国家自然科学基金(39700147)
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
- 相关作者：惠宏襄严瑞兰金明辛晓燕王健更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响被引量：4
- 2001年
- 目的 :构建人反义VEGF基因真核表达载体 ,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法 :RT PCR法获得人VEGF基因 ,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中 ,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO 8910 ,G418筛选获得阳性克隆 ,RNA斑点杂交鉴定HO 8910细胞中VEGF表达。Westernblot及间接免疫荧光法检测转染前后HO 8910细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果 :RT PCR法得到VEGF基因 ,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO 8910细胞中VEGF表达 ,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱 ;细胞周期中 ,G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,细胞增殖能力降低 ;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀 ,核染色质边集 ,凝集成块 ,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论 :成功构建了反义VEGF基因真核表达载体 ,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖 。
- 严瑞兰金明钱新华惠宏襄辛晓燕王建王德堂
- 关键词：血管内皮生长因子真核表达载体卵巢癌细胞增殖VEGF基因
- 人VEGF基因的克隆及卵巢癌中VEGF基因重排的检测被引量：2
- 2000年
- 目的 探讨 VEGF高表达的卵巢癌中 VEGF基因结构有无异常 .方法 用 RT- PCR方法自胎盘中克隆 VEGFc DNA以作为杂交探针 ;收集临床卵巢癌手术切除标本 ,以正常卵巢组织为对照 ,从中提取基因组 DNA并进行 Southern印迹杂交 .结果 序列分析表明所获得基因正确 ,Southernblot分析 10 / 19呈现出大于 2 3 kb片段和 4.3 kb片段的异常片段 ,而不同于正常对照组织的大于 30 kb,6 .5 kb和 2 .5 kb.
- 金明赵君庸严瑞兰惠宏襄王剑波王成济杨安钢
- 关键词：卵巢癌VEGF基因克隆基因重排
- VEGF特异性核酶对Hela细胞VEGF表达的调节被引量：1
- 2002年
- 目的 构建VEGF特异性发夹状核酶基因真核表达载体 ,观察其对Hela细胞VEGF表达的调节。方法 将核酶基因克隆入 pcDNA 3中 ,构建了抗VEGF发夹状核酶真核表达载体 pcDNA 3 -RZ ,并进行了核酶的体外切割活性检测。将该真核表达载体转染人宫颈癌Hela细胞 ,采用RNA斑点杂交、流式细胞仪免疫荧光及免疫细胞化学方法 ,检测Hela细胞中VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达水平。结果 所构建的重组表达载体 pcDNA 3 -RZ正确 ,体外切割检测该核酶具有较高的切割活性。转染了 pcDNA 3 -RZ的Hela细胞中VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达水平明显下降。 结论 成功地构建了抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体 。
- 严瑞兰张积仁辛晓燕金明惠宏襄
- 关键词：真核表达载体HELA细胞血管形成
- 抗血管内皮生长因子发卡状核酶基因抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖被引量：3
- 2002年
- 目的 观察抗VEGF发卡状核酶基因对卵巢癌细胞增殖的影响。方法 采用脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗VEGF发卡状核酶基因真核表达载体转染人卵巢癌细胞 ,通过MTT、细胞贴壁克隆形成试验、软琼脂克隆形成试验及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。结果 转染后的SKOV3 RZ细胞生长减慢 ,细胞贴壁克隆形成及软琼脂克隆形成率明显降低 (P <0 .0 0 1)。G1期细胞显著增多 (P <0 .0 1) ,S期细胞显著减少 (P <0 .0 1)。结论 抗VEGF发卡状核酶基因可显著抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖 。
- 严瑞兰钱新华辛晓燕金明惠宏襄王健王德堂
- 关键词：抗血管内皮生长因子卵巢癌细胞增殖
- 抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因抑制卵巢癌移植瘤生长的实验研究被引量：11
- 2002年
- 目的 采用抗血管内皮生长因子 (VEGF)发夹状核酶基因 ,阻断卵巢癌中VEGF的自分泌和 (或 )旁分泌通路 ,以检测抗VEGF发夹状核酶基因对卵巢癌细胞VEGF表达及其肿瘤生长的影响。方法 采用脂质体介导的方法 ,将自行设计和构建的抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染人卵巢癌细胞SKOV3,采用氨基糖甙庆大霉素 (G418)筛选获得阳性克隆 ;RNA斑点杂交检测核酶基因在卵巢癌细胞中的表达 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测转染前后卵巢癌细胞中VEGF的表达 ;透射电子显微镜观察卵巢癌细胞超微结构改变 ;观察裸鼠皮下成瘤实验检测转染前后细胞的致瘤能力的变化。结果 转染核酶基因后的卵巢癌细胞VEGFmRNA表达明显降低 ;透射电子显微镜观察出现凋亡细胞 ;裸鼠致瘤能力减弱 ,肿瘤组织中VEGF表达及血管形成减少。结论 抗VEGF发夹状核酶基因可显著抑制卵巢癌细胞VEGF表达 ,通过减少血管形成抑制肿瘤生长 ,为进一步开展肿瘤血管靶向基因治疗 。
- 严瑞兰辛晓燕金明惠宏襄王健王德堂
- 关键词：内皮生长因子淋巴因子实验性肿瘤
- Cleavage of hairpin ribozyme to target a transcribed VEGF RNA in vitro被引量：1
- 2001年
- Objective:To constructan expressionvectorbearinghairpinribozyme(Rz)geneagainstvascularendo-thelialgrowthfactor(VEGF)andto assaythecleavageactivityof theribozymein vitro.Methods :Anti-VEGFhair-pinRz genewassynthesizedwhileVEGFgenewasclonedfromhumanplacenta,andtheywerebothinsertedinto theeukaryoticexpressionvectorpcDNA3.ThenpcDNA3-RzandthepcDNA-VEGFweretranscriptedin vitro and cleavageactivityof theRz wasmeasured.Results:Thefragmentof theRz genewasconfirmedby thedigestionof pcDNA3-RzwithEcoR I andBam HI.Theexpressionproductof theRzgenehashighercleavageactivity.Conclusion:WehavesuccessfullyconstructedpcDNA3-Rzexpressionvectorandlaida basisforfurtherstudyof gene therapy.
- 严瑞兰
- 关键词：基因治疗
- 抗VEGF发夹状核酶基因抑制VEGF表达及卵巢癌细胞增殖的实验研究被引量：12
- 2002年
- 背景与目的:研究表明血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在与上皮性卵巢癌有关的血管形成过程中可能发挥着重要作用。目前,核酶策略已成为一种基因治疗的策略,用于阻断肿瘤形成或肿瘤的生长与转移。VEGF在卵巢肿瘤形成中的作用尚不十分清楚。我们试图采用抗VEGF发夹状核酶基因阻断卵巢癌中VEGF的自分泌和/或旁分泌通路,以检测其对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:采用脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用G418筛选获得阳性克隆;RNA斑点杂交检测核酶基因在卵巢癌细胞中的表达;免疫组化、间接免疫荧光染色及流式细胞仪结合免疫荧光检测转染前后卵巢癌细胞中VEGF表达;通过MTT、细胞贴壁克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。结果:与SKOV3细胞相比,转染后的SKOV3-RZ细胞VEGF表达明显降低(P<0.01);细胞生长减慢,细胞贴壁克隆形成及软琼脂克隆形成率明显降低犤(12.7±1.4)%和(9.4±2.0)%比(30.1±1.9)%和(24.8±1.5)%,P<0.001犦;G1期细胞显著增多(77.6%比57.9%,P<0.01),S期细胞显著减少(17.0%比29.9%,P<0.01)。结论:抗VEGF发夹状核酶基因可显著抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖;
- 严瑞兰钱新华辛晓燕金明惠宏襄王德堂王健
- 关键词：卵巢肿瘤细胞增殖基因治疗
- 抗人VEGF发夹状核酶基因的合成、克隆、表达及活性鉴定被引量：2
- 2000年
- 目的 构建抗人血管内皮生长因子 (vascularendothelial growth factor,VEGF)发夹状核酶基因 ,并在体外检测其切割活性 .方法 化学法合成的人 VEGF核酶基因定向克隆入真核表达载体 pc DNA3中 ,并在体外同时转录pc DNA3- RZ,检测核酶的切割功能 .结果 经 Eco RI和Bam H 酶切鉴定证实核酶基因片段大小正确 ,所产生的核酶具有切割活性 .结论 成功地构建了抗人 VEGF发夹状核酶基因真核表达载体 ,为下一步进行基因治疗打下了基础 .
- 金明严瑞兰赵君庸惠宏襄王成济杨安钢
- 关键词：基因治疗血管内皮生长因子核酶
- 抗人血管内皮生长因子发夹状核酶基因抑制卵巢癌细胞血管内皮生长因子表达被引量：4
- 2001年
- 目的 :研究抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因对人卵巢癌细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达的抑制作用 ,探讨卵巢癌基因治疗的新途径。方法 :人卵巢癌细胞SKOV3高表达VEGF ,将抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因真核表达载体 (pcDNA3 RZ)转染人卵巢癌细胞SKOV3,经G4 18筛选获得阳性细胞克隆 ,RNA斑点杂交检测核酶基因是否在细胞中表达。采用免疫组化、间接免疫荧光、激光共聚焦显微镜荧光定量法及流式细胞仪结合间接免疫荧光检测转染前后细胞VEGF的表达情况。结果 :转染pcDNA3 RZ组细胞VEGF表达明显降低。结论 :抗人VEGF发夹状核酶基因真核表达载体可有效抑制卵巢癌细胞SKOV3中VEGF的表达 ,有望成为治疗卵巢癌的一种新方法。
- 严瑞兰钱新华辛晓燕金明惠宏襄王德堂王健
- 关键词：血管内皮生长因子卵巢肿瘤
- 上皮性卵巢癌VEGF受体KDR的表达及意义被引量：4
- 1999年
- 严瑞兰辛晓燕王剑波王健惠宏襄
- 关键词：KDR卵巢肿瘤VEGF卵巢上皮癌受体
