博士科研启动基金(100082)
- 作品数：3 被引量：28H指数：3
- 相关作者：翟逸万永继涂增王金芳刘光英更多>>
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- 莱氏野村菌产几丁质酶条件及酶学性质研究被引量：7
- 2007年
- 对莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)菌株CQ031021产几丁质酶条件及酶学性质进行了研究。结果表明:该菌株最适产酶碳源为2.0%(W/V)葡萄糖,氮源为1.2%(W/V)复合氮源(蛋白胨、牛肉膏按1∶1的比例),接种量为孢悬液2mL(1×107个/mL),培养温度28℃,培养液初始pH6.0,培养时间6d;一定浓度的吐温-80对几丁质酶活性有促进作用,而SDS有抑制作用;粗酶液最适反应温度50℃,最适pH6.0,在40℃以下及pH5.5～6.5范围内酶活力较稳定。
- 翟逸涂增王金芳万永继
- 关键词：莱氏野村菌几丁质酶酶学性质产酶条件
- 环境因子对莱氏野村菌cq菌株生长发育的影响被引量：17
- 2006年
- 研究环境因子对莱氏野村菌（Nomuraearileyi）cq菌株的生长、产孢与孢子萌发的影响。温度对菌株的生长、产孢和孢子萌发有相同的效应，低温23℃是最适温度，32℃以上明显抑制谊菌的生长、产孢和孢子萌发；最适宜生长、产孢和孢子萌发的pH范围为6．2～7．0；24h光照有利于产孢，而24h黑暗有利于菌落生长；紫外线（40w，45cm）照射2min，培养96h谊菌株孢子发芽率较对照降低16％，照射8min孢子发芽率仅为7％。
- 涂增翟逸万永继
- 关键词：莱氏野村菌环境因子产孢孢子萌发
- 莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因的克隆与表达分析被引量：8
- 2010年
- 【目的】为揭示昆虫病原真菌分泌的几丁质酶对宿主感染致病时的作用,对莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因进行了克隆与表达,并检测了表达产物的活性。【方法】采用CTAB法提取菌体DNA,设计特异性引物,多次PCR扩增克隆莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因全序列,并克隆基因的ORF片段chit1,与载体pPIC9K相连接,构建表达载体pPIC9K-Chit1,转入毕赤酵母感受态细胞中,然后通过1.5mg/L浓度的G418筛选及PCR验证,将阳性转化子进行诱导培养,对发酵液分别进行酶活性测定试验、几丁质酶透明圈验证试验和SDS-PAGE电泳检测。【结果】莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因全长序列为2756bp(NCBI登录号:EU795711),PCR扩增得到开放阅读框ORF片段chit1为1827bp,其中包含3个内含子,5′端非编码区长76bp,3′端非编码区240bp,编码424个氨基酸的几丁质酶前体,理论信号肽剪切位点在Gly(20)与Leu(21)之间;毕赤酵母重组细胞发酵液中几丁质酶活性随着发酵时间的延长而增加,72h达到最大值482.5U/100μL,透明圈活性验证试验显示,在含1%的几丁质平板上可出现明显的透明圈,表达产物SDS-PAGE电泳检测其分子量为41.0kDa。【结论】本研究克隆到莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因,其ORF成功重组到毕赤酵母中并表达出有活性的几丁质酶。基因表达产物的利用对进一步研究病原真菌染病昆虫的机制等具有重要意义。
- 王金芳刘光英翟逸万永继
- 关键词：莱氏野村菌几丁质酶克隆
