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人RANTES基因在转基因青蒿植株中表达的测定被引量：9: 2004年; 目的为了增强青蒿的特异药理活性,探讨人β-趋化因子RANTES基因在青蒿细胞中表达的可能性。方法将克隆的RANTES基因经Ti质粒衍生的双元表达载体pROKII导入根癌农杆菌LBA4404菌株,通过叶盘共培养法已获得一批表现卡那霉素抗性的转基因青蒿植株。结果 PCR和Southern印迹杂交分析表明,RANTES基因已导入并整合到青蒿基因组中;RT-PCR、Northern印迹、Western印迹杂交结果证实,RANTES基因已在转基因青蒿植株中成功表达。结论首次报道了RANTES基因在转基因青蒿植株中的表达,为基因工程改造青蒿打下了良好的基础。; 冯丽玲曾庆平杨雪芹; 关键词：青蒿 RANTES基因

青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA的克隆与测序被引量：4: 2004年; 【目的】克隆青蒿鲨烯合酶基因,为基因工程改造青蒿打下基础。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩增、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、扩增片段与T-载体连接和克隆片段的序列分析等方法。【结果】通过PCR扩增和RT-PCR扩增,分别获得3 590 bp及1 257 bp片段,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定。初步测序结果与GenBank上已登录的青蒿鲨烯合酶基因序列同源性为99％,氨基酸序列同源性为100％。【结论】成功克隆了青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA。; 冯丽玲曾庆平; 关键词：青蒿 DNA DNA

大肠杆菌CodA基因表达赋予转基因青蒿负选择表型被引量：1: 2005年; 目的为了验证CodA基因是否适宜作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。方法用PCR法扩增大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因CodA,经克隆和测序后插入植物基因表达载体pROK,并导入根癌农杆菌LBA4404(pAL4404)中。以共培养法转化青蒿叶盘,在添加25μg/mL卡那霉素(Kan)的N6培养基上选择青蒿转化愈伤组织并再生绿芽。将Kan抗性转基因青蒿芽转植到含有500μg/mL5-氟胞嘧啶(5-FC)和25μg/mLKan的MS培养基上继续培养2周。结果转基因青蒿芽全部死亡,而未转化青蒿芽仍正常生长,表明导入CodA基因的青蒿细胞已赋予其预期的负选择表型。经RT-PCR检测,转基因青蒿芽显示CodA阳性扩增带,而未转化青蒿芽无此特异扩增带。这一结果显示,CodA基因已在青蒿细胞中转录生成相应的mRNA,从而进一步印证了表型检测结果。结论CodA基因可作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。; 冯丽玲杨瑞仪杨雪芹曾庆平; 关键词：青蒿基因打靶负选择

青蒿鲨烯合酶基因打靶研究被引量：3: 2006年; 目的通过代谢途径工程调整代谢流向,试图增大转基因青蒿Artemisia annua植株中的青蒿素产量。方法利用青蒿鲨烯合酶(SS)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因和胞嘧啶脱氨酶(CodA)基因构建基因打靶载体,并通过冻融法将载体导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens。以叶盘法转化青蒿,采用"分段选择法"筛选转基因再生植株。结果对表达GFP基因后发出绿色荧光的转基因植株,采用PCR及PCR产物杂交法,在1棵转基因植株中检测到外源GFP基因,而未检测到内源SS基因。初步证据显示,在转基因青蒿植株中,突变型SS基因已取代野生型SS基因。结论青蒿鲨烯合酶基因打靶已取得初步成功。; 冯丽玲杨瑞仪杨雪芹曾庆平; 关键词：青蒿鲨烯合酶基因打靶基因敲除

重组人β-趋化因子RANTES抗T嗜性HIV-1作用的研究被引量：1: 2004年; 目的　检测重组人β 趋化因子RANTES(RegulationuponactivationnormalT cellexpressedandsecreted)对T嗜性HIV 1病毒株SF 33在T细胞中复制的影响。方法　在SF 33感染细胞前 1h ,用不同浓度 (5ng/ml、5 0ng/ml、5 0 0ng/ml)的重组人RANTES、GST RANTES或TEP RANTES对MT 4细胞进行预处理。病毒感染后第6天 ,以ELISA方法检测p2 4抗原水平 ,MTT比色法检测感染细胞的存活数。结果　在不同浓度下 ,天然RANTES及修饰RANTES对SF 33p2 4水平不产生显著影响 ,半数抑制浓度IC50 >5 0 0ng/ml,对感染细胞的保护率在 0以下。结论　T嗜性HIV 1病毒株SF 33对RANTES及其修饰蛋白的抑制作用不敏感。; 杨瑞仪颜瑾曾庆平冯丽玲曾常红; 关键词：RANTES

青蒿紫穗槐二烯合酶基因的克隆与表达被引量：1: 2008年; 【目的】重建青蒿素合成代谢途径,以研制青蒿素高产微生物反应器。【方法】以低温预处理青蒿试管苗提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增紫穗槐二烯合酶基因(ADS),并导入大肠杆菌中表达。【结果】青蒿ADScDNA测序结果已在GenBank注册。当ADScDNA与谷胱甘肽硫转移酶基因(GST)融合并在大肠杆菌表达后,其菌体裂解上清中可检测到谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性,表明ADS基因已有可溶性表达。当裂解上清与法呢基焦磷酸(FDP)保温后,成功地检测到青蒿特有的倍半萜烯。【结论】青蒿ADS基因已在细菌体内实现功能性表达。; 黄瑛尹录录冯丽玲杨瑞仪杨雪芹曾庆平; 关键词：基因表达

萜类生物合成的基因操作被引量：16: 2006年; 萜类是一组结构迥异的化合物家族,其中很多具有较大的应用价值,如青蒿素和紫杉醇等,它们在多种微生物和植物中合成,但其天然产量低。萜类代谢工程通过DNA重组技术改造萜类合成细胞中的代谢途径,以提高萜类最终产量或在不含萜类的生物中合成萜类,为促进有用萜类合成提供了新的机会。以萜类化合物生物合成途径的基因转移与表达为切入点,综述了目前在微生物及植物中应用代谢工程提高萜类产量的研究进展。; 黄瑛曾庆平; 关键词：萜类基因转移代谢工程

植物基因打靶技术被引量：2: 2003年; 基因打靶是反向遗传学的基础工具 ,它通过同源重组置换染色体内的基因用于复杂基因组的基因功能分析。但是 ,在植物中 ,外源DNA的插入主要是非序列依赖的非同源末端连接方式 ,基因打靶频率很低 ,只有 1 0 -5～ 1 0 -4 的水平。综述了近年来为了提高植物基因打靶频率。; 杨瑞仪曾庆平; 关键词：植物基因打靶同源重组

反义RNA在植物基因工程领域的应用进展被引量：1: 2009年; 反义RNA广泛存在于各类生物中,它通过与靶RNA进行碱基互补配对的结合方式参与基因表达的调控。目前利用反义RNA技术调控植物基因的表达取得了很大进展,反义RNA在植物基因工程领域主要应用于抑制果实成熟、抗病、作为反向筛选标记基因、控制花色、控制淀粉合成、控制油料种子中脂肪酸的合成、控制雄性不育等方面。此外,通常采用反义RNA技术抑制食物中原有的与所需去除的化学成分合成有关的基因表达,降低或去除食物中的有害化学成分。反义RNA技术的研究尚处于初级阶段,但它作为一门新兴的生物技术必将在今后的农业发展中发挥重要作用。; 冯丽玲; 关键词：反义RNA

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广东省自然科学基金(020799)