天津市卫生局科技基金(2010KZ17)
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
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- 丹参酮ⅡA对肝癌细胞系SMMC-7721去甲基化作用的研究被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞SMMC-7721抑癌基因的去甲基化作用。方法:将肝癌细胞系SMMC-7721分组培养,丹参酮组和5-氮-2’脱氧胞苷组分别在培养液中加入上述两种药物,阴性对照组不加药物。经培养后,应用甲基化特异性PCR方法检测细胞TFPl2、SPARC、DKK3、p16、APC、MGMT基因启动子区的甲基化状态。应用亚硫酸盐修饰测序法对培养后3组细胞提取的DNA进行测序,比较各组细胞SPARC基因启动子区CpG位点的甲基化差异。通过逆转录PCR、免疫细胞化学染色检测基因的表达。结果:TFP12、p16及APC在SMMC-7721细胞中呈部分甲基化状态,而SPARC、DKK3及MGMT呈完全甲基化状态。经丹参酮ⅡA或5-氮-2’脱氧胞苷作用后,两组细胞SPARC、DKK3及MGMT基因可检测到非甲基化状态,逆转录PCR可检测到这些基因的mRNA表达,免疫细胞化学染色可检测到SPARC的蛋白表达,而对照组细胞未检测到相应基因表达。对SPARC的亚硫酸盐修饰测序显示,对照组、5-氮-2’脱氧胞苷组和丹参酮组细胞的CpG甲基化频率分别为96.53%(139/144)、18.75%(27/144)和45.14%(65/144),各组间比较均有统计学差异(P<0.001)。定量逆转录PCR检测DNA甲基转移酶Ⅰ的相对表达,丹参酮组较对照组下调至36%～78%。结论:丹参酮ⅡA可逆转SMMC-7721细胞部分抑癌基因的甲基化状态,恢复基因表达,其可能通过下调DNA甲基转移酶Ⅰ的表达而影响细胞DNA的甲基化过程。
- 张晔杨斌白同高英堂刘辉骆莹王鹏杜智
- 关键词：肝细胞癌抑癌基因甲基化
- 肝癌血浆游离DNA甲基化谱检测及临床意义被引量：5
- 2013年
- 目的：在外周血游离DNA中筛选肝癌特异的甲基化谱。方法：收集55例肝癌和54例慢性肝病患者血浆标本，应用甲基化特异性PCR方法检测血浆游离DNA的12个抑癌基因甲基化状态。结果：在肝癌组中，APC、p16、GSTP1、Cyclin D2、LHX1、TFPI2、DKK2、DKK3、SFRP2、14-3-3 sigma、ppENK、NPTX2基因的甲基化频率分别为78.18%、63.64%、58.18%、49.09%、49.09%、47.27%、40.00%、18.18%、16.36%、9.09%、7.27%和5.45%，而在慢性肝病组中，各基因的甲基化频率分别为27.78%、22.22%、7.41%、3.70%、16.67%、37.04%、37.04%、11.11%、20.37%、7.41%、7.41%和9.26%。APC、Cyclin D2、TFPI2、DKK3和GSTP1基因在肝癌组中的甲基化频率高于慢性肝病组（P〈0.01）。将它们组成5基因甲基化谱，肝癌组甲基化指数（中位值为0.6，IQR 0.4～0.8）显著高于慢性肝病组（中位值为0.2，IQR 0～0.2）。在肝癌组中，甲基化指数与患者年龄具有相关性，年龄大者甲基化指数较高，而甲基化指数与其它临床病理参数未见相关性。甲基化指数与肝癌患者的无瘤生存期及总体生存期均未见相关性。结论：该甲基化谱可能成为肝癌辅助诊断的核酸标志物。
- 张晔杨斌王毅军高英堂白同白彧杜智
- 关键词：肝细胞癌抑癌基因甲基化血浆
- Wnt途径拮抗剂Dickkopf-3蛋白在肝细胞癌中表达亚细胞定位及临床意义被引量：2
- 2012年
- 目的:分析Wnt途径拮抗剂Dickkopf-3(DKK3)蛋白在肝细胞癌中表达和亚细胞定位,探讨其在肝细胞癌中的临床意义。方法:采用细胞免疫荧光和免疫组织化学方法,分析肝癌细胞系及43例肝细胞癌与相应癌旁组织中DKK3的蛋白表达,并对其中31例中DKK3基因的甲基化状态进行检测。结果:DKK3蛋白在肝细胞癌组织中的高表达率为67.4%(29/43),显著高于相应癌旁组织中的41.8%(18/43)(P=0.017),且细胞核内呈明显高表达;肝细胞癌组织中DKK3基因甲基化发生率为90.3%(28/31),显著高于相应的癌旁组织中的64.5%(20/31)(P=0.015),DKK3基因的甲基化状态与蛋白表达无明显相关性(P=0.844);DKK3低表达的肝细胞癌患者5年总生存率和无瘤生存率明显高于高表达者(P=0.049,P=0.001)。结论:肝细胞癌中DKK3基因的甲基化状态可能与肝细胞癌中DKK3蛋白表达呈负相关;DKK3在癌组织中的高表达可能对肝细胞癌具有促进而非抑制性作用,可以作为判断肝细胞癌预后的指标。
- 王宁杨斌骆莹王涛王凤梅高英堂杜智
- 关键词：肝细胞癌甲基化
- 人血清高尔基体蛋白-73与乙肝病毒相关肝病关系的研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨血清高尔基体蛋白-73（GP73）与乙型肝炎病毒（HBV）相关肝病的关系及其对肝细胞癌（HCC）的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附测定（ELlsA）法对慢性乙型肝炎患者（n=31）、肝硬化患者（n=60）、HCC患者（n=71）、乙肝自愈者（n=21）及健康人群（n=42）进行血清GP73检测并其与其他临床指标的关系进行统计学分析。结果HBV相关肝病组的GP73水平较乙肝自愈组和健康对照组明显升高（P〈O．01）。在所有肝病患者中，肝硬化组GP73水平（231．13ng／m1）明显高于HCC患者治疗前组（117．63ng／m1）（P〈0．01）与慢性乙肝组（93．09ng／m1）（P〈0．01）；HCC治疗前组与慢性乙肝组GP73水平近似，无统计学差异（P〉0．05）；乙肝自愈与健康对照组GP73水平近似（分别为36．79ng／ml和45．40mg／m1），差异无统计学意义（P〉O．05）。HCC手术患者术后组血清GP73（175．12ng／m1）明显高于术前组（107．28ng／m1）（P〈0．01）。肝硬化组与HCC组中血清GP73水平随肝功能的降低而升高。采用甲胎蛋白（AFP）与GP73的比值（AFP／GP73）制作诊断HCC的ROc曲线，曲线下面积：0．878（95％CI：0．817～0．938），cut—off值为0．12时，敏感度78．87％，特异度86．21％，优于单独应用AFP检测。后者曲线下面积：0．826（95％CI：0．755～0．897），cut—off值为19．52时，敏感度为67．61％，特异度为85．12％。结论HBV相关肝病患者血清GP73水平明显高于健康对照与乙肝自愈者，并与肝损害的程度成正相关。血清GP73联合AFP检测（AFP／GP73）诊断HCC，相对于AFP单独检测在敏感性及特异性上都有不同程度的提高。
- 许彦杰王毅军高英堂焦晓磊郭华杨斌杜智
- 关键词：甲胎蛋白乙型肝炎病毒肝细胞癌
