浙江省医药卫生科学研究基金(2002A024)
- 作品数：2 被引量：16H指数：2
- 相关作者：许先国严力行朱发明洪小珍何吉更多>>
- 相关机构：浙江省血液中心更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RHD基因的克隆及其在K562细胞中的表达被引量：7
- 2005年
- 本研究目的在于克隆人类红细胞RHD基因,构建RhD表达载体,观察其在K562细胞中的表达。从脐血网织红细胞中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应扩增RHD/CE基因,扩增产物通过TA连接克隆到pGEMT质粒,采用测序方法筛选多个克隆获得RHD基因。将获得的RHD基因进一步亚克隆构建pcDNA3.1(-)表达载体,重组表达载体通过superfect试剂盒转染K562细胞,最后观察K562细胞中RHD基因的转录和表达。结果表明:成功分离克隆到RHD基因,构建的pcDNA3.1(-)重组表达载体经酶切和测序证实RHDcDNA序列及插入方向正确。转染后的K562细胞内有相应的mRNA转录,细胞表面有RhD抗原表达。结论:RHDcDNA转染的K562细胞能表达RhD抗原,该表达体系有助于进一步研究各种RhD变异型的分子基础。
- 严力行许先国朱发明何吉
- 关键词：RHD基因RHD抗原K562RH血型系统
- 鉴定9个新的RHD基因mRNA可变剪接体被引量：11
- 2006年
- 为了研究各种RHD基因mRNA可变剪接体的基因结构，应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测正常人脐血样本RHDmRNA，对RHDcDNA进行TA克隆和序列分析，对各可变剪接体的剪接位点进行DNA序列分析，并将RHDmRNA进行表达序列标签（ESTs）分析。结果在28个阳性克隆中，除全长RHDcDNA外，共检测到12种（包括9种新的）RHD可变剪接体，发现外显子遗漏、5’和3’剪接位点变异3种剪接形式，涉及外显子2～9，其中6种新的剪接体同时存在RHD和RHCE基因同源杂交现象。ESTs分析还检索到内含子保留形式的剪接体。研究表明，RHD基因mRNA存在复杂的可变剪接机制，除己报道的剪接体外，检测到9种新的RHD可变剪接体，并发现了可变剪接和同源杂交并存现象。
- 许先国吴俊杰洪小珍朱发明严力行
- 关键词：RHD基因RH血型
