重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ090306)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：温纯洁吴兰香陈旺周宏灏付利娟更多>>
- 相关机构：重庆医科大学中南大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立
- 2012年
- 目的:构建细胞色素P450CYP2C19*1、*2、*3真核表达载体,并分别转染人肝癌细胞(HepG2),建立高表达目的基因的稳定转染细胞系。方法:应用化学合成法合成CYP2C19*1(野生型)序列,再以此为模板,体外定点突变PCR法构建*2、*3(突变型)。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.l(-),经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后,脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测CYP2C19*1、*2、*3 mRNA以及蛋白的表达。结果:成功构建了pcDNA3.1(-)-CYP2C19*1、*2、*3表达质粒,并建立了相应稳定转染细胞系。进一步的RT-PCR和Western Blot检测结果表明,目的基因均得到了稳定的表达。结论:人CYP2C19*1、*2、*3稳定表达细胞系为研究创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测以及为临床潜在药物相互作用提供了有效实验平台。
- 陈旺俞竟屈强张伟李智吴兰香温纯洁周宏灏
- 关键词：CYP2C19基因多态性真核表达转染
- 草酰乙酸对锂-匹罗卡品癫痫大鼠的神经保护作用
- 2012年
- 目的观察静脉注射草酰乙酸(oxaloacetate,OxAc)对氯化锂-匹罗卡品癫痫(lithium-pilocarpine seizures,LPS)模型大鼠的神经保护作用。方法 30只6～8周龄、体质量180～220 g的Sprague-Dawley雄性大鼠按随机数字表法分为5组:生理盐水对照组(用0.9%生理盐水代替匹罗卡品)、LPS模型对照组、LPS+OxAc组(癫痫持续状态终止时注射OxAc 3.5 mg/100 g)、LPS+OxAc+谷草转氨酶(glutamate-oxaloacetate transminase,GOT)组(癫痫持续状态终止时注射OxAc 3.5 mg/100 g+GOT 3.5μg/100 g)及LPS+OxAc+马来酸盐(Maleate)组(癫痫持续状态终止时注射OxAc3.5 mg/100 g+Maleate 6.3 mg/100 g)(n=6)。用氯化锂和匹罗卡品制备癫痫动物模型,诱发癫痫持续状态(status epi-lepticus,SE)60 min后注射安定终止发作。分别检测SE终止后不同时间点各实验组大鼠脑脊液与血液中的谷氨酸浓度、脑电图表现及神经元脱失情况。结果 LPS模型对照组大鼠SE终止后脑脊液与血液中的谷氨酸浓度显著升高,8 h左右达到最高峰,与生理盐水对照组相比,分别升高了约88%和54%,随后开始缓慢下降。在SE终止后静脉注射OxAc可以在8 h内明显降低癫痫大鼠脑脊液中的谷氨酸浓度(P<0.05),8 h后其作用基本消失;OxAc对癫痫大鼠血液中谷氨酸浓度的降低作用可以持续至注射后12 h(P<0.05)。OxAc对癫痫大鼠脑电图表现及海马、齿状回门区神经元脱失现象也有明显改善作用。在应用OxAc的同时,静脉注射GOT可以增强OxAc对LPS大鼠的神经保护作用,而同时应用GOT特异性抑制剂Maleate可以减弱OxAc的上述作用效果。结论静脉注射OxAc可通过促使血液中谷氨酸浓度下降而对氯化锂-匹罗卡品癫痫模型大鼠的神经起到保护作用。
- 吴兰香王果付利娟温纯洁杨竹王应雄于超
- 关键词：草酰乙酸谷氨酸谷草转氨酶癫痫
- MiRNAs对细胞色素P450s药物代谢酶系调控作用的研究进展被引量：3
- 2011年
- MicroRNAs(MiRNAs)是一类内源性非编码小分子RNA,一般含有19～25个寡核苷酸,通过与靶mRNA 3'端非翻译区(3'UTR)完全或不完全互补配对,引起mRNA降解或翻译抑制,发挥基因调控作用。MiRNAs在多种生物学过程中都有重要作用,其异常调节会导致各种疾病发生,所以miRNAs被认为可能是新的治疗靶点。MiRNAs在遗传药理学中的作用最近才被研究。化学物质、药物、激素或者是病理状态引起的miRNAs表达的改变可能会导致药物代谢和药物效应的改变。本文主要从miRNAs对细胞色素P450代谢酶和核受体的转录后调控作用作一综述。
- 温纯洁傅利娟吴兰得陈旺张涛周宏灏
- 关键词：MICRORNA细胞色素P450遗传药理学转录后调控
- OxAc对大鼠缺血性脑损伤的保护作用研究被引量：2
- 2012年
- 目的:观察静脉注射草酰乙酸(oxaloacetate,OxAc)对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用.方法:线拴法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注损伤模型,54只雄性SD大鼠随机分为5组:Sham组(n=6),MCAO+0.9%NS组(n=12),MCAO+OxAc组(n=12),MCAO+OxAc+GOT组(n=12)和MCAO+OxAc+Maleate组(n=12).脑缺血2h于再灌注即刻给予不同药物静脉注射,分别检测各组大鼠血清与脑脊液中谷氨酸(glutamate,Glu)体积质量分数、神经行为学评分、脑梗死体积及神经元脱失情况.结果:脑缺血2h后大鼠脑脊液中的Glu体积质量分数显著上升(p<0.001),血浆中Glu体积质量分数无明显变化.静脉注射OxAc可以迅速而明显地降低脑缺血大鼠血浆和脑脊液中的Glu体积质量分数(p<0.05);与MCAO+0.9%NS组相比,OxAc的应用可以明显提高大鼠神经行为学评分(p<0.05)、减小脑梗死体积(p<0.01)、明显改善术后大鼠相关脑区神经元脱失现象;同时静脉注射谷草转氨酶(Glutamate-oxaloacetate transaminase,GOT)可以促进OxAc的作用,而同时应用GOT特异性抑制剂马来酸盐(Maleate)可以减弱OxAc的上述作用效果.结论:静脉注射OxAc对大鼠急性局灶性脑缺血具有明显的神经保护作用,且此作用主要是通过其作为血液中的"谷氨酸清道夫"而实现的.
- 付利娟温纯洁丁裕斌吴兰香
- 关键词：草酰乙酸谷氨酸谷草转氨酶缺血性脑卒中
