浙江省医药卫生科学研究基金(2005A102)
- 作品数：2 被引量：17H指数：2
- 相关作者：叶菊莲陆群英卢亦愚张建华罗芸更多>>
- 相关机构：浙江省疾病预防控制中心绍兴文理学院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
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- 实时PCR在大肠杆菌O157∶H7快速检测中的应用被引量：13
- 2007年
- 目的建立一种快速、敏感、特异的大肠杆菌O157∶H7的定量检测方法。方法根据GenBank公布的O157∶H7大肠杆菌rfbE基因序列,应用分子生物学软件进行序列比对,在该基因的保守区设计引物和TaqMan探针,对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立实时荧光定量PCR检测大肠杆菌O157∶H7的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。结果所有大肠杆菌O157∶H7菌株的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达1cfu/μL,重复性检测的变异系数均小于5%。在模拟污染牛奶中,可检出1×102cfu/μL的细菌。从细菌核酸提取至完成检测约需3h。结论本研究建立的基于Taqman探针技术的实时PCR检测体系具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,可用于大肠杆菌O157∶H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。
- 张建华陆群英程苏云卢亦愚叶菊莲罗芸
- 关键词：实时PCRTAQMAN探针大肠杆菌O157:H7
- 双重实时荧光PCR快速检测O157大肠杆菌的初步研究被引量：4
- 2007年
- [目的]建立双重实时PCR体系,实现对O157大肠杆菌rfbE和stx2基因的同步检测。[方法]根据GenBank公布的O157大肠杆菌rfbE和stx2基因序列,应用分子生物学软件设计两对引物和TaqMan探针,并对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立实时荧光定量PCR检测O157大肠杆菌的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。[结果]所有O157大肠杆菌菌株的检测结果均为阳性,而所有其他菌株检测结果均为阴性;该方法对O157大肠杆菌纯培养的检测范围为100～106cfu/μl,重复性检测的变异系数均小于5%。对模拟污染牛奶样本的检测范围为102～106cfu/μl。从细菌核酸提取至完成检测约需3h。[结论]基于Taqman探针技术的实时PCR检测体系可同步检测O157大肠杆菌rfbE和stx2基因,具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,可用于O157大肠杆菌食物中毒的快速诊断和食品微生物检测。
- 张建华卢亦愚程苏云陆群英叶菊莲罗芸
- 关键词：实时PCRTAQMAN探针O157大肠杆菌
