检测含不同病理级别及瘤旁正常脑组织的胶质瘤组织芯片中miR-106b^25基因簇成员的表达情况,进而分析该簇miRNAs的表达与胶质瘤病理级别的相关性。结果:以正常脑组织表达量为基准,3种miRNA在所有检测细胞系中均有增高的趋势。收集43例胶质瘤标本中,RT-PCR结果显示,随着肿瘤病理级别的升高,3种miRNA在各组中的平均表达量也逐步升高。其中,miR-106b(F=4.479,P=0.018)和miR-93(F=3.493,P=0.040)各组间的表达差异均有统计学意义。而miR-25表达无明显的统计学差异(F=2.766,P=0.075)。原位杂交结果显示3种miRNA的表达在高级别胶质瘤中的表达量明显高于低级别肿瘤。Spearman等级相关分析表明3种miRNA的表达信号强度分布均与胶质瘤的WHO病理分级呈正相关,在miR-106b、-93、-25中的相关系数分别为rs=0.617(P<0.001)、rs=0.438(P<0.001)、rs=0.463(P<0.001)。结论:miR-106b^25在胶质瘤中表达呈不同程度增高,并与肿瘤分级呈正相关。
- 叶敏华张安玲王坤吴淼经黄强祝新根
- 反义抑制miR-106b表达对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响被引量：3
- 2015年
- 目的 探讨抑制miR-106b过表达对人脑胶质瘤细胞株增殖和侵袭的影响.方法 培养人脑U251、LN229及TJ905胶质瘤细胞,并将其分为细胞对照组,转染阴性对照组（简称阴性对照组）,转染miR-106b inhibitors组（简称106b inh组）.将反义miR-106b用脂质体转染于人脑胶质瘤细胞中,抑制miR-106b的表达.采用实时定量PCR法检测转染后胶质瘤细胞miR-106b的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化、噻唑兰比色分析法检测细胞增殖能力、软琼脂克隆形成实验评价细胞非锚定依赖性生长能力及Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 与细胞对照组,阴性对照组比较,（1） 106b inh组3种胶质瘤细胞中miR-106b的表达均被明显抑制;细胞周期进展被抑制,S期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例增加,其中U251、TJ905细胞的周期时相分布差异有统计学意义（P值均＜0.05）,LN229细胞的周期时相分布差异无统计学意义;（2） 106b inh组转染抑制后48 h,3种胶质瘤细胞的增殖能力均明显减弱,P＜ 0.05;（3）细胞的克隆形成能力也被明显抑制[克隆形成率分别为,U251：（10.6±0.9）％、（10.5±1.2）％对比（3.3±0.4）％;LN229：（12.5±1.7）％、（11.0±2.4）％对比（4.1±0.3）％;TJ905：（9.9±1.2）％、（10.2±0.6）％对比（3.5±0.4）％.P值均＜0.01];（4）穿过Transwell小室的细胞数明显降低[U251：（90.6±5.7）、（85.2±6.1）个对比（27.6±4.0）个;LN229：（22.6±3.7）、（21.2±3.7）个对比（2.4±1.5）个;TJ905：（79.4±4.4）、（76.8±5.9）个对比（11.8±3.2）个.P值均＜0.0l].结论 下调miR-106b的表达可抑制胶质瘤细胞的增殖、生长和侵袭能力.
- 叶敏华张安玲吴雷王坤王广秀贾志凡黄强祝新根
- 关键词：微RNAS神经胶质瘤细胞增殖肿瘤侵润体外研究
- 蛋白激酶N1对脑胶质瘤生物学行为的影响
- 2020年
- 目的探讨蛋白激酶N1(PKN1)在胶质瘤组织中的表达变化及其对胶质瘤细胞生物学行为的影响。方法检索GEPIA数据库验证PKN1基因表达情况,Western blotting法检测胶质瘤细胞系LN229、U87和A172的PKN1蛋白表达量。采用无意义序列(siRNA-NC组)和PKN1小干扰RNA序列(siRNA-PKN1组)转染A172细胞,并通过CCK-8实验、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验检测肿瘤细胞增殖能力、凋亡率、迁移能力和侵袭能力。结果经检索GEPIA数据库发现胶质母细胞瘤组织(163例)PKN1 mRNA表达量高于正常脑组织(207例,P<0.05)。Western blotting检测显示,A172细胞PKN1蛋白相对表达量高于U87细胞(t=3.096,P=0.036)和LN229细胞(t=8.994,P=0.000)。敲低PKN1基因表达第3~6天siRNA-PKN1组A172细胞增殖能力低于siRNA-NC组(t=3.275,P=0.031;t=5.949,P=0.004;t=10.430,P=0.000;t=6.645,P=0.003);两组A172细胞划痕愈合率随时间推移具有不同程度增加(F=249.993,P=0.000),敲低PKN1基因表达后,A172细胞划痕愈合率(F=97.811,P=0.000)和细胞穿膜数目(t=5.840,P=0.004)均低于siRNA-NC组,而A172细胞凋亡率高于siRNA-NC组(t=5.461,P=0.006)。结论胶质瘤PKN1 mRNA表达量高于正常脑组织,敲低PKN1基因表达可抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,同时诱导肿瘤细胞凋亡。
- 郝玉冰张安玲王虎王广秀高照贾志凡
- 关键词：神经胶质瘤蛋白激酶类细胞运动肿瘤侵润免疫印迹法
- 反义miR-19a／b抑制LN229人脑胶质瘤生长的体内实验研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨敲低miR-19a／b表达抑制裸鼠荷人脑胶质瘤细胞LN229移植瘤生长的疗效和机制。方法原位注射miR-19a／b反义寡聚核苷酸（AS—miR-19a／b）治疗裸鼠皮下荷LN229人脑胶质瘤模型。Real—time PCR方法鉴定治疗后miR-19a／b表达水平，采用HE染色和免疫组织化学染色检测评价治疗后肿瘤增殖、凋亡等生物学性状及核心信号通路成员相关指标的变化，包括PTEN、AKT、P—AKT等；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果AS—miR-19a／b治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列组，差异有统计学意义（F=19．221，P〈0．05）；其miR-19a／b表达下调为对照组的0．187±0．025；组织病理学检测表明AS—miR-19a／b治疗后肿瘤恶性表型有所逆转。结论以miR-19a／b作为靶点治疗异种移植LN229人脑胶质瘤效果显著，miR-19a／b可作为人脑胶质瘤靶向治疗的侯选靶点。
- 孙即奎浦佩玉张安玲王广秀杨卫东贾志凡
- 关键词：靶向治疗
