国家自然科学基金(30370551)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 相关作者：辛世杰段志泉李凤贺崔泽实张健更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学中国医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- sonic hedgehog信号通路在血管平滑肌细胞中的表达及意义被引量：2
- 2009年
- 目的研究sonic hedgehog(Shh)信号通路各蛋白在血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达情况,探讨其是否与VSMC的增殖相关。方法应用免疫荧光、激光共聚焦检测Shh信号通路蛋白在体外培养的VSMC中的表达,MTT法及Ki67的表达情况联合评价细胞增殖。结果Shh信号通路的配体Shh蛋白、patched1受体及其下游转录因子Gli2在VSMC中有表达,MTT法及Ki67染色结果显示外源的Shh蛋白能够促进VSMC的增殖,而应用Shh信号通路的特异抑制剂Cyclopamine则能抑制细胞增殖。结论Shh信号通路与VSMC增殖密切相关。
- 李凤贺辛世杰杨栋崔泽实赵蕾杨昱张健段志泉
- 关键词：SHH血管平滑肌细胞增殖信号通路
- 细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的 研究细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达变化及其与内膜增生的关系.方法 雄性Wistar大鼠36只,8周龄,体质量140 g.建立颈静脉-腹主动脉移植模型,分别于术后14 d、28 d各处死18只大鼠,取材移植血管,免疫荧光检测Gli2蛋白在移植血管新生内膜中的表达,Western印迹法观察Gli2及细胞增殖核抗原（PCNA）的表达,RT-PCR检测Gli2-mRNA的表达;以对侧颈静脉作为对照.结果 免疫组化结果显示,正常静脉、术后14 d和术后28 d移植静脉Gli2＋细胞数比例分别为（3.2±0.4）%、（41.3±0.6）%和（58.3±0.6）%,正常静脉与移植静脉差异有统计学意义（P＜0.01）.Western印迹法显示术后Gli2表达水平增加并与PCNA表达呈正相关（r=0.826,P＜0.01）.RT-PCR结果显示术后14 d组和术后28 d组的Gli2 mRNA表达增加,分别为对照组含量的8.9和13.6倍.结论 自体静脉移植术后,Gli2在新生内膜中高表达并可能与细胞增殖相关.
- 李凤贺辛世杰杨栋崔泽实杨昱张健段志泉
- 关键词：移植静脉GLI2血管平滑肌细胞内膜增生
- Sonic hedgehog促进血管外膜成纤维细胞表型转化并发生增殖迁移被引量：2
- 2009年
- 目的研究sonic hedgehog（shh）在血管外膜成纤维细胞增殖、迁移、表型转化中的作用。方法体外培养血管外膜成纤维细胞，免疫荧光、激光共聚焦显微成像、免疫印迹以及实时定量聚合酶链式反应检测蛋白和基因表达，Ki67、细胞生长曲线评价细胞增殖情况，划痕实验观察细胞迁移情况，α-肌动蛋白评价细胞表型转化情况。结果shh在体外培养的血管外膜成纤维细胞中有表达，加入外源性的shh后（3．5μg／m1），Ki67^＋的成纤维细胞增多，划痕区域的细胞覆盖率增大、成纤维细胞内出现α-肌动蛋白的表达；加入cyclopamine（40μmol／L）抑制内源性的shh信号通路后，Ki67^＋的成纤维细胞减少，划痕区域的细胞覆盖率减小。结论shh能够促进成纤维细胞增殖、迁移、向肌成纤维细胞转化。
- 李凤贺辛世杰张四洋崔泽实高建张建段志泉
- 关键词：成纤维细胞增殖迁移表型转化
- CyclinD（-／-）／Patched（＋／-）双基因敲除鼠的构建
- 2008年
- 目的构建CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠以验证Hh传导系统与Rb系统的关系。方法应用已有的杂合子CycD基因敲除鼠CycD（＋／-）与杂合子Ptc基因敲除鼠Ptc（＋／-）进行交配繁殖，得到双基因杂合子敲除鼠CycD（＋／-）／Ptc（＋／-），再利用该双基因杂合子敲除鼠进行二次交配繁殖，得到实验组CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠。结果实验得到了双基因敲除鼠CycD（-／-）／Ptc（＋／-）、双基因杂合子基因敲除鼠CycD（＋／-）／Ptc（＋／-）、CycD单基因敲除鼠CycD（-／-）／Ptc（＋／＋）。结论通过本实验方法得到CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠，可用于进一步揭示Ptc基因与CycD基因相互影响调控的作用及Hedgehog与Rb信号传导通路在哺乳动物中的相关性。
- 辛世杰李璇Molly Duman-ScheelWei Du
- 关键词：CYCLINPATCHED
- 自体移植静脉中sonic hedgehog表达水平的动物实验研究被引量：5
- 2010年
- 目的研究细胞周期相关因子sonic hedgehog（SHH）在大鼠自体移植静脉中的表达变化及其与内膜增生的关系。方法雄性Wistar大鼠24只，8周龄，体质量140g。建立颈静脉一腹主动脉移植模型，分别于术后14d、28d各处死12只大鼠，取材移植血管，免疫组化检测SHH蛋白在移植血管新生内膜中的表达，Western blot法观察SHH及细胞增殖核抗原（PCNA）的表达，Real—timePCR定量检测SHHmRNA的表达；以对侧颈静脉作为对照。结果免疫组化结果显示，正常静脉、术后14d和术后28d移植静脉SHH＋细胞数比例分别为（2．0±0．5）％、（39．4±0．4）％和（63．0±0．3）％，正常静脉与移植静脉差异有统计学意义（P〈0．01）。Western blot法显示术后SHH表达水平增加并与PCNA表达呈正相关（r=0．808，P〈0．01）。Real—time PCR结果显示术后14d组和术后28d组的SHH mRNA表达增加，分别为对照组含量的9．5和23．8倍。结论自体静脉移植术后，SHH在新生内膜中高表达并可能与细胞增殖相关。
- 李凤贺辛世杰惠林萍崔泽实赵蕾杨昱张健段志泉
- 关键词：移植物闭塞血管血管内膜细胞周期蛋白质类
- SHH信号通路在血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖中的作用研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨sonic hedgehog(SHH)信号通路是否在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中被活化,研究SHH信号通路是否参与PDGF诱导的VSMC增殖。方法体外培养人VSMC,施加PDGF刺激后应用激光共聚焦显微成像、Western-Blot及qRT-PCR检测SHH信号通路分子mRNA的表达变化;分别应用慢病毒介导的RNAi及SHH信号通路特异抑制剂cyclopamine阻断SHH通路后,用细胞计数、BrdU掺入法及Ki67染色评价细胞增殖情况。结果激光共聚焦显微成像及Western-blot及qRT-PCR均显示PDGF能够活化SHH信号通路蛋白shh、patched1及Gli2的表达;阻断SHH信号通路后,PDGF诱导VSMC增殖的作用明显减弱。结论 SHH信号通路在PDGF诱导的VSMC增殖中有重要作用。
- 李凤贺辛世杰杨栋惠林萍杨昱张健段志泉
- 关键词：SHH血小板源性生长因子血管平滑肌细胞增殖
