重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ090302)
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：重庆医科大学西南大学更多>>
- 发文基金：重庆市教育委员会科学技术研究项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 稳定表达绿色荧光蛋白的B16细胞株的建立及其生物学特性研究
- 2011年
- 目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的B16黑色素瘤细胞株,并研究其生物学特性。方法转染增强型绿色荧光蛋白基因入B16细胞,经G418联合单克隆培养,筛选阳性细胞。激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP阳性细胞形态;流式细胞仪检测细胞内EGFP基因的蛋白表达;RT-PCR检测EGFP基因的mRNA表达;皮下接种及MTT法评价细胞在体内外的生长特性。结果流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白的细胞阳性率为99.81%,RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA阳性表达。生长曲线显示其体外增殖趋势与B16相似,EGFP-B16体内成瘤速度较B16慢(p<0.05)。结论稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-B16细胞株成功建立,可作为进一步研究恶性黑色素瘤的材料。
- 张弘丁晓燕方廖琼王智彪乔海刘阳张小梅
- 关键词：稳定转染增强型绿色荧光蛋白基因
- 早期小鼠胚胎中的RNAi应用
- 2010年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是有效双链RNA引起的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)现象,为抑制mRNA分子合成蛋白提供了快速而相对简便的途径。RNAi现象普遍存在于真核生物,已经广泛应用于疾病相关基因的研究和药物作用靶点的筛选。为了更好地探究小鼠卵母细胞和胚胎中特定基因的功能,研究人员在这一特有生命形成阶段进行了RNAi技术的探索,并且取得了一定的研究进展。
- 刘阳方廖琼
- 关键词：RNAI小鼠卵母细胞胚胎
- 小鼠胚胎对人卵巢癌细胞生物学行为影响的体外研究
- 2010年
- 探讨体外共培养环境中小鼠胚胎对人卵巢癌细胞HO8910PM的影响.通过小鼠胚胎与肿瘤细胞体外共培养模型观察小鼠胚胎对肿瘤细胞的形态及生长行为的影响,Annexin V-EGFP/PI原位检测与小鼠胚胎共培养后肿瘤细胞的凋亡情况,MTT粘附实验、transwell迁移及侵袭实验研究与小鼠胚胎共培养后的人卵巢癌细胞的粘附性、迁移性及侵袭性的变化.共培养时小鼠胚胎能够侵入人卵巢癌细胞并推开肿瘤细胞形成自己的生长空间,激光共聚焦显微镜下见胚胎周围的肿瘤细胞凋亡增加,与对照组比较共培养后的HO8910PM肿瘤细胞的粘附性、迁移性及侵袭性均显著降低(P<0.05、P<0.01).结果表明体外共培养体系中小鼠胚胎能够侵袭肿瘤细胞,促进人卵巢癌细胞的凋亡,并使其粘附性、迁移及侵袭相关恶性行为降低.
- 丁晓燕张弘方廖琼乔海刘阳张小梅王智彪
- 关键词：共培养凋亡
- 基于小鼠MMP-9基因的siRNA的筛选
- 2012年
- 通过GenBank数据库检索,基于小鼠MMP-9基因设计特异性的siRNA干扰靶点,克隆至pGCsi-U6/Neo/GFP载体中,使用PEI衍生物包裹,转染小鼠黑色素瘤B16细胞,流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜分析细胞转染情况,RT-PCR检测24,48 h后MMP-9基因转录水平变化,筛选最佳的重组质粒和干扰靶点。结果显示:成功设计和构建了3个MMP-9-siRNA干扰质粒,3个重组质粒对B16细胞的转染率分别为60.04%、63.93%和56.27%,且3个重组质粒均能有效干扰B16细胞MMP-9 mRNA的表达,其中MMP-9-siRNA-2干扰效率最高(63%),可持续干扰MMP-9基因表达。这些结果提示,MMP-9-siRNA-2为沉默小鼠黑色素瘤细胞MMP-9基因最优的siRNA重组质粒。
- 唐照勇刘阳刘隆兴方廖琼
- 关键词：MMP-9B16细胞SIRNART-PCR
