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国家自然科学基金(39700102)

作品数：7 被引量：77H指数：4
相关作者：施振旦于迎春刘颖黄运茂邵西兵更多>>
相关机构：华南农业大学东北农业大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇农业科学
  • 3篇生物学

主题

  • 3篇基因
  • 2篇重组蛋白
  • 2篇克隆
  • 2篇家鸡
  • 2篇CDNA
  • 2篇催乳
  • 2篇催乳素
  • 1篇蛋白
  • 1篇多聚
  • 1篇多聚体
  • 1篇血管
  • 1篇血管活性
  • 1篇血管活性肠肽
  • 1篇乙肝
  • 1篇乙肝病毒
  • 1篇乙肝病毒核心...
  • 1篇抑制素
  • 1篇粤黄鸡
  • 1篇脂肪沉积
  • 1篇融合蛋白

机构

  • 6篇华南农业大学
  • 1篇东北农业大学

作者

  • 6篇施振旦
  • 4篇于迎春
  • 3篇邵西兵
  • 3篇刘颖
  • 3篇黄运茂
  • 2篇曹永长
  • 2篇张细权
  • 2篇陈楠
  • 1篇周敏
  • 1篇毕英佐
  • 1篇方梅霞
  • 1篇梁少东
  • 1篇张贵学

传媒

  • 2篇中国兽医学报
  • 1篇Journa...
  • 1篇Zoolog...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇华南农业大学...

年份

  • 2篇2005
  • 1篇2004
  • 1篇2002
  • 2篇2001
共 7 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化被引量：8
2004年
从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m
施振旦邵西兵方梅霞于迎春刘颖陈楠
关键词：CDNA克隆重组蛋白纯化瘦素
禽类血管活性肠肽与乙肝病毒核心抗原融合基因的构建被引量：2
2001年
:在制备以禽类血管活性肠肽 (VIP)为基础的基因工程疫苗工作中 ,选择乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)作为载体来提高鹅VIP的免疫原性 .首先将克隆于鹅VIPcDNA和HBc基因第 1至 435bp的序列片段先后插入到质粒pRSETA的BamHI\EcoRI和NheI\BamHI克隆位点之间 ,构建成VIP序列位于HBc序列之后的VIP融合基因的重组质粒pHBc -VIP .其次将HBc第 1至 2 2 5bp序列的扩增片段和HBc第 2 44bp之后包括VIP的序列经扩增、EcoRI酶切、连接、再扩增的片段先后插入到质粒pBSKS + / -的BamHI\PstI和PstI\HindIII克隆位点 ,构建成VIP插入到HBc基因中间 (HBcAg的第 75和 82位氨基酸之间 )融合基因的重组质粒pVIP HBc .
施振旦黄运茂曹永长毕英佐
关键词：血管活性肠肽乙肝病毒核心抗原融合基因禽类
三个品种家鸡催乳素基因cDNA的克隆及序列分析被引量：58
2001年
从粤黄鸡、丝毛乌骨鸡及伊莎蛋鸡的垂体中快速抽提总ＲＮＡ，根据国外已发表的肉用仔鸡催乳素基因ｃＤＮＡ的序列，设计并合成了能与特定载体末端互补的１对引物，经反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒 ｐＢＳＳＫ连接，克隆后进行序列分析，与已报道的肉用仔鸡、矮脚鸡和火鸡催乳素基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较。结果表明，不同品种间核苷酸同源性介于９３．９７％～９９．８７％之间，其中丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高，为９９．８７％。推导的相应氨基酸序列的同源性在９８．２５％～１００％之间，也是丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高，为１００％。在粤黄鸡、丝毛乌骨鸡和伊莎蛋鸡中，发现前两者的催乳素前体的ｃＤＮＡ片段推导的氨基酸序列中信号肽裂解位点跟肉用仔鸡、矮脚鸡及火鸡的一样，为 Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ，而伊莎蛋鸡的信号肽裂解位点则不一样，为Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ。此位点的差异可能导致催乳素前体翻译加工的不同，使伊莎蛋鸡无就巢性。这３个家鸡品种与国外的肉用仔鸡、矮脚鸡催乳素氨基酸序列还在以下位置出现差异：７１、１４１、１５０、１７５。在肉用仔鸡、丝毛乌骨鸡?
周敏张细权施振旦曹永长
关键词：家鸡催乳素基因克隆CDNA
羊抑制素α亚基N端1-33序列肽段多聚体的构建及其表达纯化被引量：2
2005年
为了提高短肽的免疫原性以制备短肽基因工程疫苗 ,将羊抑制素α亚基N端 1_33氨基酸残基片段的基因序列插入表达质粒pRSET A的BamHⅠ \SacⅠ位点之间构建重组质粒pR INH ,然后利用质粒中的一对同尾酶位点BamHⅠ \BglⅡ和下游的另一酶切位点HindⅢ ,经过简单的酶切后 ,将产物按各种组合连接 ,构建了抑制素串联 2至 6聚体基因。含 3至 6聚体基因的重组质粒pR 3INH、pR 4INH、pR 5INH和pR 6INH经IPTG诱导均能在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1(DE3)中表达目的蛋白 ,分别占菌体蛋白的 6 %、6 %、7%和 8% ,且都以包涵体形式存在。结果说明 ,利用同尾酶切技术可以快速正确地构建短肽片段的串联多聚体重组质粒 ,为构建短肽半抗原的高免疫原性基因工程疫苗提供了新的思路。
黄运茂施振旦于迎春邵西兵
关键词：抑制素同尾酶
鸡Leptin基因正确性的免疫验证被引量：11
2005年
①取20只240日龄的粤黄鸡种母鸡平分为处理组和对照组,分别在第3、31、63和84d对之接种鸡Leptin重组融合蛋白(处理组)或BSA(对照组)1mL/羽。每天记录产蛋率,每10天测定采食量,每两周称重,在试验的第1、31、53、78和91d采血。结果表明Leptin处理组的血浆抗Leptin抗体水平和Leptin水平在免疫后显著高于对照组(P<0.01);第3和4次免疫后处理组产蛋率比对照组显著低约50%(P<0.05);在第98d试验结束时,处理组腹脂量为(115.60±15.07)g,显著高于对照组[(77.98±5.70)g,P<0.05];试验期间处理组的采食量略低于对照组,增重则略高于对照组,但两者差异均不显著(P>0.05);处理组血浆总T3和总T4水平与对照组差异不显著(P>0.05)。②取12只50日龄的粤黄鸡后备小母鸡,平分成处理组和对照组,分别肌注含抗Leptin抗体的卵黄提取液和生理盐水6mL/只,处理组在2、4、6h的累积采食量显著高于对照组(P<0.05),但在8h的累积采食量与对照组差异不显著(P>0.05)。两个试验通过免疫重组鸡Lep tin融合蛋白,使鸡表现出Leptin功能的丧失,证明目前所克隆的鸡Leptin基因在家鸡中的确存在和其正确性。
邵西兵施振旦于迎春刘颖梁少东陈楠
关键词：LEPTIN基因免疫采食量脂肪沉积产蛋率粤黄鸡
鸡催乳素和抑制素-α亚基重组蛋白的构建及表达被引量：6
2002年
将鸡催乳素 (PRL)和抑制素 - α亚基 (INB- α)基因编码序列重组为融合基因 ,制备了同时包含这 2种激素基因的融合蛋白。通过 PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡 PRL成熟肽 c DNA克隆到载体 p RSET A的 Bgl 和 Eco R 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p PRL- RSET。鸡 INB- α片段经扩增后分别被克隆到质粒 p RSET A和 p PRL- RSET的 Nhe 和 Xho 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p INB- RSET和 p INB- PRL。以上重组质粒构建的正确性分别由各特定引物组合扩增的 PCR产物长度、特定限制性内切酶消化各重组质粒所得产物长度以及对各质粒的测序结果得到验证。重组质粒 p PRL- RSET和 p INB- PRL 转化 E.coli BL2 1(DE3)株 ,IPTG诱导后所表达的产物经 SDS- PAGE显示 ,其分别与所预期的重组蛋白分子大小相符。质粒 p PRL - RSET和 p INB- PRL的表达产物和用 Ni- NTA凝胶纯化的 2重组蛋白产物都可与抗鸡 PRL 抗体产生特异的免疫印迹 ,并且表达菌裂解液和相应纯化蛋白的免疫印迹处于同一位置。结果说明 ,试验已成功完成了鸡 PRL、INB-α及 2者融合蛋白的构建。
刘颖施振旦黄运茂于迎春张细权张贵学
关键词：催乳素重组基因融合蛋白基因表达
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