陕西省自然科学基金(2004C222)
- 作品数：10 被引量：42H指数：3
- 相关作者：刘文超杨静悦曹大勇斯小明张宁宁更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤患者造血干细胞来源的树突状细胞的制备及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:以经动员富集的肿瘤患者外周血单个核细胞(MNC)为来源,建立体外诱导培养临床级树突状细胞(DC)的方法并其形态、表型及功能的鉴定。方法:以化疗联合皮下注射G-CSF对肿瘤患者进行外周血干细胞动员,血细胞分离机分离富集外周血MNC,聚苯乙烯细胞培养板贴壁纯化后,加入无血清培养液X-vivo15,以GM-CSF和IL-4联合诱导DC分化,诱导d5加入TNF-α促进DC成熟,观察DC形态及表型变化;并检测其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结果:以该法诱导的患者DC显示出典型的树突细胞形态表型特征,同时具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论:以经动员富集的肿瘤患者外周血MNC为来源,联合应用GM-CSF、IL-4及TNF-α,在体外可诱导培养出临床级具有典型形态、表型及免疫活性的DC。
- 斯晓明张红梅张利旺刘文超
- 关键词：单核细胞
- 人脂肪酸合成酶启动子在乳腺癌细胞中的转录活性分析被引量：3
- 2007年
- 目的分析人脂肪酸合成酶(FAS)启动子在乳腺癌细胞中的转录活性,并与cerbB2启动子、midkine启动子相比较,为其乳腺癌靶向基因治疗提供依据。方法Western blot和间接免疫荧光法检测FAS蛋白在3种人乳腺癌细胞系SKBR3、MCF-7、MDA-MB-231以及正常成纤维细胞系NIH3T3中的表达。构建pGL3-FAS、pGL3-cerbB2和pGL3-midkine荧光素酶表达载体,并分析其在SKBR3、MCF-7、MDA-MB-231和NIH3T3细胞系中的相对转录活性。结果FAS蛋白在3种乳腺癌细胞系中均有表达,其中在SKBR3细胞中表达量最高,在MDA-MB-231细胞中表达量最低,而在正常成纤维细胞系NIH3T3中不表达。FAS蛋白主要定位于细胞质。FAS启动子在3种乳腺癌细胞系中均具有较强的转录活性,转录活性明显高于强启动子SV40和肿瘤特异性启动子midkine;而在正常成纤维细胞中,转录活性很低。FAS启动子在cerbB2高表达的SKBR3细胞中转录活性最高,与cerbB2启动子相当;在cerbB2表达较弱的MCF-7和MDA-MB-231细胞中的转录活性则明显高于cerbB2启动子。结论FAS启动子在乳腺癌细胞中具有强转录活性,较cerbB2启动子作用范围更广,较midkine启动子转录活性更高,而在正常细胞中转录活性很低,具有良好的乳腺癌靶向性,可作为乳腺癌广谱基因治疗的靶向工具。
- 陈衍刘文超秦鸿雁韩骅
- 关键词：乳腺癌脂肪酸合成酶启动子转录活性靶向治疗
- 抗肿瘤血管生成治疗相关性研究被引量：1
- 2007年
- 血管生成是肿瘤生长、侵袭、转移、和复发的基础。肿瘤血管生成是诸多因素共同作用的结果,其中血管生长刺激因子和血管生长抑制因子作用平衡与否,决定了血管生成是促进还是抑制。抗血管生成作为肿瘤治疗新方法,已成为重要的抗肿瘤策略。基因治疗则使抗血管生成治疗更具有靶向性。本文就该领域研究情况作一综述。
- 张宁宁刘文超薛妍
- 关键词：肿瘤血管生成基因治疗
- 应用组织芯片技术研究抑癌候选基因NDRG2在淋巴瘤组织中的表达及其意义
- 2009年
- 目的:应用组织芯片技术分析抑癌候选基因NDRG2在人类淋巴瘤组织、淋巴结正常组织及淋巴结良性病变组织中的表达情况。方法:采用小鼠抗NDRG2单克隆抗体的免疫组织化学ABC法,研究NDRG2在不同淋巴结组织的表达,并分析NDRG2在不同淋巴结组织中的表达差异。结果:免疫组化结果显示,淋巴瘤组织与淋巴结良性病变组织中DNRG2的表达相比呈显著性差异(P<0.05),淋巴瘤组织与正常淋巴结组织中DNRG2的表达相比呈显著性差异(P<0.05)。淋巴结良性病变组织与正常淋巴结组织中DNRG2的表达相比呈显著性差异(P<0.05)。正常淋巴结,淋巴结良性病变及淋巴瘤组织中NDRG2的阳性表达率分别为92.5%(37/40)、67.5%(27/40)和18.51%(15/81),3者间比较,差异有统计学意义。结论:NDRG2在淋巴瘤组织中呈低表达,提示其可能对淋巴瘤的发生或发展有重要作用,这不仅为研究淋巴瘤的发病机制进一步提供了线索,而且对淋巴瘤的诊断和治疗具有重要意义。
- 杨怡刘文超沈岚付强宋爱玲何芸刘新平
- 关键词：NDRG2淋巴瘤
- 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂与肿瘤相关性的研究进展被引量：11
- 2009年
- 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂相关基因的突变和表达失调可直接或间接影响细胞的周期、增殖以及凋亡等功能,与肿瘤的发生发展密切相关。p16能够抑制CDK4/CDK6介导的Rb蛋白产物的磷酸化,其CpG岛异常甲基化参与宫颈癌的发生发展;p21作为p53的下游调节因子,与肿瘤血管的生成、淋巴转移及预后相关;p27作用机制复杂,与乳腺癌预后关系密切,并可恢复耐药乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性;p57在细胞周期G1到S期的转变中至关重要,其表达程度与部分肿瘤的恶性程度相关,它还参与了肿瘤细胞的凋亡过程。了解这些基因的结构和作用机制,探究其在肿瘤发生、发展中所产生的作用,进而寻找有效治疗靶点,已成为肿瘤分子生物学关注的热点。
- 马骥刘文超
- 关键词：细胞周期细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂肿瘤
- 人结肠癌组织中Raf-1的表达及其临床意义被引量：7
- 2007年
- 目的:研究Raf-1在人结肠癌组织中的表达与肿瘤血管生成的关系,并探讨它们的临床意义。方法:应用组织芯片技术和免疫组化法检测来自西京医院病理科2005-2006年间的87例结肠癌病例癌区、癌旁区及切缘区组织标本中Raf-1的表达,应用CD34标记的免疫组化法检测微血管密度(microvessel density,MVD);并分析Raf-1表达和MVD与结肠癌体积、转移、分化等病理特征之间的相关性。结果:Raf-1在癌组织、癌旁组织、切缘区组织的阳性率分别为86.47%、37.34%和11.03%,3者比较有显著性差异(P<0.01)。癌组织、癌旁组织、切缘区组织中MVD值分别为(61.35±11.60)、(28.34±6.70)和(8.26±3.70),3者有显著性差异(P<0.01)。Raf-1表达和MVD与肿瘤大小、转移与否密切相关。结论:Raf-1是调控人结肠癌组织血管生成的关键分子,在癌组织中Raf-1的表达与MVD值成正相关,两者与临床上肿瘤的大小、转移与否密切相关。
- 张宁宁刘文超薛研
- 关键词：RAF-1肿瘤血管生成组织芯片微血管密度结肠癌
- 含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备
- 2009年
- 目的:构建含人AFP基因的腺病毒载体,体外转染树突状细胞,制备树突状细胞肝癌瘤苗。方法:将AFP基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中,构建穿梭载体Shuttle2-AFP。用PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切后将所获AFP基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成pAdeno-AFP重组腺病毒载体。其后,用重组腺病毒载体转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体。通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定。包装好的重组病毒载体pAdeno-AFP体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后,FACS分析pAd-eno-AFP/DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测AFP水平。结果:酶切、PCR鉴定证实,穿梭质粒插入片段为AFP基因。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带AFP基因感染树突状细胞,pAdeno-AFP/DC能高水平的表达CD1a,CD11c,CD80,CD86以及HLA-DR,并分泌较高水平的AFP。结论:构建成功的含AFP腺病毒载体可以在树突状细胞中表达AFP,为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础。
- 杨静悦曹大勇刘文超斯小明
- 关键词：树突状细胞腺病毒载体AFP转染
- IL-18基因增强肿瘤抗原致敏DC诱导的CTL特异性杀伤肝癌细胞被引量：15
- 2009年
- 目的:探讨腺病毒介导的白细胞介素-18(IL-18)基因转染能否使肿瘤抗原冲击的树突状细胞(dentritic cell,DC)在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应。方法:携IL-18的重组腺病毒载体感染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL-18-HepG2/DC),FACS分析AdIL-18-HepG2/DC表面分子的表达,ELISA法检测IL-18的分泌水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力,MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞杀伤效应。结果:AdIL-18-HepG2/DC较未转染DC能高水平地表达CD1a、CD11c、CD80、CD86以及HLA-DR;较未经IL-18转染的DC分泌较高水平的IL-18。AdIL-18-HepG2/DC能非常有效地刺激自体T细胞增殖(CPM值为228 018±1 079),其刺激强度显著强于AdIL-18DC、HepG2/DC、AdlzcZ/DC及DC(均P<0.05)。当靶细胞为HepG2时,AdIL-18-HepG2/DC诱导的CTL杀伤活性显著高于其他各组(均P<0.05),并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比。结论:IL-18基因转染且肝癌抗原致敏的DC可以显著增强DC的特异性抗肝癌效应。
- 杨静悦曹大勇刘文超斯小明
- 关键词：白细胞介素-18肿瘤抗原
- 人FAS启动子驱动的HSV-TK重组腺病毒靶向杀伤SKBR3乳腺癌细胞的研究被引量：2
- 2007年
- 目的:构建脂肪酸合成酶(FAS)启动子驱动下的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)重组腺病毒,研究其对乳腺癌细胞SKBR3的靶向杀伤作用。方法:以AdEasyTM腺病毒系统为载体,构建FAS启动子驱动下的HSV-TK重组腺病毒载体Ad-FAS-TK,将线性化的Ad-FAS-TK在AD-293细胞中包装,经过大量扩增和纯化,得到重组腺病毒。MTT法检测重组腺病毒Ad-FAS-TK与前体药物更昔洛韦(GCV)对SKBR3细胞的靶向杀伤作用。TUNEL法检测细胞凋亡。结果:成功构建FAS启动子驱动下的HSV-TK重组腺病毒载体Ad-FAS-TK,经包装、扩增和纯化得到约1010pfu/ml的重组腺病毒。MTT法和TUNEL检测结果显示,FAS启动子驱动下的HSV-TK重组腺病毒与GCV能够诱导SKBR3细胞凋亡,产生靶向细胞毒作用。结论:FAS启动子驱动下的HSV-TK重组腺病毒联合GCV对SKBR3细胞具有靶向杀伤作用,FAS启动子可以作为肿瘤靶向基因治疗的工具。
- 陈衍刘文超秦鸿雁张瑞韩骅
- 关键词：脂肪酸合成酶启动子转录活性
- 高表达CypA肝癌细胞系的建立及其功能初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的:构建含人全长CypA cDNA的真核表达质粒,建立高表达CypA蛋白的肝癌细胞系,为进一步研究CypA在肝癌中的功能和作用机制提供细胞模型。方法:将人全长CypA cDNA序列克隆后,连接至真核表达载体pcDNA3.1中,再将构建的真核表达载体转染至FHCC98肝癌细胞中,经G418加压筛选后获得稳定表达CypA的肝癌细胞株;免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况;MTT法测定细胞的增殖速率。结果:真核表达载体pcDNA3.1-CypA经酶切、测序鉴定,结果正确;免疫印迹结果显示,稳定转染后细胞的CypA表达水平显著高于空载体转染和未转染的细胞;与对照相比,稳定高表达CypA的细胞增殖速度加快。结论:成功构建了含有人全长CypA cDNA序列的真核表达载体pcDNA3.1-CypA;建立了稳定高表达CypA的FHCC-98肝癌细胞系;CypA的高表达可以促进FHCC98细胞的增殖。
- 王宇姚辉温丽孙茜李郁刘文超
- 关键词：亲环素A稳定转染肝细胞肝癌细胞增殖
