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国家自然科学基金(30170890): 作品数：12 被引量：66H指数：6; 相关作者：王继德白杨周殿元张亚历张兆山更多>>; 相关机构：中国人民解放军第一军医大学军事医学科学院南方医科大学南方医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

幽门螺杆菌4种黏附素基因保守区的克隆、序列及其生物信息学分析被引量：16: 2002年; 目的克隆幽门螺杆菌(Helicobacterpylori, Hp)4种黏附素(BabA、AlpA、AlpB和HopZ)的保守区,并对其进行序列及生物信息学分析,为研究Hp黏附素的分子机制和免疫原性提供实验基础。方法利用ANTHEPROT V4.3c 软件分析已证实的Hp4种黏附素蛋白序列,发现共同保守区(命名为CB),推导出其DNA序列,设计CB特异引物,将PCR产物定向插入pET-22b(+)载体,构建保守区的重组克隆。DNA自动分析仪进行序列测定,生物信息学软件对其生物学特性进行分析。结果构建了4种黏附素共同保守区的重组质粒,测序显示CB基因长588 bp,该基因编码195个氨基酸,与4种黏附素保守区的同源性均达50%以上,ANTHEPROT V4.3c软件预测其蛋白质相对分子质量约为22 500,并显示出了良好的抗原性和疏水性。BLAST分析了836 767个序列,与其同源性达40%的均为Hp序列。结论Hp4种黏附素存在同源性接近的保守区,表明其黏附作用可能有相似的分子基础,生物信息学分析表明其具有优良的免疫原性和严格的种属特异性。; 白杨张亚历王继德林焕健张兆山周殿元; 关键词：幽门螺杆菌黏附素克隆分子

幽门螺杆菌过氧化氢酶基因的克隆、高效表达及活性评价被引量：18: 2002年; 目的　构建高效表达幽门螺杆菌 (Hp)过氧化氢酶重组蛋白的候选菌株并测定其活性。方法　用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增过氧化氢酶基因 ,将其定向插入表达载体 pET 2 2b(+)中 ,并在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ,进一步利用贝尔斯西策尔斯法测定其活性。结果　DNA序列分析表明 ,所克隆的过氧化氢酶基因序列与基因库公布的一致。在 37°C诱导表达 3h后 ,过氧化氢酶重组蛋白表达量占菌体总蛋白的 2 4 .4 % ,并显示了良好的活性。结论　本研究获得了表达高活性Hp过氧化氢酶的克隆 ,为深入研究其相关功能奠定了良好基础。; 白杨张亚历王继德施里张兆山周殿元; 关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶基因克隆活性评价幽门螺杆菌感染

幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的克隆、表达及免疫原性研究被引量：17: 2002年; 目的构建表达幽门螺杆菌热休克蛋白60(Hsp60)的候选菌株并研究其免疫原性。方法利用PCR技术扩增Hsp60基因,将其定向插入pET-22b(+)载体,在BL21(DE3)大肠杆菌中表达并通过动物实验研究其免疫原性。结果克隆的Hsp60基因序列与Genbank公布的一致,Hsp60重组蛋白表达量占菌体总蛋白的27.2%,并可被幽门螺杆菌感染者血清所识别,用其免疫小鼠可产生抗该重组蛋白的抗体。结论Hsp60有可能成为一种有效的疫苗用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。; 白杨张亚历王继德杨云生陈烨张兆山周殿元; 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60 免疫原性

幽门螺杆菌热休克蛋白60脂质体疫苗的制备及其免疫预防作用被引量：7: 2005年; 目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白60(Hsp60)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用。方法将PET-22(+)/Hsp60在BL21(DE3)大肠杆菌表达,Ni-NTA琼脂糖树脂纯化Hsp60重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Hsp60重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。75只BALB/C小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Hsp60重组蛋白+霍乱霉素(CT)、脂质体包裹Hsp60重组蛋白、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活Hp攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分。结果可溶性表达产物占全菌总蛋白的27%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为(0.7±0.4)μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Hsp60重组蛋白+CT组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少,炎症反应减轻。结论口服脂质体能分地代替免疫佐剂,作为Hp疫苗的免疫佐剂,将具有广泛的应用前景。; 黄文白杨王继德武金宝李国锋张卫民周殿元; 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60 疫苗脂质体

胃型上皮Fas表达的调节:幽门螺杆菌致病的自身免疫机制之一被引量：7: 2003年; 目的探讨Fas介导的幽门螺杆菌(Hp)致胃上皮损伤机制。方法从Hp感染和非感染胃粘膜新鲜分离胃上皮细胞,流式细胞仪测定新分离及体外培养胃上皮细胞系中Fas的表达;调查Hp活菌及Hp感染时胃粘膜主要的Th1细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对胃上皮Fas表达的调节作用,同时应用ELISA法探讨Fas介导的胃上皮细胞凋亡作用。结果Hp感染胃粘膜上皮Fas阳性数和表达量均高于非感染者(P<0.05),Hp、IFN-γ及TNF-α单独或合用均能提高胃上皮Fas的表达,而胃上皮表面的Fas分子能够介导其IgM单抗引起的致细胞凋亡作用,IFN-γ可增强这种作用。结论直接或间接通过Th1细胞因子增加Fas表达进而损伤胃上皮细胞,是Hp致胃上皮损伤的自身免疫机制之一。; 王继德白杨林焕建张亚历黄文周殿元; 关键词：FAS 幽门螺杆菌自身免疫机制

重组幽门螺杆菌过氧化氢酶脂质体疫苗免疫预防研究被引量：5: 2005年; 目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(Kat)口服疫苗的方法,并用Helicobacterpylori感染的小鼠模型评价其在预防H·pylori感染中的作用。方法将PET_22(+)/Kat在BL21(DE3)大肠杆菌表达,表达Kat的包涵体经洗涤、变性、复性,采用QSepharoseFastFlow阴离子交换层析和SephacrylS_200凝胶过滤层析分离纯化Kat重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Kat重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。BALB/c小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Kat重组蛋白+霍乱毒素(CT)、脂质体包裹Kat重组蛋白、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活H·pylori攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、H·pylori的定植半定量,取脾组织行淋巴细胞增殖试验。结果以包涵体为主的表达产物占全菌总蛋白的24.4%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为0.7±0.4μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Kat重组蛋白+CT组、脂质体包裹Kat重组蛋白组、脂质体包裹Kat重组蛋白+CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃黏膜H·pylori感染数目明显减少,三个疫苗组淋巴细胞增殖试验均为阳性。结论口服脂质体能部分代替免疫佐剂的作用,将其作为H·pylori疫苗的免疫佐剂,具有广泛的应用前景。; 黄文潘雪李兆申白杨王继德周殿元; 关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶疫苗脂质体

cag致病岛在幽门螺杆菌致病与免疫防治中的作用被引量：2: 2003年; 林焕建王继德张亚历白杨周殿元; 关键词：CAG致病岛幽门螺杆菌免疫防治组织学

幽门螺杆菌黏附素基因babA_2的克隆表达及定位被引量：1: 2004年; 目的 :克隆并表达H .pylori黏附素babA2 基因 .方法 :提取H .pylori染色体基因 ,用PCR方法扩增babA2 基因 ,将其克隆至表达载体pET 2 2b(+) ,并在BL2 1 (DE3)大肠杆菌中表达及定位分析 .结果 :分离得到了 2 .2kb的babA2基因片段 ,在 37℃诱导表达 3h后 ,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的 34.8% ,其中分泌表达占周质总蛋白的 2 2 .7% ,可溶性表达占上清的 1 5 .0 % ,包涵体占沉淀的 86 .7% .结论 :H .py loribabA2 基因的克隆与表达为H .; 白杨王继德陈烨林焕建张兆山张亚历; 关键词：螺杆菌克隆分子基因表达

幽门螺杆菌过氧化氢酶脂质体疫苗免疫预防研究: 2005年; 目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(Kat)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用。方法将PET-22(+)/Kat在BL21(DE3)大肠杆菌表达,表达Kat的包涵体经洗涤、变性、复性,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析分离纯化Kat重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Kat重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。BALB/c小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Kat重组蛋白+CT、脂质体包裹Kat重组蛋白、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活Hp攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分。结果以包涵体为主的表达产物占全菌总蛋白的24.4%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为0.7±0.4μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Kat重组蛋白+CT组、脂质体包裹Kat重组蛋白组、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少,炎症反应减轻。结论口服脂质体部能分代替免疫佐剂的作用,将其作为Hp疫苗的免疫佐剂,具有广泛的应用前景。; 黄文潘雪李兆申白杨王继德周殿元; 关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶疫苗脂质体

幽门螺杆菌粘附素基因alpA的克隆与高效表达被引量：6: 2002年; 目的　克隆并表达幽门螺杆菌粘附素 Alp A基因 .方法　提取幽门螺杆菌染色体基因 ,用 PCR方法扩增 alp A基因 ,将其克隆至表达载体 p ET- 2 2 b (+) ,转化大肠杆菌BL 2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 .结果　分离得到了 1 .5 kb的alp A基因片段 ,并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达 ,在 37℃诱导表达 3h后 ,表达产物占细菌总蛋白的 31 .9% .表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在 ,其中主要是包涵体的形式 ,目的蛋白占不溶性蛋白的 64.8% .结论　幽门螺杆菌 alp A基因的克隆与表达为; 白杨张亚历王继德杨云生张兆山周殿元; 关键词：幽门螺杆菌粘附素分子克隆基因表达

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