国家高技术研究发展计划(2002AA214111)
- 作品数：14 被引量：37H指数：5
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院解放军第307医院第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MUC1模拟表位肽对表达人MUC1 T739小鼠膀胱癌细胞的细胞毒作用的实验研究被引量：6
- 2012年
- 目的观察MUC1模拟表位肽对表达人MUC1T739小鼠膀胱癌细胞的细胞毒作用。方法培养、诱导T739小鼠骨髓成熟树突状细胞,流式细胞仪鉴定纯度,用负载模拟表位肽成熟树突状细胞免疫T739小鼠,酶联免疫斑点(ELISPOT)检测活化的模拟表位特异性T细胞,用非放射性乳酸脱氢酶法检测不同效:靶比例时活化的模拟表位特异性T细胞体外细胞毒效应。结果培养出成熟树突状细胞,纯度为78.8%,肽免疫的T739小鼠特异性分泌IFN-γ的T细胞频数是106.5±12.8,而PBS和DC+PBS组频数均少于10,数量明显少于肽+DC组。当效靶比为100:1时肽免疫的T739小鼠产生的活化T淋巴细胞具有显著细胞毒功能,与PBS和DC+PBS免疫小鼠相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论负载MUC1模拟表位肽的树突状细胞免疫小鼠,可诱导产生特异性细胞毒性T细胞。
- 崔志刚刘刚裘辉潘进勇路浩军张立新
- 关键词：CA-15-3抗原模拟抗原表位
- MUC1模拟表位肽治疗表达人MUC1 T739荷瘤小鼠的实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的观察MUC1的模拟表位肽对表达人MUC1 T739荷瘤小鼠的治疗作用。方法建立稳定表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,培养T739小鼠成熟树突状细胞,荷瘤小鼠随机分为4组,用负载模拟表位肽成熟DC免疫表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,第1组皮下注射等渗盐水,第2组注射空DC,第3组注射负载1号肽的DC,第4组注射负载2号肽的DC,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积,称瘤重,并观察小鼠存活期。结果两组DC+肽免疫的小鼠瘤体积减小明显,与1、2组相比差异非常显著(P<0.01)。平均瘤重1、2组与3、4组相比差异非常显著(P<0.01)。第1～4组荷瘤鼠的生存期分别为(34.6±3.507)d,(35.2±3.564)d,(58.4±5.595)d,(59±6.819)d,3、4两组荷瘤小鼠生存期较1、2组明显延长,差异有显著性意义(P<0.01)。结论 MUC1模拟表位肽能明显抑制表达人MUC1 T739荷瘤小鼠肿瘤生长,显著延长T739荷瘤小鼠生存时间。
- 崔志刚刘刚潘进勇路浩军张立新
- 关键词：MUC1粘蛋白模拟抗原表位肿瘤疫苗膀胱癌
- 人泌尿系上皮肿瘤疫苗的初步研究
- 2007年
- 目的通过筛选噬菌体随机12肽库获得MUC1糖链抗原模拟表位。方法利用纯化获得的M a695抗体筛选噬菌体随机12肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了14个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:KHYDPFHHRMPQ,QADTARSVALAG,VPSKPDLHVRSI,MTPIHYWNHNRV。鉴定结果表明4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列KHYDPFH-HRMPQ,QADTARSVALAG,VPSKPDLHVRSI,及MTPIHYWNHNRV模拟了MUC1抗原表位。
- 王祥卫张立新张远宁叶钢张艮甫
- 关键词：模拟表位
- MUC1黏蛋白模拟表位的筛选和原核表达被引量：2
- 2006年
- 目的从噬菌体随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位,构建MUC1模拟表位的原核表达载体。方法通过生物淘洗、基因测序和氨基酸序列比较,筛选出模拟表位,构建重组表达质粒PET-31b(+),用IPTG诱导表达,亲和层析纯化,W estern b lot鉴定其抗原性。结果筛选到的模拟表位与MUC1单克隆抗体的亲和力较强。成功构建了重组表达质粒,重组蛋白在BL21(DE3)p lysS中得到诱导表达,纯化的目的蛋白在SDS-PAGE上呈现特异的单一条带,W estern印迹也检测到目的蛋白特异条带。结论筛选到了MUC1的模拟表位,成功表达和纯化了MUC1模拟表位蛋白,为研究其在肿瘤疫苗方面的应用奠定基础。
- 崔志刚宋波张立新路浩军李春海
- 关键词：MUC1噬菌体表面展示模拟表位克隆
- MUC1抗原的表位预测及模拟位的筛选被引量：6
- 2005年
- 目的预测MUC1抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟位。方法联合运用多种方法对MUC1的二级结构和表面特性,如理化性质、亲水性、可塑性、溶剂可及性及免疫原性等方面进行分析,预测MUC1的抗原表位。利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列,竞争性抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆。结果MUC1存在有多个潜在的抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位区域:110,2454,6577,8491,108134,140156,159174,179196,199210,220233,237265,270299,316337,351362,369396,411420,445502。经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论应用多参数预测MUC1抗原的B细胞表位,为进一步研究MUC1结构和功能、选择表达新型MUC1分子奠定了基础。所得序列TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。
- 杨清浩王祥卫金燕张立新
- 关键词：B细胞表位模拟表位抗体
- 针对MUC1黏蛋白DC疫苗的研究进展
- 2006年
- 树突状细胞(DC)作为抗原递呈细胞在激活肿瘤特异性免疫中发挥重要作用,DC疫苗为肿瘤免疫治疗提供了一种有效手段。MUC1是一种高分子量糖蛋白,属于粘蛋白家族成员,在多种上皮性肿瘤中异常表达,是肿瘤免疫治疗的理想靶抗原。本文综述了MUC1的生物学特征、DC对MUC1的递呈和以MUC1为靶点DC疫苗的抗肿瘤效果。
- 崔志刚张立新宋波
- 关键词：树突状细胞MUC1肿瘤疫苗
- 噬菌体展示肽表位的免疫原性研究被引量：2
- 2005年
- 目的研究模拟表位TAPDLRP的噬菌体展示肽的免疫原性。方法用我们筛选获得的展示MUC1抗原模拟表位的噬菌体阳性克隆免疫小鼠。以最大OD450值之纯化血清做为一抗行蛋白印迹分析。检测小鼠脾脏淋巴细胞增殖率。结果3次免疫小鼠后,血清(1∶1 000)中能检测到较强的MUC1抗体阳性。纯化血清可识别MUC1蛋白。噬菌体展示肽表位可在无佐剂存在情况下,大大促进小鼠的脾淋巴细胞的增殖。结论噬菌体是一种较好的生物载体。该模拟抗原免疫小鼠后能激发体液及细胞免疫应答,具有良好的免疫原性。
- 杨清浩王祥卫金燕张立新
- 关键词：MUC1蛋白模拟表位
- 噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位被引量：5
- 2005年
- 目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。
- 杨清浩王祥卫金燕张立新
- 关键词：模拟表位抗体
- 新型MUC1黏蛋白模拟表位原核表达、纯化和鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的对新筛选的MUC1模拟表位进行克隆表达、纯化和鉴定。方法从噬菌体随机12肽库中筛选出新的MUC1的模拟表位,目的基因片段克隆入表达质粒PET-31b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达,亲和层析纯化,Western blot鉴定。结果成功构建了重组表达质粒,诱导表达出新的MUC1模拟表位重组蛋白,纯化的目的蛋白在SDS-PAGE上呈现特异的单一条带,Western印迹也检测到目的蛋白特异条带。结论成功获得了新的MUC1模拟表位表达产物,为其在肿瘤疫苗方面的应用研究创造条件。
- 崔志刚张立新岳明路浩军刘志清李春海
- 关键词：MUC1模拟表位克隆
- MUC1黏蛋白模拟表位的筛选和鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的从噬菌体表面展示的随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位。方法通过生物淘洗,获得阳性噬菌体克隆,通过基因测序,推导氨基酸序列,同MUC1核心序列比较,选出2个模拟表位,进行抗原表位预测和竞争抑制实验。结果筛选到的两个模拟表位与MUC1单克隆抗体的亲和力均较强,能特异性抑制MUC1的抗原抗体结合,且包含有与某些MHCⅠ类分子较好结合的位点。结论从噬菌体12肽库中筛选出两个MUC1的模拟表位可以作为靶向MUC1肿瘤疫苗的候选肽。
- 崔志刚宋波张立新路浩军李春海
- 关键词：MUC1噬菌体表面展示模拟表位
