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白细胞介素4反义基因腺相关病毒载体质粒的构建及鉴定被引量：1: 2006年; 目的构建携带大鼠反义白细胞介素4(IL-4)基因并含有腺相关病毒(AAV)末端反向重复序列(ITR)结构的重组质粒载体pasIL-4。方法利用基因重组技术将大鼠IL-4 cDNA反向克隆到已酶切去除绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体phMGFP中,构建重组中间质粒载体。通过PCR技术扩增获取重组中间质粒载体上的目的片段CMVp-asIL4-SV40E,将此目的片段定向插入已酶切处理的psub201中,构建出重组质粒pasIL-4。进一步通过阳离子脂质体介导,将pasIL-4转染哮喘大鼠CD4+T细胞,RT-PCR法和ELISA法分别检测细胞中IL-4 mRNA和细胞培养上清液IL-4蛋白的变化。结果pasIL-4经限制性酶切及部分序列测序分析证实IL-4反向插入正确。pasIL-4重组质粒转染的CD4+T细胞IL-4 mRNA水平和细胞培养上清液中IL-4水平较未转染组明显下降。结论pasIL-4重组质粒载体构建成功,为今后利用其进行哮喘基因治疗的研究奠定基础。; 曹勇熊维宁徐永健张珍祥高宝安陆俊羽; 关键词：哮喘白细胞介素4 腺相关病毒质粒

反义IL-5重组腺相关病毒真核表达载体质粒pasIL-5/rAAV的构建和转染被引量：2: 2005年; 高宝安熊维宁徐永健张珍祥曹勇唐以军叶涛钟声杜春玲; 关键词：CD4^+T淋巴细胞腺相关病毒

Recombinant adeno-associated virus-mediated inhibiting of interleukin-4 expression in rat model of asthma被引量：1: 2006年; Asthma is a chronic disease characterized by ,reversible airway obstruction, airway hyperresponsiveness, and inflammation of airways, Th2 cells, one sort of CD4＋ T lymphocytes, are currently considered to play an important role in the chronic airway inflammation of asthma, Meanwhile, a number of laboratories have clearly established the importance of the Th2-dedved cytokine interleukin-4 （IL-4） in mediating the airway inflammatory response, Anti-IL-4 therapy might be beneficial in treatment of chronic asthma.; CAO Yong XIONG Wei-ning XU Yong-jian ZHANG Zhen-xiang GAO Bao-an DU Chun-ling LU Jun-yu YE Tao; 关键词：INTERLEUKIN-4 ASTHMA

反义白介素4重组腺相关病毒载体气道给药对哮喘大鼠的影响: 2006年; 目的构建携带反义Ⅱ-4基因的重组腺相关病毒(rAAV)真核表达载体,并以此干预大鼠哮喘模型,探讨其作为哮喘基因治疗方案的可行性。方法磷酸钙沉淀法将质粒pasIL-4、pXX2及pXX680共转染293T细胞合成携带反义IL-4基因的重组腺相关病毒(rAAV-asIL4)。Southem blot法检测合成病毒的滴度。rAAV-asIL4在动物实验开始的第1天和第14天2次通过气道给药干预哮喘大鼠(T组),实验中同时设立大鼠正常组(N组)、哮喘组(A组)以及rAAV-GFP干预组(C组)。末次激发后处理大鼠,计数肺泡灌洗液(BALF)中有核细胞以及嗜酸性细胞总数,ELISA检测BALF中IL-4和IgE蛋白量,RT-PCR检测肺组织IL-4 mRNA变化,取肺组织作病理学检查。结果分析BAIF中有核细胞细胞总数和Eos总数,结果表明:T组该2项指标较A组和C组有降低趋势,但这3组间差异无统计学意义(P>0．05)。BALF中IL-4、IgE的ELISA检测结果以及肺组织IL-4 mRNA RT-PCR半定量检测结果表明:T组的上述指标水平较A组和C组均明显降低(P<0．01)。T组大鼠肺组织病理学改变较A组和C组轻。结论携带反义IL-4基因的rAAV载体,对于哮喘的干预具有一定的作用。rAAV-asIL4可能具有一定临床应用前景。; 曹勇熊维宁徐永健张珍祥高宝安杜春玲陆俊羽唐以军; 关键词：哮喘重组腺相关病毒

IL-5反义寡核苷酸对哮喘大鼠CD4^+T淋巴细胞IL-5mRNA和蛋白质表达的影响被引量：3: 2005年; 高宝安熊维宁徐永健张珍祥曹勇唐以军叶涛钟声; 关键词：IL-5 反义寡核苷酸哮喘 CD4 IL-5 蛋白质

筛选反义寡核苷酸抑制哮喘大鼠CD4^+T细胞IL-4表达的研究: 2006年; 目的:探讨不同序列的反义寡核苷酸对哮喘大鼠CD4+T细胞IL4表达的抑制作用。方法:采用脂质体转染技术,将不同的反义寡核苷酸(AS1:反外显子1;AS2:反外显子2;AS3:反翻译终止部位)和空白对照分别转入经免疫磁珠阴性分离的哮喘大鼠CD4+T淋巴细胞,细胞培养28小时后,用ELISA和半定量RTPCR分别检测细胞培养上清IL-4和细胞内IL4mRNA的水平。结果:不同组RTPCR结果(IL4/βactin相对吸光度):AS1、AS2、AS3及空白组分别为0.2615±0.1476、0.2885±0.1411、1.1012±0.3641及1.2068±0.3836(F=22.597,P<0.01)。ELISA检测培养上清液IL-4结果:AS1、AS2、AS3及空白组分别为13.800±7.233、15.329±7.358、52.643±12.075及58.286±14.100(F=34.976,P<0.01)。经AS1、2干预后细胞内IL4-mRNA和细胞培养上清IL4的水平均较AS3和空白组干预后IL-4的水平低(P<0.01)。结论:IL4反义寡核苷酸能够抑制哮喘大鼠CD4+T淋巴细胞IL-4和IL-4mRNA表达;不同序列IL-4反义寡核苷酸抑制作用存在差异。; 曹勇熊维宁徐永健张珍祥高宝安; 关键词：哮喘 IL-4 反义寡核苷酸

抗白介素-5治疗支气管哮喘的研究进展被引量：3: 2010年; 白介素(IL)-5主要由Th2细胞分泌,与气道的慢性炎症和高反应性有关,其在支气管哮喘的发生发展中具有重要作用。近年国内外报道的多项抗IL-5治疗的动物试验和临床研究均取得可喜成果。本文简要介绍抗IL-5治疗方案用于支气管哮喘的疗效及临床地位和研究进展。; 曾大雄熊维宁徐永健; 关键词：支气管哮喘白介素-5

反义IL-5载体构建及其对IL-5 mRNA和蛋白表达的影响被引量：1: 2006年; 目的构建含反义IL-5的重组腺相关病毒(rAAV)asIL-5,观察rAAV asIL-5对哮喘大鼠CD+4T淋巴细胞IL-5mRNA和蛋白表达的影响。方法用基因重组方法构建反义IL5rAAV真核表达载体质粒pasIL-5/rAAV,磷酸钙沉淀法将真核表达载体质粒pasIL-5/rAAV、包装质粒pXX2、辅助质粒pXX6共转染入病毒包装细胞293细胞中,合成rAAV asIL5,Southernblot测重组病毒的滴度;将rAAV asIL5转染经密度梯度法和免疫磁珠法分离的哮喘大鼠CD+4T淋巴细胞,用半定量RT PCR、ELISA分别检测转染后细胞内IL5mRNA及细胞培养上清液中IL-5蛋白的表达水平。结果(1)成功构建并鉴定了rAAV asIL-5,滴度为1.3×1011病毒颗粒/ml;(2)病毒转染孔的相对吸光度值为1.0515±0.1477,低于对照孔(1.4271±0.1655,P<0.01);(3)细胞培养上清液中IL-5的含量病毒转染孔为(12.0840±1.4769)ng/L,低于对照组[(15.3590±1.2685)ng/L,P<0.01]。结论rAAV asIL-5能够抑制哮喘大鼠CD+4T淋巴细胞IL5mRNA和蛋白表达,为研究哮喘的基因治疗提供了实验依据。; 高宝安熊维宁徐永健张珍祥曹勇唐以军叶涛杜春玲; 关键词：腺相关病毒白细胞介素5 基因治疗

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国家自然科学基金(30300144)