国家自然科学基金(81101999)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 相关作者：张万秋朱一超田寅辉沈恬黄菁更多>>
- 相关机构：南京医科大学泰州职业技术学院南京市第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向Survivin siRNA对乳腺癌MCF-7细胞雌激素受体表达的影响
- 2016年
- 目的探讨靶向Survivin siRNA对乳腺癌MCF-7细胞雌激素受体表达的影响。方法构建靶向Survivin siRNA载体,按照质粒类型分为空白对照组、阴性对照组和阳性实验组,空白对照组仅加入Lipofectamine 2000,阴性对照组加入空载质粒,阳性实验组加入靶向Survivin siRNA质粒,采用RT-PCR检测Survivin、ER mRNA表达水平,采用Western blot检测细胞Survivin、ER蛋白表达水平,并采用MTT法检测各组对MCF-7细胞增殖抑制率。结果以β-actin作为内参照,空白对照组Survivin、ER mRNA表达量分别为(1.17±0.14)和(0.79±0.11),阴性对照组分别为(1.15±0.12)和(0.80±0.09),阳性实验组分别为(0.43±0.03)和(1.94±0.41),阳性实验组Survivin mRNA表达显著低于空白对照组、阴性对照组,ER mRNA表达显著高于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05);空白对照组、阴性对照组Survivin、ER mRNA表达量比较差异无统计学意义(均P>0.05)。Western blot结果显示,阳性实验组Survivin蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组,ER蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组。细胞增殖实验结果显示,阳性实验组接种12、24、48h后MCF-7细胞增殖的抑制率逐渐升高,并显著高于同时段空白对照组和阴性对照组(均P<0.05)。结论通过siRNA技术干扰Survivin表达能够显著提高MCF-7细胞雌激素受体表达水平,靶向Survivin siRNA在ER阳性乳腺癌的基因治疗中具有潜在的临床价值。
- 黄菁虞玲隋俊张永臣
- 关键词：雌激素受体小干扰RNA乳腺癌SURVIVIN
- GST Pulldown技术检测HEK293T细胞活化的Rab35
- 2012年
- 目的:运用GST pulldown技术建立真核细胞中活化的Rab35的可靠检测方法。方法:构建GST-RUN的原核表达载体,并使其在大肠杆菌BL21中大量表达。用GST pulldown和Western blot技术分别检测HEK293T细胞中活化的Rab35及Rab35蛋白的表达。结果:成功构建了GST-RUN的原核表达载体,并使其在原核细胞中大量表达融合蛋白GST-RUN,用GSTPulldown和Western blot技术证实了HEK293T细胞中有活化的Rab35和Rab35总蛋白的表达。结论:本工作所建立的GSTPulldown技术可以检测HEK293T细胞中活化的Rab35,从而为进一步深入研究Rab35在真核细胞中的功能提供了技术保障。
- 张万秋朱一超
- 关键词：GST真核细胞
- Rab基因家族在MDA-MB-231乳腺癌细胞胞体和伪足中的差异表达被引量：2
- 2012年
- 目的:以表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激MDA-MB-231乳腺癌细胞胞体和伪足分离,在此基础上,鉴定Rab基因家族在胞体和伪足中的差异表达谱。方法:运用Boyden小室技术分离EGF刺激下MDA-MB-231乳腺癌细胞的胞体和伪足,并鉴定Rab基因家族在乳腺癌细胞胞体和伪足中的差异表达谱。结果:RAB1A等21个基因在胞体中高表达,RAB7A等16个基因在伪足中高表达,RAB3B等24个基因在胞体和伪足中的表达量大体相等。结论 :本研究建立的基于Boyden小室技术的实验方法可以有效分离乳腺癌细胞的胞体和伪足,在此基础上鉴定了一类在EGF趋化刺激下乳腺癌细胞伪足中富集的Rab基因,从而为进一步深入研究乳腺癌细胞伪足伸展的确切分子机制提供新的思路和研究方向。
- 张万秋田寅辉朱一超
- 关键词：BOYDEN小室基因表达
- 缺氧对人肝癌细胞MHCC-97L迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:研究缺氧对人肝癌细胞MHCC-97L迁移的影响,并初步揭示其分子机制。方法:建立划痕实验检测缺氧条件下人肝癌细胞MHCC-97L迁移能力变化的可靠模型,研究Wnt5a对MHCC-97L细胞迁移的调控。结果:缺氧使MHCC-97L细胞缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Wnt5a mRNA表达上调,并可促进MHCC-97L细胞迁移能力显著增强,干扰HIF-1α表达的MHCC-97L细胞在缺氧条件下Wnt5a mRNA表达显著降低,干扰Wnt5a表达的MHCC-97L细胞在缺氧环境中的迁移能力则明显降低。结论:在缺氧条件下MHCC-97L细胞迁移能力可发生明显改变,HIF-1α和Wnt5a调控其迁移过程。这些结果为深入阐明肝癌细胞转移和侵袭分子调控机制提供了新的实验线索。
- 张万秋朱一超
- 关键词：缺氧肝癌细胞迁移WNT5A
- Wnt5a/Dvl2/Rac1信号通路调控MDA-MB-231人乳腺癌细胞的迁移被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨Wnt5a信号通路调控MDA-MB-231人乳腺癌细胞迁移的分子机制。方法:在建立了划痕实验检测MDAMB-231人乳腺癌细胞迁移模型的基础上,研究Wnt5a/Dvl2/Rac1信号通路对MDA-MB-231人乳腺癌细胞迁移的调控。结果:高表达的Rac1可促进MDA-MB-231人乳腺癌细胞的迁移,干扰Rac1的表达可显著降低其迁移,Rac1活性受Wnt5a/Dvl2信号通路的调控。结论:Wnt5a/Dvl2/Rac1信号通路可调控MDA-MB-231人乳腺癌细胞的迁移,此为深入阐明乳腺癌细胞转移的分子调控机制提供了新线索。
- 张万秋田寅辉朱一超沈恬
- 关键词：WNT5ARAC1迁移
