国家自然科学基金(30300167)
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
- 相关作者：刘煜陈家伟朱虎曾丽玲杨金奎更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院香港中文大学首都医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 葡萄糖及细胞因子对胰岛素瘤相关蛋白-2表达水平的影响
- 2005年
- 目的探讨葡萄糖、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ对胰岛细胞自身抗原胰岛素瘤相关蛋白(IA)-2表达水平及胰岛素分泌水平的影响。方法以不同浓度的葡萄糖(3、7、11、30mmol/L)、10ng/mlIFN-γ及100ng/mlTNF-α分别刺激胰岛细胞系RIN5F24h和48h,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组RIN5F细胞中IA-2的mRNA表达水平,并用放射免疫法检测上清中胰岛素的浓度。结果RT-PCR结果显示以不同浓度葡萄糖(3、7、11、30mmol/L)分别刺激RIN5F细胞系后IA-2mRNA水平呈浓度依赖性和时间依赖性增加;TNF-α可抑制IA-2mRNA的水平,并且作用48h后IA-2表达水平显著降低(P<0.05);IFN-γ作用24h及48h均可显著抑制IA-2的表达(P<0.05)。TNF-α或IFN-γ刺激RIN5F细胞系后,上清中胰岛素水平均较基础值降低,并且作用48h后差异有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄糖可使IA-2的mRNA水平呈剂量依赖性和时间依赖性增加,TNF-α、IFN-γ可抑制IA-2的mRNA表达和胰岛素分泌浓度。
- 刘煜陈家伟刘超曾丽玲Alice Ho朱虎陈小章
- 关键词：葡萄糖细胞因子类分泌水平细胞因子葡萄糖干扰素(IFN)-Γ反转录聚合酶链反应
- 胰岛素瘤相关蛋白-2高表达对胰岛细胞增殖的影响被引量：1
- 2004年
- 目的:探讨1型糖尿病自身抗原胰岛素瘤相关蛋白-2(IA鄄2)高表达对胰岛细胞系RIN5F细胞增殖、生长周期和细胞凋亡的影响。方法:利用分子克隆技术构建IA鄄2真核表达载体,转染RIN5F细胞后筛选稳定高表达IA鄄2的细胞系,采用3鄄(4,5鄄二甲基)鄄5鄄(3鄄羧甲基苯环)鄄2鄄(4鄄硫基苯)鄄2H鄄四唑盐复合物(MTS)检测法确定细胞增殖速率,运用流式细胞术检测细胞生长周期和细胞凋亡水平。结果:IA鄄2高表达细胞增殖速率显著低于载体对照组细胞(P<0.05)。IA鄄2高表达细胞的细胞凋亡数显著高于载体对照组细胞(P<0.01)。IA鄄2高表达细胞中位于S期的细胞比率显著增加,而G2/M期的细胞比率减少(P<0.05)。结论:IA鄄2在胰岛细胞内高表达可抑制胰岛细胞的增殖,促进细胞凋亡,在G2鄄M期细胞生长阻滞。
- 刘煜Alice H朱虎曾丽玲陈家伟陈小章
- 关键词：凋亡
- 趋化因子受体CCR5、CCR3在1型糖尿病患者中的表达被引量：5
- 2004年
- 目的 研究Th1和Th2 细胞表面特征性的趋化因子受体CCR5、CCR3在 1型糖尿病发病机制中的作用。方法 对 15例新诊断的 1型糖尿病患者、10例 2型糖尿病患者以及 10例非糖尿病患者分离外周血单个核细胞 (PBMC)在体外培养 ,用流式细胞仪检测CD+4CCR5 +及CD+4CCR3 +淋巴细胞 ,并用酶联免疫吸附技术检测细胞培养上清中细胞因子IL 4、IFN γ的水平。结果 1型糖尿病患者外周血中CD+4CCR5 +淋巴细胞数显著高于 2型糖尿病患者和对照组 ,CD+4CCR3 +显著低于其它两组 (均P <0 .0 5 )。 1型糖尿病患者和 2型糖尿病患者PBMC细胞上清液中的IFN γ水平高于对照组 (均P <0 .0 5 ) ,1型糖尿病患者IL 4水平低于其它两组 (P <0 .0 1)。结论 检测PBMC的CCR5、CCR3表达可以作为反映人类 1型糖尿病免疫活动的标志 ,从而为
- 刘煜陈家伟杨金奎刘超刘翠萍张梅
- 关键词：1型糖尿病CCR5PBMCCD4^+趋化因子受体
- 胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区与IgGFc段融合基因疫苗的构建及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:构建及鉴定胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgGFc嵌合蛋白的真核表达载体pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc。方法:实验于2004-09/2005-07在南京医科大学病原生物学系完成。①采用反转录-聚合酶链反应方法从ICR小鼠的脑组织和脾脏中分别扩增胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgGFc段(mIgGFc),并引入相应的酶切位点(XhoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoRI)。②分别将扩增后的片段克隆入pUCm-T质粒,通过XhoⅠ/BamHⅠ双酶切和连接后,获得pUCm-T/mIA-2i-mIgGFc重组质粒。③经过XhoⅠ/EcoRI双酶切后,将融合基因mIA-2i-mIgGFc克隆入真核表达载体pEGFP-N2。通过酶切、聚合酶链反应及插入片段序列测定对重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc进行鉴定。结果:①从ICR鼠的脑组织和脾脏中反转录-聚合酶链反应获得胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区和IgGFc段。②通过基因工程操作,获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i和pUCm-T/mIgGFc,并经酶切鉴定克隆成功。③获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i-mIgGFc,经聚合酶链反应和双位点酶切鉴定重组成功。④获得重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc和pEGFP-N2/mIA-2i,经聚合酶链反应、酶切及测序鉴定证实特异性片断插入真核表达载体成功。结论:pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc真核表达载体的构建,为利用胰岛细胞瘤相关蛋白2基因疫苗预防非肥胖性糖尿病小鼠发生自身免疫性糖尿病的研究奠定了基础。
- 季旻珺刘煜胡姝颖张媛媛朱翔吴海玮
- 关键词：基因反转录聚合酶链反应
- 1型糖尿病自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2真核表达系统的构建和鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建能高效表达自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2(IA2)的真核表达载体作为预防发生1型糖尿病(T1DM)的基因疫苗。方法利用基因工程技术构建重组pEGFP/IA2真核表达系统,并且转染、筛选稳定高表达IA2的RIN5F胰岛细胞株,用免疫印迹法并在荧光显微镜下鉴定其表达,利用共培养体系检测IA2刺激淋巴细胞增殖率。结果双酶切结果表明成功构建了重组pEGFP/IA2真核表达系统,免疫印迹法证实可在RIN5F细胞内高表达IA2。并且该表达的IA2可显著促进NOD小鼠淋巴细胞增殖反应(P<0.05)。结论成功构建的IA2真核表达系统对于T1DM基因疫苗预防策略和对于IA2生理功能的研究都具有重要的意义。
- 刘煜 朱虎曾丽玲陈家伟 杨金奎钟耀华王若宁陈小章
- 关键词：1型糖尿病自身抗原真核表达系统IA-2
