国家高技术研究发展计划(2003AA249030)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：王选年宁长申赵光辉张龙现张改平更多>>
- 相关机构：河南省农业科学院河南农业大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的真核表达质粒的构建及表达分析
- 2009年
- 根据GenBank中的参考序列设计并合成引物序列，从pMDM13h中扩增带酶切住点和His—tag的基因序列；用HindⅢ和XhoⅠ双酶切PCR扩增产物和pcDNA3．0载体，连接构建真核表达重组质粒pc3M13h，利用PCR，双酶切和测序鉴定其正确性；重组质粒pc3M13h转染COS-7细胞，瞬时表达的转染细胞（96孔板）在转染36．48h后，应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学，分别检测pc3M13h在COS-7细胞培养上清液和细胞内的表达．结果表明，设计合成的引物成功扩增了带有酶切位点和His—tag的基因序列；成功构建了真核表达重组质粒pc3M13，双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学检测显示，pc3M13h重组质粒不但能够在COS-7细胞中进行表达，而且能够进行微量的分泌表达．
- 赵光辉鲁琨张改平宁长申王选年张龙现菅复春宋海涛
- 关键词：猪囊尾蚴排泄分泌抗原基因表达
- 猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达被引量：4
- 2008年
- 目的研究猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达。方法利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中扩增排泄分泌抗原M13h蛋白去除信号肽序列的基因,对其进行序列分析,并亚克隆至原核表达载体pET43a上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达融合蛋白,并用Western blot对纯化后的融合蛋白进行鉴定。结果从猪囊尾蚴中克隆到去除信号肽序列的M13h的基因,其序列长度为204 bp,包含198 bp的编码区,与GenBank中西班牙分离株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为100%,与韩国的M13h蛋白的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为95.7%和95.3%;经SDS-PAGE电泳鉴定,重组质粒表达产物分子质量单位约74 ku,其中M13h基因表达蛋白的分子质量单位为7.87 ku,与预期结果一致;经Western blot检测,纯化后的复性蛋白质可与兔抗全囊囊尾蚴血清发生特异性反应。结论pET43M13h重组质粒表达产物具有较高的保守性和特异性,可用于猪囊尾蚴病的免疫诊断。
- 赵光辉王秋霞鲁琨张改平宁长申王选年张龙现菅复春宋海涛
- 关键词：猪囊尾蚴克隆原核表达
- 猪囊尾蚴18kD蛋白基因的克隆及其序列分析被引量：5
- 2006年
- 为在体外获得高纯度的猪囊尾蚴病的诊断抗原,克隆了猪囊尾蚴18kD蛋白的基因,并对其核苷酸和氨基酸序列进行了分析,揭示了18kD蛋白为一种分泌表达蛋白,为该蛋白的体外表达提供了基础。
- 赵光辉张改平王选年宁长申张龙现石团员宋海涛鲁坤
- 关键词：猪囊尾蚴
- 基于cox Ⅰ基因对猪囊尾蚴河南分离株种系发育关系的研究被引量：13
- 2008年
- 利用RT-PCR技术从河南部分地域的猪囊尾蚴中获得10个分离株的cox Ι部分基因序列,其长度为344bp;将其克隆入pMD19-T并测序;分别用Clustal X 1.81程序对序列进行比对,然后用PAUP 4.0程序MP法和NJ法绘制种系发育树,并用PUZZLE 5.2程序构建最大似然树;同时利用WDANSIST 2.5程序和DNAstar 5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果表明,10个河南猪囊尾蚴分离株的coxΙ部分基因序列完全一致,属于猪带绦虫亚洲基因型;猪囊尾蚴coxΙ部分基因可有效区分出Asian和American/African两种基因型,并可用于不同种带科绦虫的鉴别诊断。因此,猪囊尾蚴coxΙ基因有望作为一种鉴别基因用于带科绦虫病和囊尾蚴病的PCR鉴别诊断。
- 赵光辉张改平宁长申王选年张龙现菅复春鲁琨
- 关键词：猪囊尾蚴COX
